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赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化

黄云雁;黎明;刘萌;孙昕;周丽颖;路福平;   

  1. 天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室工业酶国家工程实验室天津市工业微生物重点实验室;
  • 出版日期:2012-08-26 发布日期:2012-08-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(21176910);;

  • Published:2012-08-26 Online:2012-08-26

摘要: 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。

关键词: 尸胺, 赖氨酸-尸胺反向转运蛋白CadB, 谷氨酸棒杆菌, 赖氨酸脱羧酶, 共表达