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受四环素调控的真核表达系统SK-Hep1细胞株的建立

彭晓慧;毛宣;汤顺清;   

  1. 暨南大学生物医学工程系;
  • 出版日期:2012-02-26 发布日期:2012-02-26
  • 基金资助:
    国家“863”项目(2007AA09Z436)

  • Published:2012-02-26 Online:2012-02-26

摘要: 建立稳定、高效表达外源基因的SK-Hep1细胞株,以便进一步研究基因的作用。首先将调控质粒pCDNA6/TR转染SK-Hep1细胞,经潮霉素筛选得到多个稳定单克隆。各个单克隆分别扩大培养后,转染pCDNA4/TO/lacZ质粒,再经过DOX(强力霉素)诱导表达,检测β-半乳糖苷酶(β-D galaetosidase,β-gal)活性,从而筛选出高诱导水平低背景表达的SK-Hep1 tet-on细胞株。最后,再将pCDNA4/TO/c-myc质粒转染进SK-Hep1 tet-on细胞株,进一步通过Western blotting检测该系统对下游基因的表达调控。成功建立了一株受DOX调控的高诱导水平低背景表达的细胞株SK-Hep1 tet-on 10#。

关键词: 强力霉素, 转染, 诱导, 表达调控, SK-Hep1细胞株