一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.011

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (12): 67-72.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.011

一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立

范晶¹ ,李仲芳^1,2, 高明辉¹ ,伏秦超¹

1. 乐山师范学院生命科学学院，乐山 614004; 2. 天水师范学院生命科学与化学学院，天水 741001

收稿日期:2014-06-17 出版日期:2014-12-08 发布日期:2014-12-12
作者简介:范晶，男，博士，副教授，研究方向:植物分子生物学;E-mail:fanjing972001@sohu.com
基金资助:
乐山师范学院科研项目(Z1201)，乐山师范学院峨眉山生物多样性保护与利用研究所科研项目(12S01)

Establishment of a DNA Extraction Method Suitable for RAPD Analysis of Trace Arnounts of Camellia japonica L.

1Fan Jing,^1,2Li Zhongfang,¹Gao Minghui,¹Fu Qinchao

(1. College of Life Science, Leshan Normal University, Leshan 614004; 2. College of Life Science and Chemistry, Tianshui Normal University, Tianshui 741001)

Received:2014-06-17 Published:2014-12-08 Online:2014-12-12

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种满足 RAPD-PCR 分析的简便且高产率微量山茶基因组 DNA 提取方法，探索了在无液氮条件下，采用简化试验步骤的改良 CTAB、SDS 和 Triton X-100 方法分别提取山茶新鲜和干燥叶片 DNA，通过光谱扫描和测定 DNA 在波长 230 nm， 260 nm 和 280 nm 时的吸光度，比较不同 DNA 提取方法、材料保存方法以及材料用量对 DNA 提取效率的影响。结果表明，干燥叶片比新鲜叶片更适合作为 DNA 提取材料，改良 CTAB 法在提取干燥山茶 DNA 时纯度和产率较理想，其 A260/A280 值为 1.595-1.736，每克叶片可得到 230-295 μg DNA，高质量 DNA 经 RAPD-PCR 扩增可获得清晰扩增条带。100 mg 干燥山茶叶片适合获得高纯度和高产率的 DNA，增加材料用量可增大 DNA 总量，但也增加了 DNA 中杂质含量。

关键词: DNA, 提取, RAPD, 山茶, 改良, CTAB方法

Abstract: To explore a simple and high yield method for preparing DNA suitable for RAPD analysis, trace fresh and dried leaves of Camellia japonica L. were used as materials. Moreover, the improved CTAB, SDS and Triton X-100 methods without using liquid nitrogen were compared. The efficiencies of different DNA extraction methods, the effects of material preservation and material amounts on DNA qualities were compared based on the absorbance spectrum and ratio of absorbance at 230 nm, 260 nm and 280 nm by Ultraviolet Spectrophotometry. Results showed that dried materials were more suitable for DNA extraction than fresh materials. The improved CTAB protocol for isolating DNA from dried leaf tissues gave satisfied results, with the ratio of A260/A280 ranged from 1.595 to 1.736. Furthermore, the DNA yield reached 230 to 295 μg per gram of leaf. Finally, clear amplified bands were detected by RAPD-PCR. High quality and high yield genomic DNA could be prepared from 100 mg dried leaves of Camellia japonica L., an increase in materials leads to the increased in DNA amount, however, impurity was also increased.

Key words: DNA extraction, RAPD, Camellia japonica L., Improved, CTAB protocol

范晶 ,李仲芳, 高明辉 ,伏秦超. 一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立[J]. 生物技术通报, 2014, 0(12): 67-72.

1Fan Jing,Li Zhongfang,Gao Minghui,Fu Qinchao. Establishment of a DNA Extraction Method Suitable for RAPD Analysis of Trace Arnounts of Camellia japonica L.[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(12): 67-72.

参考文献

[1] 陈睿, 鲜小林, 秦帆, 等. 四川观赏用山茶资源及景观应用研究[J]. 北方园艺, 2012, 11: 97-101.
[2] 李仲芳, 杨霞, 谢孔平, 等. 乐山茶花品种资源调查报告Ⅱ[J]. 南方农业学报, 2012, 43(9)：1357-1362.
[3] 李仲芳, 杨霞, 高彦明. 乐山茶花品种资源调查报告[J]. 北方园艺, 2011(20)：86-89.
[4] 胡欢, 杨述章, 李仲芳, 等. 30 种茶花过氧化物酶同工酶分析[J]. 四川师范大学学报, 2013(, 2)：296-301.
[5] Umar KM, Mohammed AS, Radu S, et al. Extraction and isolation of PCR amplifiable genomic DNA from Camellia sinensis(L.) Kuntze[J]. Food, Agriculture and Environment, 2011, 9(3-4)： 529-532.
[6] 陈析丰, 查笑君, 范文杰, 等. 山茶花叶片 DNA 提取及 RAPD 反应体系的研究[J]. 植物研究, 2007, 27(2)：219-220.
[7] 魏群. 分子生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社 , 2007: 113-114.
[8] 田杰, 罗科. 水稻总 DNA 的快速制备[J]. 应用与环境生物学报, 2004, 10(2)：143-145.
[9] 吴波, 高丹, 潘超美, 等. 不同方法提取吴茱萸叶片基因组 DNA 和 RNA 的比较[J]. 安徽农业大学学报, 2012, 39(1)： 111-115.
[10] 戴剑, 洪德林, 张大栋, 等. 一种快速高效的 DNA 提取方法研究[J]. 麦类作物学报, 2011, 31(3)：437-442.
[11] 李娟, 江昌俊, 王朝霞. 中国茶树初选核心种质遗传多样性的 RAPD 分析[J]. 遗传, 2005, 27(5)：765-771.
[12] Chen SX, Qi GN, Li H, et al. Rapid establishment of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)system for chloroplast DNA in tea[Camellia sinensi(s L.)O. Kuntze] [J]. African Journal of Biotechnology, 2012, 11(33)： 8181-8188.
[13] 刘婵, 王博, 段青, 等. 滇山茶基因组 DNA 不同提取方法效果比较[J]. 江苏农业科学, 2011, 6: 49-50.
[14] Yang CF, Chen BL, Huang CM, et al. Isolation of genomic DNA and establishment of ISSR reaction system for Camellia crepnelliana Tutch[J]. Journal of Southern Agriculture, 2011, 42(3)：233-235.
[15] Lin JK, KudrnaD, Rod AW. Preparation of high molecular weight (HMW)genomic DNA from tea plant(Camellia sinensis)for BAC library construction[J]. Journal of Agricultural Science and Technology, 2009, 3(1)：1-10.
[16] 谭晓风, 漆龙霖, 黄晓光, 等. 山茶属植物叶片 DNA 抽提[J]. 中南林学院学报, 1999(4)：75-77.
[17] 倪穗, 田敏, 李纪元. 红山茶高质量基因组 DNA 的提取[J]. 宁波大学学报, 2007, 20: 163-167.
[18] 林立, 倪穗, 李纪元, 等. 中日 5个岛屿山茶种群遗传多样性研究[J]. 广西植物, 2012, 32(3)：298-303.
[19] 周阿涛, 岳亮亮, 李旻, 等. 云南山茶(Camellia reticulata) nrDNA nrDNA ITS 序列多态性分析[J]. 植物科学学报, 2013, 31(1)：1-10.
[20] 骆文华, 黄仕训, 马虎生, 等. 广西火桐基因组 DNA 提取方法的研究[J]. 湖北农业科学, 2013, 52(20)：5060-5062.
[21] 代文娟, 唐文秀, 邓涛, 等. 狭叶坡垒基因组总 DNA 的提取和纯化方法研究[J]. 生物技术通报, 2011(7)：101-105.

一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立

Establishment of a DNA Extraction Method Suitable for RAPD Analysis of Trace Arnounts of Camellia japonica L.

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	王子颖, 龙晨洁, 范兆宇, 张蕾. 利用酵母双杂交系统筛选水稻中与OsCRK5互作蛋白[J]. 生物技术通报, 2023, 39(9): 117-125.
[2]	温晓蕾, 李建嫄, 李娜, 张娜, 杨文香. 小麦叶锈菌与小麦互作的酵母双杂交cDNA文库构建与应用[J]. 生物技术通报, 2023, 39(9): 136-146.
[3]	韩浩章, 张丽华, 李素华, 赵荣, 王芳, 王晓立. 盐碱胁迫诱导的猴樟酵母cDNA文库构建及CbP5CS上游调控因子筛选[J]. 生物技术通报, 2023, 39(9): 236-245.
[4]	李英, 岳祥华. DNA甲基化在解析毛竹自然变异中的应用[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 48-55.
[5]	游子娟, 陈汉林, 邓辅财. 鱼皮生物活性肽的提取及功能活性研究进展[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 91-104.
[6]	姚近东, 汤华妹, 杨文霄, 张丽珊, 林向民. 恩诺沙星胁迫下嗜水气单胞菌的比较蛋白质组学研究[J]. 生物技术通报, 2023, 39(4): 288-296.
[7]	李天顺, 李宸葳, 王佳, 朱龙佼, 许文涛. 功能核酸筛选过程中次级文库的有效制备[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 116-122.
[8]	祝瑛萱, 李克景, 何敏, 郑道琼. 酵母模型揭示胁迫因子驱动基因组变异的研究进展[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 191-204.
[9]	段敏杰, 李怡斐, 杨小苗, 王春萍, 黄启中, 黄任中, 张世才. 辣椒锌指蛋白DnaJ-Like基因家族鉴定及对高温胁迫的表达响应[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 187-198.
[10]	张淼, 杨露露, 贾岩龙, 王天云. DNA甲基化和组蛋白甲基化修饰的表观遗传调控作用研究进展[J]. 生物技术通报, 2022, 38(7): 23-30.
[11]	王晨晨, 张凡丽, 陈珮琪, 翁思瑶, 王慧芳, 崔小娟. 哺乳动物DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3结构与功能的研究进展[J]. 生物技术通报, 2022, 38(7): 31-39.
[12]	申恒, 刘思慧, 李跃, 李敬涛, 梁文星. 一种用于PCR的番茄DNA快速粗提方法[J]. 生物技术通报, 2022, 38(6): 74-80.
[13]	易芳, 来鹏程, 郑希鳌, 胡帅, 高燕丽. Kod DNA聚合酶的制备及纯化研究[J]. 生物技术通报, 2022, 38(5): 183-190.
[14]	李然, 钱前, 高振宇. 水稻品质的遗传与育种改良研究进展[J]. 生物技术通报, 2022, 38(4): 4-19.
[15]	杨青青, 唐家琪, 张昌泉, 高继平, 刘巧泉. KASP标记技术在主要农作物中的应用及展望[J]. 生物技术通报, 2022, 38(4): 58-71.