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猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用

董沁芳;郭瑶;汪平;程菊会;徐辉;丁先锋;郭江峰;姜永厚;   

  1. 浙江理工大学生命科学学院;浙江省动物疫病预防控制中心;
  • 出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-02-26
  • 基金资助:
    浙江省科技计划项目(2008C22081);;

  • Published:2012-02-26 Online:2012-02-26

摘要: 为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。

关键词: LDR-PCR, 猪细小病毒, 条件优化, 检测