LAMP实时浊度法检测转基因植物NPTⅡ基因

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (3): 60-64.

LAMP实时浊度法检测转基因植物NPTⅡ基因

邝筱珊, 胡松楠, 王小玉, 唐食明, 成晓维, 冯家望

(珠海出入境检验检疫局技术中心，珠海 519015)

收稿日期:2014-01-08 出版日期:2014-03-29 发布日期:2014-03-31
作者简介:邝筱珊，女，工程师，硕士，研究方向:食品安全检测；E-mail:carrolkuang@163.com
基金资助:
国家质检总局科技计划项目(2011IK255)

Development of a Real-time Turbidimeter-based LAMP Method for Detection of NPTⅡ Gene in the Genetically Modified Plant

Kuang Xiaoshan, Hu Songnan, Wang Xiaoyu, Tang Shiming, Cheng Xiaowei, Feng Jiawang

(The Inspection Technical Center of Zhuhai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Zhuhai 519015)

Received:2014-01-08 Published:2014-03-29 Online:2014-03-31

摘要/Abstract

摘要： 根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列，设计6条特异性LAMP引物，利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物，最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法，并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明，该方法能够特异性检出含有NPTⅡ基因的植物及其加工产品，特异性高，灵敏度达0.5%。对转基因玉米MON863(含NPTⅡ基因)含量为10%、1%、0.5%、0%(W/W)的样品DNA分别进行扩增，其稳定性好，无假阳性和假阴性。所建立的LAMP方法适用于特异性筛选检测含NPTⅡ基因的植物及其加工样品。

关键词: 环节导等温扩增法(LAMP), 实时浊度仪, 新霉素-3&apos, -磷酸转移酶基因, 转基因, 检测

Abstract: According to NPTⅡ gene(HE582394.1), the common selective marker gene of genetically modified plant(GMP), six specific primers were designed. A loop-mediated isothermal amplification(LAMP)method for screening GMP was established. Real-time monitoring of the LAMP reaction was achieved by a turbidimeter. Specificity, sensitivity, stability and repeatability of this method were tested. The results showed that the method can specifically detect NPTⅡ gene, and the detection sensitivity of the method was 0.5%. With the genetically modified maize MON863(NPTⅡ positive)samples of 10%, 1%, 0.5%, 0%(W/W)as templates, stability and repeatability testing was conducted, and false negative rate was 0. The results showed that the LAMP method is suitable for specifically detecting NPTⅡ gene in GMP.

Key words: Loop-mediated isothermal amplification(LAMP),real-time turbidimeter, NPTII, Genetically modified organisms, Detection

邝筱珊, 胡松楠, 王小玉, 唐食明, 成晓维, 冯家望. LAMP实时浊度法检测转基因植物NPTⅡ基因[J]. 生物技术通报, 2014, 0(3): 60-64.

Kuang Xiaoshan, Hu Songnan, Wang Xiaoyu, Tang Shiming, Cheng Xiaowei, Feng Jiawang. Development of a Real-time Turbidimeter-based LAMP Method for Detection of NPTⅡ Gene in the Genetically Modified Plant[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(3): 60-64.

参考文献

[1] 郭桦, 郭祀远.转基因食品安全性的探讨[J].现代食品科技, 2007, 23(8):71-73.
[2] 李俊, 郑秀丽, 邓平建, 等.商品化转基因植物的外源基因及其检测技术[J].中国农业科技导刊, 2008, 10(3):31-39.
[3] Fuchs RL, Ream JE, Hammond BG, et al. Safety assessment of the neomycin phosphotransferaseII(NPTII)protein[J].Biotechnology, 1993, 11(13):1293-1543.
[4] Asensio L, Gonzalez I, Garcia T, et al. Determination of food authenticity by enzme-linked immunosorbent assay(ELISA)[J].Food Control, 2008, 19:1-8
[5] 丁耀魁, 沈娟, 马黎黎.快速检测试纸条法在大豆转基因检测中的应用[J] . 粮油食品科技, 2010, 18(2):45-46.
[6] Morisset D, Stebih D, Cankar K, et al. Alternative DNA amplification methods PCR and their application in GMO detection:a review[J]. Eur Food Res Technol, 2008, 277:1287-1297.
[7] Hernandez M, Esteve T, Prat S, et al. Development of real-time PCR systems based on SYBR? Green I, Amplifluor^TM and TaqMan? techno-logies for specific quantitative detection of the transgenic maize event GA21[J]. Journal of Cereal Science, 2004, 39(1):99-107.
[8] Liu G, Su W, Xu Q, et al.Liquid-phase hybridization based PCR ELISA for detection of genetically modified organisms in food[J].Food Control, 2004, 15(4):303-306.
[9] Volpe G, Ammid NH, Moscone D, et al. Development of an immuno-magnetic electrochemical sensor for detection of BT CRY1AB/CRY-1AC proteins in genetically modified corn samples[J].Anal Lett, 2006, 39(8):1599-1609
[10] Leimanis S, Hernandez M, Fernandez S, et al. A microarray based detection system for genetically modified(GM)food ingredients[J].Plant Molecular Biology, 2006, 61(1):123-139.
[11] Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, et al.Loop-mediated isothe-rmal amplification of DNA[J].Nucleic Acids Research, 2000, 28(12):e63.
[12] Clive J. 2011年全球生物技术／转基因作物商业化发展态势[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(1):1-14.
[13] 李全芬, 李志辉, 王慧翌, 等.转基因生物检测技术研究进展[J].中国畜牧兽医, 2011, 38(1):152-156.
[14] 陈超, 展进涛.国外转基因标识政策的比较及其对中国转基因标识政策制定的思考[J].世界农业, 2007, 11(7):17-20.

[1]	刘玉玲, 王梦瑶, 孙琦, 马利花, 朱新霞. 启动子RD29A对转雪莲SikCDPK1基因烟草抗逆性的影响[J]. 生物技术通报, 2023, 39(9): 168-175.
[2]	王贵芳, 姚元涛, 许海峰, 相昆, 梁家慧, 张淑辉, 王文茹, 张明娟, 张美勇, 陈新. 核桃JrSnRK1α1.1调控种子油脂合成与积累[J]. 生物技术通报, 2023, 39(9): 183-191.
[3]	余慧, 王静, 梁昕昕, 辛亚平, 周军, 赵会君. 宁夏枸杞铁镉响应基因的筛选及其功能验证[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 195-205.
[4]	朱少喜, 金肇阳, 葛建镕, 王蕊, 王凤格, 路运才. 基于KASP平台的转基因玉米高通量特异性检测方法[J]. 生物技术通报, 2023, 39(6): 133-140.
[5]	张雪萍, 鲁雨晴, 张月倩, 李晓娟. 植物细胞外囊泡及其分析技术的进展[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 32-43.
[6]	马芳芳, 刘冠闻, 庞冰, 蒋春美, 师俊玲. 强化细胞外排提高工程菌类黄酮产量的策略[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 63-76.
[7]	崔吉洁, 蔡文波, 庄庆辉, 高爱平, 黄建峰, 陈亚辉, 宋志忠. 杧果Fe-S簇装配基因MiISU1的生物学功能[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 139-146.
[8]	杜清洁, 周璐瑶, 杨思震, 张嘉欣, 陈春林, 李娟起, 李猛, 赵士文, 肖怀娟, 王吉庆. 过表达CaCP1提高转基因烟草对盐胁迫的敏感性[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 172-182.
[9]	鄢梦雨, 韦晓薇, 曹婧, 兰海燕. 异子蓬SabHLH169基因的克隆及抗旱功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 328-339.
[10]	陶娜, 李茂兴, 郭华春. 发根农杆菌介导的甘薯遗传转化体系优化[J]. 生物技术通报, 2023, 39(10): 175-183.
[11]	于惠林, 吴孔明. 中国转基因大豆的产业化策略[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 1-15.
[12]	陈晓琳, 刘洋儿, 许文涛, 郭明璋, 刘慧琳. 合成生物学细胞传感技术在食品安全快速检测中的应用[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 137-149.
[13]	解伟, 刘春明. 生物育种产业化面临的机遇与政策保障[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 16-20.
[14]	李圣彦, 李香银, 李鹏程, 张明俊, 张杰, 郎志宏. 转基因玉米2HVB5的性状鉴定及遗传稳定性分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 21-30.
[15]	李东阳, 肖冰, 王晨尧, 杨现明, 梁晋刚, 吴孔明. 转基因抗虫耐除草剂玉米瑞丰125 Cry1Ab/Cry2Aj杀虫蛋白的时空表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 31-39.