]*>","")" /> 硫酸乙酰肝素3-O硫酸基转移酶5的表达、纯化及酶学性质研究

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硫酸乙酰肝素3-O硫酸基转移酶5的表达、纯化及酶学性质研究

陕婧婧;窦文芳;李会;张旦旦;许泓瑜;陈敬华;许正宏;   

  1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室;江南大学医药学院制药工程研究室;
  • 出版日期:2012-08-26 发布日期:2012-08-26

  • Published:2012-08-26 Online:2012-08-26

摘要: 经过PCR克隆得到硫酸乙酰肝素3-O硫酸基转移酶5(3-OST-5)的基因,将其与大肠杆菌表达载体pET-15b连接后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,使用镍亲和层析柱纯化得到具有活性的3-OST-5。经测定纯化后的3-OST-5比活达到0.58 U/mg,是纯化前的5.27倍,回收率达80.4%。在此基础上,研究了该酶的酶学性质,酶反应的最适温度为35℃,稳定范围为20-40℃;最适pH为7.0,在pH7.0-9.0范围内稳定。在反应液中加入终浓度为1 mmol/L的K+、Ca2+、Ba2+对酶促反应有一定的促进作用。

关键词: 硫酸乙酰肝素, 3-O硫酸基转移酶5, 表达, 纯化, 酶学性质