TRIP-1抗体的制作及应用

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (3): 139-143.

TRIP-1抗体的制作及应用

张宏玲,万骏,董一辰,曹威,张新胜,张锦勰,黄来强

1. 清华大学生命科学学院，北京 100084 ；2. 清华大学深圳研究生院生命与健康学部生物医药研究中心和基因与抗体治疗重点实验室，深圳 518055

收稿日期:2012-08-24 修回日期:2013-03-21 出版日期:2013-03-20 发布日期:2013-03-21
作者简介:张宏玲，女，博士研究生，研究方向：细胞生物学；E-mail ：zhanghl08@mails.tsinghua.edu.cn
基金资助:
国家自然科学基金项目（30570960，30900749），深圳市重点实验室建设与提升计划

The Production and Application of TRIP-1 Antibody

Zhang Honglin,g Wan Jun, Dong Yichen, Cao Wei, Zhang Xinsheng, Zhang Jinxie, Huang Laiqiang

1. School of Life Sciences,Tsinghua University,Beijing 100084；2. The Shenzhen Key Lab of Gene and Antibody Therapy,Center for Biotech & Biomedicine and Division of Life & Health Sciences,Graduate School at Shenzhen,Tsinghua University,Shenzhen 518055）

Received:2012-08-24 Revised:2013-03-21 Published:2013-03-20 Online:2013-03-21

摘要/Abstract

摘要： 旨在制作TGF-β 二型受体结合蛋白TRIP-1 的抗体，以便推进对该蛋白在TGF-β 信号通路以及癌症发生发展中的功能研究。首先克隆出人的TRIP-1 基因，构建其原核重组表达载体pET-His-TRIP-1，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，诱导获得TRIP-1 蛋白，纯化后将其分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠（KM），免疫4 次后取血清，并对抗血清进行效价和亲和力测定。通过Western blot 和免疫荧光试验鉴定抗血清特异性。最后，利用proteinG 初步纯化抗血清。结果表明，通过重组表达获得抗原蛋白，纯化后免疫新西兰大耳兔和昆明鼠可得到效价较高的抗TRIP-1 的多克隆抗体，在稀释倍数较高的情况下仍可以用于Western blot 和免疫荧光试验，且有非常好的特异性。

关键词: 原核表达纯化, TRIP-1, 蛋白, 动物免疫, 抗血清, 抗体鉴定

Abstract: To produce antibody against the TGF-β type II receptor binding protein, TRIP-1, contributing to study TRIP-1’s function in TGF-β signaling pathway and cancer development. Human’s TRIP-1 gene was cloned into the prokaryotic expression vector of pET-His, and then transformed into E. coli BL21 to induce TRIP-1 protein expression. Purified TRIP-1 protein was used to immunize New Zealand rabbits and Kunming mice（KM）. The serum was removed and the titer and affinity was determined after immunization 4 times. The antiserum was highly purified by proteinG. Results indicated that the titer of the anti-serum from murine and rabbit are high enough for Western blot and immunofluorescence assay.

Key words: Prokaryotic expression and purification TRIP-1, Animal immunization, Anti-serum, Antibody identification

张宏玲,万骏,董一辰,曹威,张新胜,张锦勰,黄来强. TRIP-1抗体的制作及应用[J]. 生物技术通报, 2013, 0(3): 139-143.

Zhang Honglin,g Wan Jun, Dong Yichen, Cao Wei, Zhang Xinsheng, Zhang Jinxie, Huang Laiqiang. The Production and Application of TRIP-1 Antibody[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(3): 139-143.

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