人C反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及免疫反应性分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.026

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (3): 166-170.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.026

人C反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及免疫反应性分析

李江峰,矫丽媛,赵晓妮,王继华,才蕾

广州万孚生物技术股份有限公司, 广州 510660

收稿日期:2015-05-20 出版日期:2016-03-24 发布日期:2016-03-25
作者简介:李江峰, 硕士研究生, 研发工程师, 研究方向；E-mail：lijiangfeng511@163.com
基金资助:
国家重点研发计划(2012BAI19B05)

The Expression and Immunoreactive Analysis of Recombinant Human C-reactive Protein in Different Prokaryotic Expression Vectors and Strains

LI Jiang-feng, JIAO Li-yuan, ZHAO Xiao-ni, WANG Ji-hua, CAI Lei

Guangzhou Wondfo Biotech Co., Ltd, Guangzhou 510660

Received:2015-05-20 Published:2016-03-24 Online:2016-03-25

摘要/Abstract

摘要： 构建人C反应蛋白(CRP)原核表达载体, 并分别将其转化进入E.coli BL21(DE3)和Rosetta gami 2(DE3)pLysS中, 诱导CRP重组蛋白的表达；主要运用了基因工程, 亲和层析及透析复性等方法。成功构建了CRP原核表达载体及菌株。经IPTG诱导后, 得到了不同的重组CRP蛋白。结果表明, 相同表达载体在不同的表达菌株中的表达情况有一定差别, 分别在大肠杆菌及Rosetta gami2(DE3)pLysS中表达并得到了重组CRP的包涵体, 对复性后的CRP重组蛋白进行Westen blotting及ELISA检测, 结果表明原核表达的重组CRP蛋白的免疫反应性很低, CRP蛋白发挥免疫活性需要以五聚体形式存在。

关键词: C反应蛋白, 原核表达, 包涵体, 复性

Abstract: The prokaryotic expression vector of human C-reactive protein(CRP)was constructed and transferred into Escherichia coli BL21(DE3)and Rosetta gami2(DE3)pLysS, respectively, and then these recombinant strains were induced for the expression of CRP. Mainly gene engineering, affinity chromatography and dialysis refolding methods were employed. The expression vectors and recombinant strains of human CRP were constructed successfully, and the varied CRPs with different protein tags were acquired by IPTG. In conclusion, expressions of the same vector in different strains differed；it expressed in the E. coli BL21(DE3)and Rosetta gami2(DE3)pLysS respectively, and the inclusion bodies of recombinant CRP were obtained. The results of detecting the refolded recombinant CRP by Western blotting and ELISA revealed that the immunoreactivity of recombinant CRP in the prokaryotic expression vector was low, and CRP may have the immunoreactivity while it is in the pentamer form.

Key words: C-reactive protein, prokaryotic expression, inclusion bodies, refolding.

李江峰,矫丽媛,赵晓妮,王继华,才蕾. 人C反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及免疫反应性分析[J]. 生物技术通报, 2016, 32(3): 166-170.

LI Jiang-feng, JIAO Li-yuan, ZHAO Xiao-ni, WANG Ji-hua, CAI Lei. The Expression and Immunoreactive Analysis of Recombinant Human C-reactive Protein in Different Prokaryotic Expression Vectors and Strains[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(3): 166-170.

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人C反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及免疫反应性分析

The Expression and Immunoreactive Analysis of Recombinant Human C-reactive Protein in Different Prokaryotic Expression Vectors and Strains

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