细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (6): 192-198.

细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示

徐丽香, 王作镇, 舒正玉, 武海龙, 刘艳如, 李欣, 黄建忠

（1. 福建师范大学工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心，福州 350108；2. 福建师范大学教育部工业微生物工程中心，福州 350108；3. 福建师范大学生命科学学院，福州 350108）

收稿日期:2014-02-12 出版日期:2014-06-25 发布日期:2014-06-25
作者简介:徐丽香，女，研究方向：酶工程；E-mail：897787452@qq.com；王作镇同为本文第一作者
基金资助:
国家自然科学基金项目（31370802），福建省科技厅重点项目（2013H0021），福建省自然科学基金杰青项目（2009J06013）

Display of Functionally Active Lipases on the Escherichia coli Cell Surface

Xu Lixiang, Wang Zuozhen, Shu Zhengyu, Wu Hailong, Liu Yanru, Li Xin, Huang Jianzhong

（1. National & Local United Engineering Research Center of Industrial Microbiology and Fermentation Technology, Ministry of Education, Fujian Normal University, Fuzhou 350108；2. Engineering Research Center of Industrial Microbiology, Ministry of Education, Fujian Normal University, Fuzhou 350108；3. College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou 350108）

Received:2014-02-12 Published:2014-06-25 Online:2014-06-25

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摘要/Abstract

摘要： 细胞表面展示技术已广泛应用于突变文库的高通量筛选，有力地促进了蛋白质工程的发展。以来自于铜绿假单胞菌的自转运蛋白Est A的羧基端结构域作为锚定区，构建脂肪酶LipA与EstA羧基端结构域的融合基因，并将融合基因插入到改造后的pACYC-Duet表达载体中，获得表面展示载体pBCCB-X1。将载体pBCCB-X1分别导入到大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600菌株中，以IPTG诱导融合基因的表达。分别用三丁酸甘油酯定性检测和pNPO定量检测诱导表达后的全细胞脂肪酶的水解活性。试验结果表明，脂肪酶LipA在大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600细胞表面均得到功能性展示，水解活性分别为（2.8±0.1）U/OD和（2.6±0.06）U/OD。脂肪酶LipA在大肠杆菌细胞表面的功能性展示，为后续高通量筛选LipA突变基因文库，奠定了坚实的基础。

关键词: 大肠杆菌, 细胞表面展示, 脂肪酶A, 枯草芽胞杆菌

Abstract: Abstract: Cell-surface display technology was used widely in the filed of high throughput screening of a mutant library, which promoted the development of protein engineering. The carboxyl terminal domain of the EstA from Pseudomonas aeruginosa was used as carrier protein and the lipA gene was fused to the estA’ gene by overlap extension PCR. The fusion gene lipA-estA’ was then inserted the genetically modified plasmid pACYC-Duet, which promoter was changed into lacZ promoter. The resulting plasmid pBCMB-X1 was transformed into E. coli JK321 and E. coli UT5600, respectively. The lipA gene was induced expression by IPTG and the recombinant LipA was functionally displayed on the cell surface of E. coli JK321 and E. coli.UT5600, respectively. The hydrolysis activity of the LipA was（2.8±0.1）U/OD and（2.6±0.06）U/OD, respectively.

Key words: Escherichia coli, Cell surface display Lipase, A, Bacillus subtilis

引用本文

徐丽香, 王作镇, 舒正玉, 武海龙, 刘艳如, 李欣, 黄建忠. 细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示[J]. 生物技术通报, 2014, 0(6): 192-198.

Xu Lixiang, Wang Zuozhen, Shu Zhengyu, Wu Hailong, Liu Yanru, Li Xin, Huang Jianzhong. Display of Functionally Active Lipases on the Escherichia coli Cell Surface[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(6): 192-198.

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