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牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估

王子东;苏建国;段彪;杨春荣;高广琦;康峰;张荣芳;胡晓明;扈廷茂;李光鹏;   

  1. 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室;西北农林科技大学动物科技学院;
  • 出版日期:2012-11-26 发布日期:2012-11-26
  • 基金资助:
    国家重大专项高产转基因肉牛新品种培育项目(2011ZX08007-002)

  • Published:2012-11-26 Online:2012-11-26

摘要: 采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性。根据GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11>EEF1A2>18S rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。

关键词: 实时荧光定量RT-PCR, 转基因细胞, 内参基因, GeNorm, NormFinder, Bestkeeper