重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定

刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春;

北京化工大学生命科学与技术学院;

出版日期:2012-09-26 发布日期:2012-09-26

Published:2012-09-26 Online:2012-09-26

摘要/Abstract

摘要： 建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法。将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7%。最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。

关键词: 重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ, 尿素梯度, 凝胶过滤, 包涵体, 复性, 酶活

刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春;. 重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定[J]. .

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