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NPR1多肽抗体的制备和应用

陈卓;刘家驹;毕亮;李向阳;胡德禹;于丹丹;王贞超;杨松;宋宝安;   

  1. 贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地;贵州大学绿色农药与农业生物工程教育部重点实验室;
  • 出版日期:2012-01-26 发布日期:2012-01-26
  • 基金资助:
    贵州省教育厅自然科学研究项目重点项目[黔科教(2009)0132号];;

  • Published:2012-01-26 Online:2012-01-26

摘要: 根据NCBI GenBank中报道的NPR1一级结构信息,采用Blastn、Blastx、ExPASy和Protean等软件进行序列同源性和抗原性指数分析,获得三段序列特异性较高的多肽,并从中优选一段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和LC-MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达88%、目的多肽分子量为1.92234 kD。采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为65 kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的NPR1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度。

关键词: 非表达型病程相关蛋白, 序列分析, 多肽, 合成, 多克隆抗体