维生素K2合成途径中主要酶对MK-7产量的影响

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.032

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (11): 248-254.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.032

维生素K₂合成途径中主要酶对MK-7产量的影响

徐建中, 王颖妤, 严为留, 张伟国

江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,无锡 214122

收稿日期:2016-04-19 出版日期:2016-11-25 发布日期:2016-11-11
作者简介:徐建中,男,博士,研究方向：菌种选育及代谢调控;E-mail：xujz126@126.com
基金资助:
项目名称：江苏省自然科学基金-青年基金项目（BK20150149）

Effects of Major Enzymes in the Biosynthetic Pathway of Vitamin K₂on MK-7 Production

XU Jian-zhong, WANG Ying-yu, YAN Wei-liu, ZHANG Wei-guo

The Key Laboratory of Industrial Biotechnology,Ministry of Education,School of Biotechnology,Jiangnan University,Wuxi 214122

Received:2016-04-19 Published:2016-11-25 Online:2016-11-11

摘要/Abstract

摘要： 对菌株Y-2维生素K₂合成途径中的6个主要酶基因分别进行克隆和表达,以探索不同酶基因对MK-7产量的影响。参照《分子克隆实验指南》完成对基因重组质粒的构建,并对spizizen转化法进行改进,实现重组质粒对菌株Y-2的转化。结果表明,分别过量表达维生素K₂合成途径中的6个基因均能提高MK-7的产量。需要指出的是,过表达基因hep S对MK-7产量的影响最大,其中在摇瓶培养组的产量提高了38%,静置培养组的产量提高了48%。其余几个基因过表达后对MK-7产量的影响则根据培养方式的不同而各有差异。

关键词: 解淀粉芽孢杆菌, 甲萘醌-7, 合成途径, 催化酶

Abstract: This paper focused on understanding the effects of different enzyme genes on MK-7 production by cloning and expressing the genes of 6 enzymes in the biosynthetic pathway of vitamin K₂ with strain Y-2. Firstly,the recombinant plasmids with single gene of the 6 genes were constructed according to the description of Guide to Molecular Cloning Experiment. Subsequently,the recombinant plasmids were successfully transformed into the strain Y-2 via the improved “spizizen” transformation method. Results showed that respective overexpression of the 6 genes involved in vitamin K₂ biosynthetic pathway all was beneficial to raise MK-7 production. It should be noted that overexpression of gene hep S had the greatest effects on MK-7 production among these 6 genes,which resulted in an increase by 38% in shaking group and by 48% in static group. However,the effects of other genes on MK-7 production varied depending on the culture mode.

Key words: Bacillus amyloliquefaciens, menaquinone-7, biosynthetic pathway, catalyzing enzyme

徐建中, 王颖妤, 严为留, 张伟国. 维生素K₂合成途径中主要酶对MK-7产量的影响[J]. 生物技术通报, 2016, 32(11): 248-254.

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