羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1182

生物技术通报 ›› 2017, Vol. 33 ›› Issue (7): 150-154.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1182

羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备

陈慧芹,王小平,罗树红,王丽洁,陈倩倩,郝文波

南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所，广州 510515

收稿日期:2017-01-01 出版日期:2017-07-11 发布日期:2017-07-11
作者简介:陈慧芹，女，硕士，研究方向：羊口疮病毒ORFV119蛋白诱导细胞凋亡的分子机制；E-mail：595235420@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31672536，31170147）

Expression and Purification of orf Virus Protein ORFV035 and Preparation of Polyclonal Antibody

CHEN Hui-qin ,WANG Xiao-ping ,LUO Shu-hong ,WANG Li-jie ,CHEN Qian-qian, HAO Wen-bo

Institute of Antibody Engineering，School of Laboratory Medicine and Biotechnology，Southern Medical University，Guangzhou 510515

Received:2017-01-01 Published:2017-07-11 Online:2017-07-11

摘要/Abstract

摘要： 克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035，并制备其多克隆抗体，为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因，将其与质粒pET-30a（+）经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后连接，构建重组质粒pET30a-035。重组质粒经双酶切和测序鉴定，转化感受态大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达，SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化，纯化后目的蛋白免疫小鼠，制备多克隆抗体并对其进行鉴定。成功构建了重组质粒pET30a-035，在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达。包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化，得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体。Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白。成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体。

关键词: 羊口疮病毒, ORFV035, 纯化, 多克隆抗体

Abstract: This work aims to express and purify recombinant orf virus encoded protein 035（ORFV035）in Escherichia coli and prepare a polyclonal antibody（pAb）against ORFV035 for immunoassays，as well as lay foundation for the further researches on the replication，assembly，morphogenesis，and mature process . The gene of ORFV035 was amplified by PCR from orf viral genome，and sub-cloned into the expression vector pET-30a（+），and recombinant plasmid pET-30a-035 was constructed by enzymatic digestion and ligation of BamH I and Hind III. Then the plasmid pET-30a-035 after double enzyme digestion and sequencing was transformed into Escherichia coli BL21，the transformants were induced by IPTG，and SDS-PAGE was used to identify the expression of the protein. The His-tagged fusion protein ORFV035 was ultrasonic-treated and then purified through Ni-chelating affinity chromatography. The purified ORFV035 was used to immune into BALB/c mouse for producing anti-ORFV035 pAb. The results showed that the recombinant plasmids pET30a-035 was successfully constructed，and the protein ORFV035 in E. coli BL21 was in inclusion body. The ORFV035-his fusion protein was obtained after washing，dissolving，and purifying the inclusion body，and the pAb anti-ORFV035 was prepared. The Western blot analysis showed that this pAb recognized natural ORFV035.

Key words: orf virus, ORFV035, purification, polyclonal antibody

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羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备

Expression and Purification of orf Virus Protein ORFV035 and Preparation of Polyclonal Antibody

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