马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (3): 70-76.

马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用

霍晓辉,申永梅,刘国富,曹雪松

聊城大学生命科学学院，聊城 252059

收稿日期:2012-09-20 修回日期:2013-03-21 出版日期:2013-03-20 发布日期:2013-03-21
作者简介:霍晓辉，女，硕士研究生, 研究方向：分子植物病毒学; E-mail ：xiaohui198720062006@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（30870109）

P0 of Potato Leafroll Virus Suppress RNA Silencing and Its Interaction with AGO Protein

Huo Xiaohui, Shen Yongmei, Liu Guofu, Cao Xuesong

College of life Science,Liaocheng University,Liaocheng 252059）

Received:2012-09-20 Revised:2013-03-21 Published:2013-03-20 Online:2013-03-21

摘要/Abstract

摘要： 马铃薯卷叶病毒（Potato leafroll virus，PLRV）P0 是由开放阅读框1（ORF1）所编码，利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白（GFP）基因的16c 烟草叶片发现PLRV-P0 能够抑制由GFP mRNA 引起的基因沉默，结果表明PLRV-P0 是马铃薯卷叶病毒编码的一个基因沉默抑制因子。通过序列分析发现PLRV-P0 基因序列中含有两个重复的WG 基序，我们将PLRV-P0 基因序列中第87 位和第140 位的色氨酸（W）点突变为丙氨酸（A）（命名为P0WA），构建植物表达载体 pCAMBIA1300-CE-P0，pCAMBIA1300-CE-P0WA，农杆菌渗透注射本氏（Nicotiana benthamiana）烟草叶片，通过荧光显微镜观察发现PLRV-P0 和AGO 共同注射后有绿色荧光出现而PLRV-P0WA 和AGO 共同注射后则没有绿色荧光出现。研究结果初步表明， PLRV-P0 能够和AGO 蛋白发生相互作用，重复的WG 基序是其与AGO 蛋白相互作用的关键氨基酸。

关键词: 马铃薯卷叶病毒（PLRV）, P0蛋白, 抑制RNA, 沉默, AGO, 蛋白, 相互作用

Abstract: P0 of Potato leafroll virus is encoded by the open reading frame1（ORF1）. Here we show that P0 of Potato leafroll virus （PLRV）displays strong silencing suppressor activity in a transient expressin assay based upon its ability to inhibit PTGS of green flurescent protein（GFP）mRNA when expressed in agro-infitraten leaves of Nicotiana benthamiana containing a GFP transgene（16c）.We found PLRV-P0 gene sequence containing two duplicate WG motif by sequence analysising. The 87 and 140 Tryptophan（W）of Potato leafroll virus P0 gene were mutated by Alanine（A）（named P0WA）, the plant expression vector pCAMBIA1300-CE-P0, pCAMBIA1300-CE-P0WA was constructed. We found that there was green fluorescent under fluorescence microscopy after PLRV-P0 and AGO co-injection when expressed in agro-infiltraten leaves of Nicotiana benthamiana. However, there was not green fluorescent under fluorescence microscopy after PLRV-P0WA and AGO co-injection.We conclude that the PLRV-P0 interacted with AGO protein and repeated WG motif was the key amino acids.

Key words: Potato leafroll virus（PLRV）, P0 protein, Suppressin of RNA silencing, AGO protein Interaction

霍晓辉,申永梅,刘国富,曹雪松. 马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用[J]. 生物技术通报, 2013, 0(3): 70-76.

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