生物技术通报

苏红;印莉萍;

2009, 0(05): 1-4.

摘要 ( 153 )

PDF (848KB) ( 768 )

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构建饱和的基因突变体库是最直接、有效的分析鉴定基因功能的方法。根据插入突变源不同可分为T-DNA插入突变、转座子插入突变等。主要介绍这两种方法的原理及其在水稻功能基因组学研究中的应用和进展,并分析和讨论了插入突变在水稻功能基因组学研究中存在的困难和发展趋势。

植物非编码RNA的研究进展

宋江华;曹家树;

2009, 0(05): 5-8.

摘要 ( 99 )

PDF (1319KB) ( 565 )

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非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是一类广泛存在于多种生物体中,缺乏明确的开放阅读框,不编码蛋白质的RNA分子。目前已从部分植物中分离到一些ncRNA,它们直接以RNA分子的形式在植物体内发挥重要的调节功能,影响细胞分化和个体发育、基因转录调控、mRNA稳定性、RNA加工与修饰、信号传导、以及环境适应调节等。植物ncRNA的研究为深入了解植物的生长发育及系统进化提供了重要信息。

转Bt基因抗虫玉米的研究

李桂玲;李明泽;刘宗华;汤继华;

2009, 0(05): 9-13.

摘要 ( 106 )

PDF (1359KB) ( 654 )

相关文章 | 计量指标

对转B t基因抗虫玉米的研究概况、转化方法、转化体的鉴定方法、遗传评价以及其存在的问题进行了综述。

口蹄疫细胞免疫研究进展

杜进鑫;王永录;

2009, 0(05): 14-17.

摘要 ( 102 )

PDF (1017KB) ( 416 )

相关文章 | 计量指标

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着对口蹄疫疫苗及其免疫特性的深入研究和探讨,许多学者对口蹄疫细胞免疫机制的研究更进了一步,就参与口蹄疫细胞免疫的各类细胞及细胞免疫与新疫苗设计的研究进展作一综述。

有效呈递系统——免疫增强重建流感病毒体

魏刚才;赵朴;郑玉姝;常新耀;

2009, 0(05): 18-20.

摘要 ( 104 )

PDF (891KB) ( 291 )

相关文章 | 计量指标

免疫增强重建流感病毒体(IRIV)是重建的流感病毒囊膜,保持由病毒囊膜糖蛋白血凝素介导的细胞结合和膜融合特性,但缺乏病毒遗传物质。在IRIV重建的过程中,外源大分子包括蛋白质抗原、DNA/RNA和多糖能包被入IRIV。因此,一旦由细胞通过受体介导的内吞作用摄取,IRIV就能将其内含物递送入胞质溶胶。重点综述IRIV作为呈递系统在疫苗和基因治疗中的应用。

eIF-5A与DHS功能研究及应用进展

时广红;王彦珍;魏建华;

2009, 0(05): 21-26.

摘要 ( 107 )

PDF (1536KB) ( 506 )

相关文章 | 计量指标

脱氧羟腐胺赖氨酸合酶(deoxyhypusine synthase,DHS)在植物、哺乳动物和酵母细胞中普遍存在,参与真核翻译起始因子eIF-5A(eukaryotic initiation factor-5A)的翻译后活化。目前研究表明eIF-5A具有多重生物学功能,如参与细胞增殖、蛋白质翻译、mRNA降解、细胞周期的转化及细胞衰老与凋亡等。eIF-5A是目前已知的DHS的惟一底物,因此研究DHS的功能与作用机理离不开对eIF-5A的功能研究。

天然产物的C-糖基化研究进展

邓会群;王惠利;杨红;洪华珠;李爱英;

2009, 0(05): 27-30.

摘要 ( 141 )

PDF (2109KB) ( 766 )

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自然界中的天然产物在其结构上存在各种修饰,C糖-基化为其中一种比较稀少的修饰方式。C-C糖苷键的形成由C-糖基转移酶负责催化。含C-糖基的化合物多数来自微生物,但高等植物也会有少量积累。综述了近些年来在天然产物C-糖基化方面的研究工作,并对其在药物开发方面的潜力进行了展望。

噬藻体的分子生物学研究进展

向安;刘丽;魏大巧;夏雪山;

2009, 0(05): 31-34.

摘要 ( 184 )

PDF (1170KB) ( 611 )

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噬藻体是一种侵染原核藻类的病毒,可能是控制蓝藻水华生消的重要生态因子,在自然水体中大量存在。随着分子生物学和遗传学技术的不断发展,噬藻体的不断分离和发现,水生生态系统的研究内容更加丰富。对近年来国内外有关噬藻体分子生物学、遗传标记和分子生物学检测等方面的最新研究进展作了综述,并对今后研究工作进行了展望。

漆酶及其应用的研究进展

王祎宁;赵国柱;谢响明;邸晓亮;

2009, 0(05): 35-38.

摘要 ( 198 )

PDF (1171KB) ( 1182 )

相关文章 | 计量指标

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,白腐真菌普遍能分泌该酶。有氧条件下,漆酶能催化多种高分子化合物降解,利用该性质漆酶已经广泛应用于生物制浆、污染物生物降解、生物漂白等领域。介绍了目前漆酶在农业和工业各个领域中的应用。

白三叶生物技术研究进展

李继平;徐春波;赵来喜;王勇;赵海霞;

2009, 0(05): 39-42.

摘要 ( 84 )

PDF (1157KB) ( 241 )

相关文章 | 计量指标

白三叶(Trifolium repens L.)是品质优良、易于栽培的一种重要豆科牧草。随着分子生物学和植物基因工程的发展,在分子水平上对白三叶进行遗传改良的研究已经取得了部分成果。综述了近20年来生物技术在白三叶研究领域的应用。

反向遗传学在现代生物学领域中的应用

杨宇;王丹;李浩戈;

2009, 0(05): 43-45.

摘要 ( 339 )

PDF (1059KB) ( 1365 )

相关文章 | 计量指标

反向遗传学是一种新兴的分子生物学技术。主要从反向遗传学的含义、研究方法及应用等角度进行综述,并介绍有关反向遗传学研究的最新进展。

抑制性消减杂交技术的应用

李小庆;景志忠;

2009, 0(05): 46-50.

摘要 ( 75 )

PDF (836KB) ( 1115 )

相关文章 | 计量指标

基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。近年来,抑制性消减杂交(SSH)技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。

哺乳动物体细胞克隆技术的研究进展

马利兵;王凤梅;潘建刚;

2009, 0(05): 51-54.

摘要 ( 119 )

PDF (919KB) ( 694 )

相关文章 | 计量指标

哺乳动物体细胞克隆技术在动物育种及珍稀动物保护领域具有极其广阔的应用前景,但极低的成功率限制了这项技术的应用。相关学者从不同方面进行了研究,试图提高体细胞克隆技术的成功率。综述了近年来哺乳动物体细胞克隆技术的研究进展,为其相关研究提供必要的参考。

变性梯度凝胶电泳技术在微生物分子生态学研究中的应用

翟振华;李艳双;

2009, 0(05): 55-59.

摘要 ( 70 )

PDF (1205KB) ( 475 )

相关文章 | 计量指标

变性梯度凝胶电泳在微生物分子生态学研究中的应用日益广泛,已成为研究微生物多样性和动态变化的有力工具。对变性梯度凝胶电泳技术中存在的问题,如基因片段的选择、共迁移、背景色和异源双链分子的形成等作了综述,以期为进一步更好地利用该技术进行微生态的研究奠定基础。

大肠杆菌双顺反子表达载体中绿色荧光蛋白表达水平的研究

张鲲;马媛媛;邹少兰;洪解放;井欣;刘成;张敏华;

2009, 0(05): 60-63.

摘要 ( 94 )

PDF (1481KB) ( 677 )

相关文章 | 计量指标

构建了一系列含有编码硫氧还蛋白(Trx)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子重组表达质粒,重点考察双顺反子间紧密相连和重迭的间隔序列。诱导表达后,对表达的GFP进行荧光检测,利用GFP的荧光强度来反映蛋白质的表达水平。结果表明各表达载体所表达的GFP的平均荧光强度差距很大,表明双顺反子间的间隔序列对报告基因表达水平有一定的影响,为实现不同功能基因表达的精确调控奠定了基础。

献给初学者的生物技术

2009, 0(05): 63-63.

摘要 ( 56 )

相关文章 | 计量指标

重组E.coli胆固醇氧化酶的分离纯化及其酶学性质研究

钟学敏;张玲;孙艳;杨海麟;王武;

2009, 0(05): 64-68.

摘要 ( 89 )

PDF (2102KB) ( 320 )

相关文章 | 计量指标

对重组E.coli产生的胆固醇氧化酶采用70%硫酸铵盐析、CM Sepharose FF离子层析、Phenyl Sepharose 6 Fast疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤,得到的胆固醇氧化酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带,酶的纯化倍数为93,收率为21%。部分酶学性质表明:酶的最适反应温度为37℃,最适反应pH7.5,热稳定范围在40℃以下,酶的pH稳定范围为6～9,分子量分别为50 kD和52 kD。酶动力学参数Km值及Vmax分别为8.2×10-5mol/L和0.21 mmol/(L.min)。

环羟基化双加氧酶α亚基保守序列的克隆及基因定位

钟鸣;裴铁浓;李浩戈;陈丽静;马慧;郭志富;张丽;

2009, 0(05): 69-70.

摘要 ( 107 )

PDF (1288KB) ( 383 )

相关文章 | 计量指标

利用PCR法成功地克隆了不动杆菌(Acinetobacter)L2菌株的环羟基化双加氧酶α亚基保守序列310 bp片段,并对其进行测序。序列分析结果表明该片段与3苯-基丙酸盐双加氧酶α亚基、苯1,2双-加氧酶α亚基、甲苯2,3双-加氧酶α亚基的氨基酸序列同源性分别为72%、75%和78%。Southern杂交将菌株L2的环羟基化双加氧酶α亚基基因定位在L2质粒的不同酶切片段上。

葡萄乙醇脱氢酶基因Ⅲ的电子克隆及生物信息学分析

武雪;黄晓丽;王喆之;

2009, 0(05): 71-75.

摘要 ( 105 )

PDF (1963KB) ( 575 )

相关文章 | 计量指标

利用电子克隆方法获得葡萄乙醇脱氢酶基因Ⅲ(ADHⅢ),并采用生物信息学方法对该基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、高级结构以及功能域等方面进行了预测和分析。结果表明,葡萄ADHⅢ基因全长1 602 bp,包含1 140 bp的ORF,编码379个氨基酸,该蛋白不具有明显的疏水区域,也无跨膜结构域,α-螺旋和不规则卷曲是其二级结构的主要构件。葡萄ADHⅢ包含有ADH功能域,和其他植物的ADHⅢ在序列组成、高级结构及活性位点等方面均具有高度的相似性。

亚麻脱胶过程中细菌学、酶学及相关参数分析

孙燕华;孙建光;赵吉;

2009, 0(05): 76-79.

摘要 ( 90 )

PDF (1192KB) ( 237 )

相关文章 | 计量指标

在实验室条件下对亚麻原茎进行温水脱胶,系统分析发酵过程中细菌总数、果胶菌、果胶酶、木聚糖酶、纤维素酶、还原糖、总氮量、pH值及COD等参数的动态变化。同时,采用变性凝胶电泳(DGGE)技术探讨了亚麻脱胶过程的生物多样性。

丹参晚期胚胎蛋白基因SmLEA的克隆及表达分析

刘丛玲;王喆之;

2009, 0(05): 80-84.

摘要 ( 88 )

PDF (1798KB) ( 508 )

相关文章 | 计量指标

对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp,无内含子,包含1个长为495 bp的开放阅读框,编码164个氨基酸。序列比对结果显示,该序列与番茄的晚期胚胎丰富蛋白Lemmi9有较高的相似性(69%),推测该编码蛋白属于晚期胚胎蛋白LEA14家族成员。生物信息学显示,SmLEA所编码蛋白SmLEA的相对分子质量为17.34 kD,理论等电点为4.51,富含天冬氨酸及AS、IP、KV、VS、TIP肽段,定位于细胞质中,为稳定类蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在丹参的根、茎、叶中均有表达,为组成型表达基因。

朝天椒Tm-2~(nv)-Like基因的同源克隆及其表达验证

于曙光;何忠诚;王恒;姜国勇;

2009, 0(05): 85-87.

摘要 ( 86 )

PDF (1263KB) ( 376 )

相关文章 | 计量指标

番茄的Tm-2nv基因是一个NBS-LRR类型的病毒抗性基因。本研究以该基因的保守序列作为扩增引物,对辣椒栽培种朝天椒的基因组DNA进行电子分析、同源扩增和表达验证,首次获得了具有70%相似性的同源基因。生物信息学分析显示,朝天椒Tm-2nv-like基因的N端289～300 nt处和316～333 nt处分别含有12和18个碱基的插入,并且含有一个ATP/GTP结合位点的基序A(P-loop),以及3个依赖于cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点。这一结果对于辣椒抗病基因功能的研究具有重要意义。

基于23S/5S rDNA序列的柑橘黄龙病病原菌亚洲种系统发育研究

廖惠红;白先进;李杨瑞;陈传武;杨丽涛;朱建华;徐宁;

2009, 0(05): 88-91.

摘要 ( 93 )

PDF (1954KB) ( 250 )

相关文章 | 计量指标

根据柑橘黄龙病亚洲种23S/5S的DNA序列设计一对引物对不同地理来源的6个柑橘黄龙病样品DNA进行扩增,扩增片段大小均为1 654 bp包括一个假定细胞壁水解酶假基因(putative cell wall hydrolase pseudogene)和5S rRNA基因。序列同源性分析结果表明;6个柑橘黄龙病病原菌样品与柑橘黄龙病病原菌亚洲种Sihui样品的同源性为99%,然而与土壤杆菌,布鲁氏菌,根瘤菌,中华根瘤菌,巴通体菌和中慢生根瘤菌的同源性只有89%～95%,说明在23S/5S rDNA序列上黄龙病病原菌亚洲种与α变形菌纲根瘤菌目的其他病原菌相差较大。对黄龙病病原菌亚洲种种内的23S/5S rDNA序列进行比较分析,结果发现黄龙病病原菌亚洲种种内之间putative cell wall hydrolase pseudogene和5S rRNA的基因序列非常保守,但不同地理来源的柑橘黄龙病样品碱基序列间确实存在差异,差异的大小与地理的远近无关。利用简约法对黄龙病病原菌亚洲种及α变形菌纲其它病原菌的23S/5S rDNA序列构建的系统发育树显示黄龙病病原菌亚洲种单独聚为一类,其他细菌聚为另一类,该结果与基于rplJ基因及16S rRNA基因的DNA序列构建的分子系统进化树结果一致。

芘降解质粒提取方法的研究

蔡丽希;许桂芬;

2009, 0(05): 92-95.

摘要 ( 83 )

PDF (1396KB) ( 383 )

相关文章 | 计量指标

采用碱裂解法、化学改良方法、CTAB法、酚氯法等4种方法提取从泉州红树林沉积物中筛选出多环芳烃降解菌群YL的质粒,并分别转化至大肠杆菌感受态细胞,然后采用富集筛选的手段,最终确立最佳方案得到一组质粒转化菌群。该转化菌群可以利用芘作为其生长的惟一碳源和能源,并能在21 d内将50 mg.L-1的芘降解85.69%。而受体菌E.coliDH5α的芘降解率仅为2.006%。由此可以证明,降解质粒已成功转化进宿主细胞,并发挥降解作用。YL的质粒含有降解芘的基因。

人参总皂苷对人红白血病细胞株(K562)中STAT5表达的影响

罗春燕;官涛;王红宁;杨艳;姜蓉;胡晓舒;华自森;王建伟;

2009, 0(05): 96-100.

摘要 ( 79 )

PDF (2199KB) ( 294 )

相关文章 | 计量指标

旨在探讨人参总皂苷对K562细胞STAT5表达的影响。MTT法显示TSPG对K562细胞增殖抑制程度呈剂量与时间依赖性增加,且呈正相关关系。流式细胞术表明TSPG能阻止K562细胞从G0/G1期向S、G2/M期移行。激光共聚焦显微镜观察可见,TSPG 200 mg/L作用K562细胞24 h,胞浆中的STAT5荧光强度增加,而胞核内STAT5荧光强度减弱。Westernblotting结果显示,TSPG作用K562细胞6、24、48 h,胞核中STAT5表达较对照组减少,TSPG作用72 h胞核蛋白中STAT5表达增加;TSPG作用K562细胞6、12、24、48、72 h,胞浆内STAT5表达增加。TSPG能减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一。

罗格列酮对胰岛素抵抗人肝细胞Angpil3和LXRα基因表达的影响

黄家利;王继红;程梅;曾建涛;

2009, 0(05): 101-103.

摘要 ( 94 )

PDF (2144KB) ( 351 )

相关文章 | 计量指标

研究罗格列酮对胰岛素抵抗人肝L02细胞Angptl3基因及与脂代谢相关的LXRα基因的影响。采用高胰岛素诱导法建立胰岛素抵抗模型(IR-L02),分别加入含有和不含罗格列酮的不同葡萄糖浓度培养液培养,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法)检测培养液残存葡萄糖量,并用RT-PCR方法检测基因Angptl3、LXRα mRNA表达水平的变化。结果表明相同葡萄糖浓度下罗格列酮作用组(IR-R组)的培养液残存葡萄糖量比无罗格列酮作用组(IR组)减少;IR-R组的Angptl3、LXRα mRNA表达水平较IR组显着升高(P<0.05)。

染色质免疫沉淀技术分析肺腺癌A549细胞中p53蛋白与p21~(CIP1)和Bim基因转录启动子的结合

李智涛;沈飞;燕贞;吴卫东;吴逸明;

2009, 0(05): 104-108.

摘要 ( 91 )

PDF (1830KB) ( 474 )

相关文章 | 计量指标

为了检测肺腺癌A549细胞内抑癌蛋白p53与CDK抑制蛋白p21CIP1和Bim基因转录调控区的结合情况,采用染色质免疫沉淀技术,用p53特异性抗体沉淀DNA,PCR检测p21CIP1和Bim基因5′端特异性序列。结果表明,在抗体免疫沉淀的DNA片段中扩增出p21CIP1和Bim基因5′端的特异性序列。因此证实在A549细胞内,p53蛋白可与p21CIP1和Bim基因转录启动子的特异区域结合,进而参与两基因的表达调控。

肿瘤特异的sea基因真核表达质粒的构建及在肺癌细胞中的功能研究

朱大冕;陈全;李奕璇;朱道银;

2009, 0(05): 109-112.

摘要 ( 94 )

PDF (2021KB) ( 261 )

相关文章 | 计量指标

构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性。以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达质粒。用脂质体转染A549细胞,以RT-PCR法检测sea基因表达水平。制备健康献血者PBMC,用pGL-S-SEA质粒转染A549细胞的上清液和细胞裂解液进行PBMC刺激试验,以MTT法检测其促细胞增殖效应。结果显示,成功构建Survivin启动子调控的真核表达质粒pGL-S-SEA。重组质粒在A549细胞中启动了sea基因的表达,其转录强度为内参(GADPH基因)的65.96%,在对照MRC-5细胞中无明显表达。该质粒转化A549细胞的裂解液具有促进人PBMC增殖活性、上清液无明显促PBMC增殖作用,裂解液组、上清液组和PHA阳性对照组的刺激指数分别为1.29、0.95和1.58。结论成功构建pGL-S-SEA质粒,其在A549细胞的表达产物具有诱导人PBMC增殖的超抗原活性,为下一步将其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础。

人gdnf基因的克隆及牛β-酪蛋白基因座定位整合载体的构建

张学明;罗奋华;苏慧敏;吴应积;

2009, 0(05): 113-118.

摘要 ( 102 )

PDF (2418KB) ( 331 )

相关文章 | 计量指标

用分子克隆技术构建人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,用于制备生产人GDNF的牛乳腺生物反应器。打靶载体以牛β-casein基因上游和下游5.7 kb序列为5′和3′同源臂;neo抗性基因为正筛选因子;HSV-tk基因和DsRed2基因为双负筛选因子;人gdnf基因置于5′同源臂下游,SV40 polyA序列插入到人gdnf基因下游作为人gdnf基因转录终止信号。经PCR、限制性内切酶图谱及DNA测序分析鉴定,结果表明已成功地构建了人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,为研究人gdnf基因在牛β-casein基因座的定点整合及通过体细胞核移植法制备人GDNF牛乳腺生物反应器的研究奠定了基础。

草原红牛IGF-I基因5′调控区序列的生物信息学分析

张金玉;张国梁;赵玉民;秦立红;鲍永华;刘畅;宋永利;赵志辉;

2009, 0(05): 119-121.

摘要 ( 87 )

PDF (1273KB) ( 420 )

相关文章 | 计量指标

胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因为多启动子基因,也是影响动物生长发育和肉用性状的重要候选基因。在克隆草原红牛IGF-I基因5′调控区1 954 bP的基因组序列基础上,利用生物信息学软件,分析了IGF-I 5′调控区的启动子结构;预测出评分在95分以上的转录因子结合位点有71个;分析结果没有发现CpG岛和TATA-box。研究结果为进一步研究IGF-I转录效率以及对草原红牛生长和肉用性状的影响奠定基础。

猪戊型肝炎病毒swCH-GS189株ORF2基因的克隆及序列分析

郝宝成;兰喜;柳纪省;胡永浩;

2009, 0(05): 122-126.

摘要 ( 87 )

PDF (2179KB) ( 423 )

相关文章 | 计量指标

为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEVORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段。序列测定结果表明,swCH-GS189株的ORF2基因长2 025 bp,编码674个氨基酸,与GenBank中公布的其它毒株间的核苷酸序列同源性为79.1%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为89.5%～98.8%。系统发育进化树结果表明,该分离株为基因Ⅳ型。

猪PBD-1基因乳腺特异性表达载体的构建

黎丽荣;黄海军;高其双;董斌科;邓兵;刘艳;陶弼菲;向敏;吴建英;蒋思文;

2009, 0(05): 127-129.

摘要 ( 104 )

PDF (1718KB) ( 321 )

相关文章 | 计量指标

为构建猪PBD-1基因乳腺特异性表达载体,采用PCR方法从质粒pcDNA3.1-BLG-HNP-1中扩增出山羊乳球蛋白(BLG)基因,插入到真核表达载体pIRES2-EGFP-PBD-1构建成乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1。经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较,鉴定。结果成功构建了乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1。乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1的成功构建,为进一步研究PBD-1蛋白的抗菌活性、抗菌机理及将进一步该载体应用于动物乳腺生物反应器的研究奠定基础。

猪繁殖与呼吸综合症病毒E基因克隆及重组腺病毒表达载体的构建

刘光瑞;李宝玉;柳纪省;胡永浩;

2009, 0(05): 130-134.

摘要 ( 92 )

PDF (1372KB) ( 256 )

相关文章 | 计量指标

研究采用RT-PCR技术对猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)E基因进行了克隆、测序和特征分析,得到长度为603 bp,编码201个氨基酸残基的目的基因片段。将克隆到的E基因插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒中,再将重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E用PmeⅠ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-E,成功获得了含有PRRSVE基因的重组腺病毒表达载体。为猪繁殖与呼吸综合症活载体疫苗的研制提供了依据。

临床等级质粒DNA的实验室制备

皮文辉;宋志强;刘守仁;

2009, 0(05): 135-138.

摘要 ( 117 )

PDF (1867KB) ( 405 )

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在实验室有效获得100 mg临床试验等级的质粒DNA。摇床发酵3个批次,每批次4 L培养液,产生大约160 g的细菌沉淀物。碱裂解菌体,气浮法结合离心分离浮杂沉淀。裂解液经0.45/0.22μm囊式过滤器过滤。然后采用阴离子色谱介质富集质粒,异丙醇沉淀。重新溶解沉淀后采用100 kD切向流超滤处理,获得100 mg临床试验等级质粒DNA。体外、体内转染试验对质粒表达效果进行了鉴定。结果表明,纯化的质粒DNA几乎检测不到内毒素、RNA和蛋白质,A260/A280比值在1.82～1.86范围内。纯化的质粒DNA能够满足动物临床试验。

印度植物源药物发展与应用概况

邹新玉;

2009, 0(05): 139-142.

摘要 ( 93 )

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