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蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化

杨辉;吴崇超;陈佳;陈伟;杨依丽;罗勇;姚冬生;熊盛;   

  1. 暨南大学生物医药研究开发基地;
  • 出版日期:2012-05-26 发布日期:2012-05-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金面上项目(30873082);;

  • Published:2012-05-26 Online:2012-05-26

摘要: 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度>98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。

关键词: 蓝藻抗病毒蛋白-N, 连接肽, 发酵, 纯化