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肝癌相关抗原SMP30重组基因的构建、表达及分子伴侣共表达系统的探索

黄朋;范升龙;凌敏;贺菽嘉;周素芳;   

  1. 广西医科大学生物化学与分子生物学教研室;
  • 出版日期:2012-04-26 发布日期:2012-04-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(30760233);;

  • Published:2012-04-26 Online:2012-04-26

摘要: 旨在通过应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原SMP30,研究共表达分子伴侣提高基因工程蛋白表达的可溶性及效率。PCR扩增SMP30 cDNA序列,用基因工程技术构建重组表达质粒,转化E.coliBL21(DE3)pLysS宿主菌。表达蛋白经Ni-NTA亲和柱纯化获得HIS-SMP30融合蛋白;分别将4种表达不同分子伴侣的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)转入E.coliBL21(DE3)中;然后再将重组质粒转入含有分子伴侣质粒的细胞中,进行分子伴侣与重组质粒的共表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达量与可溶性分析。经优化表达条件后,目的蛋白以包涵体形式表达,目的蛋白占总蛋白的60%以上;纯化后纯度高达95%以上;诱导共表达后,目的蛋白在上清含量极少,不到总表达目的蛋白的10%。成功构建出高效表达的SMP30重组质粒;加入到诱导表达体系中的4种分子伴侣质粒不能有效的促进可溶性蛋白的表达,pTf16共表达系统能增加目的蛋白表达量。

关键词: SMP30, 基因工程, 表达与纯化, 分子伴侣质粒, 共表达