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特异性表达siRNA的新型乙肝核酸药物的研究

杨磊;曹以诚;高强;葛洪;   

  1. 华南理工大学生物科学与工程学院;
  • 出版日期:2012-04-26 发布日期:2012-04-26

  • Published:2012-04-26 Online:2012-04-26

摘要: 旨在研究靶向于HBsAg的肝脏特异性siRNA,实现核酸药物高靶向性、高特异性基因治疗乙肝。通过重组PCR的方法构建靶向于HBsAg的肝脏特异性表达的siRNA的核酸药物。将目标载体转染HepG2 2.2.15细胞,用ELISA的方法测定转染细胞培养液内HBsAg的含量。PCR鉴定和测序确定重组PAAV-MCS载体PApoE1-ApoE2-hAAT-siHBsAg-U1 3'Box构建成功。重组质粒对HepG2 2.2.15细胞分泌的HBsAg所产生的抑制作用自转染后5 d达到高峰,抑制率达到(30±0.28)%(P<0.01),siRNA特异性表达单元能显著降低HepG2 2.2.15细胞HBV DNA的拷贝数。成功构建的肝脏特异性、siRNA高表达的核酸药物可以有效地抑制HBV基因的表达和复制,为乙肝的进一步治疗研究做了关键性工作。

关键词: RNAi, 肝脏特异性siRNA, 重组PCR, HepG22.2.15细胞, ELISA