生物技术通报

王丽;刘洋;李德全;

2012, 0(10): 1-7.

摘要 ( 193 )

PDF (278KB) ( 1214 )

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干旱是严重限制作物生长及产量的环境因子之一。经过长期的进化,植物形成了一套响应干旱胁迫的信号转导机制,包括对干旱胁迫信号的感知,第二信使的产生,信号转导和信号网络的形成。信号转导的结果是导致相关基因的表达和蛋白的合成,进而引起植物体渗透调节及抗氧化系统的改变,最终使植物适应干旱逆境或增强植物抗旱能力。干旱胁迫通常会促进ROS的积累及其他次级信号分子的产生。MAPK级联途径是真核生物信号转导最为保守的途径,在植物的生长发育及各种胁迫信号的传导中均起着较重要的作用。综述干旱胁迫信号及ROS→MAPK和ROS→Ca2+介导的信号途径,以及信号转导途径的调控机制。

基因工程改良棉花纤维品质研究进展

李晓东;李波;范玲;

2012, 0(10): 8-14.

摘要 ( 99 )

PDF (250KB) ( 762 )

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棉花作为世界上重要的经济作物,其纤维品质是衡量棉花品质的重要指标。优良的纤维品质是国内外棉花育种的主要目标之一,面临常规育种改良品质的瓶颈,通过转基因技术改良棉花纤维品质是棉花遗传育种致力研究的重要领域。介绍棉纤维发育相关分子机理研究、棉纤维品质改良功能基因的发掘以及利用基因工程技术改良棉花纤维品质的最新进展,并对今后的研究进行展望。

植物锌铁转运蛋白ZIP基因家族的研究进展

蒲琦;李素贞;李盼;

2012, 0(10): 15-19.

摘要 ( 182 )

PDF (243KB) ( 1044 )

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金属离子对植物的正常发育至关重要,但过量又会中毒。植物体内的自动调节平衡机制会调节金属离子的吸收和运输,从而控制金属离子的含量。锌铁调控蛋白ZIP(ZRT,IRT-like protein)家族是广泛存在于植物中的转运蛋白,具有Ca2+、Fe2+、Mn2+及Zn2+等多种金属元素的转运功能。了解ZIP转运体在植物中如何发挥离子转运功能,从分子水平认识金属离子缺乏或过量积累的机理有重要意义。综述拟南芥、水稻、大麦、苜蓿和玉米ZIP家族成员及其研究进展。

分子生物学方法及其在海洋微生物生态中的应用

沈梅丽;杨锐;

2012, 0(10): 20-29.

摘要 ( 96 )

PDF (326KB) ( 669 )

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微生物在生态系统中起着独一无二的生态作用。微生物生态学的发展和工农业、环境保护及社会科学有着紧密的联系。海洋作为地球上最大的生境,孕育着大量的生物资源,是研究微生物生态的主要来源。综述微生物生态研究相关的分子生物学方法及海洋微生物生态的应用进展。

植物病毒适应性机制研究进展

仵发静;刘雅婷;李晶;郑元仙;陈雪娇;徐烨;智龙;

2012, 0(10): 30-34.

摘要 ( 118 )

PDF (240KB) ( 634 )

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植物病毒是一类专性寄生生物,其生存和繁衍依赖于宿主植物和传播介体。植物病毒通过适应性进化来对抗宿主的防御系统,响应环境的变化,确保病毒的顺利传播和扩大种群数量,其适应性机制的研究不仅有助于我们对病毒的变异和进化、病毒与宿主及传播介体间的互作有更深刻的理解,更重要的是为植物病毒病的防治提供了新的思路和途径。主要从RNA沉默抑制子、快速进化、病毒的传播3个方面,就近年来在植物病毒适应性机制研究领域的一些进展进行概述。

除草剂及抗除草剂作物的应用现状与展望

陈海伟;张鲁华;陈德富;陈喜文;

2012, 0(10): 35-40.

摘要 ( 158 )

PDF (225KB) ( 1886 )

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除草剂、抗除草剂作物的应用大大提高了农田除草效率,具有巨大的经济效益。介绍除草剂的种类、作用特点及应用现状,阐述现有抗除草剂作物的类型、研究进展及应用概况,分析除草剂及抗除草剂作物种植所产生的直接和间接影响,探讨未来抗除草剂作物的发展趋势与应用展望。

有机化合物生物催化研究进展

王仁杰;刘墨祥;

2012, 0(10): 41-46.

摘要 ( 106 )

PDF (209KB) ( 626 )

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随着近十几年来工业生物技术的发展,有机化合物的生物催化也取得了飞速的进步。近几年的研究集中在:新生物催化剂的筛选和酶的定向改造;非水相生物催化中酶有机溶剂耐受性的增强和非传统介质的应用;生物催化在手性化合物,药物等精细化学品领域的应用;组合生物催化作为组合化学和生物催化相结合而成的一个新技术生长点,并取得一定的进展,为新药的开发提供一种切实可行的方法。

系统遗传学与生物技术-细胞分子生物系统的分析与合成

曾杰(邦哲);

2012, 0(10): 47-51.

摘要 ( 94 )

PDF (361KB) ( 420 )

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生物系统的科学与工程是整合系统论、实验、计算和工程方法的交叉学科研究与应用。系统生物学、系统医学,建立在系统科学和数学模型基础上,采用分子、组学生物技术和计算、生物信息技术,以及基因合成与转基因生物技术等研究生物系统原理和规律。系统遗传学与系统生物技术是研究天然与人工生物系统的基因系统与蛋白质系统构成细胞的软件信息与硬件运行系统的机理与方法。合成生物学、系统生物工程也是建立在系统科学和数学模型基础上,应用于生物系统原理设计虚拟计算机信息软件和仿生人工机器硬件、人造工程生物体和基因信息系统等。

转基因植物核酸检测策略与体外扩增技术研究进展

李亚南;高俨;张艳;史磊;许君;郑文明;

2012, 0(10): 52-62.

摘要 ( 95 )

PDF (503KB) ( 778 )

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转基因生物(Genetically modified organisms,GMOs)特别是转基因作物的商品化应用在世界范围内迅猛发展,在推动农业、医药和工业等领域的飞速发展的同时也逐步吸引越来越多公众注意力,生物安全问题成为突出的争论话题。转基因作物及其产品的快速准确检测成为社会发展的急切需求,转基因技术的多样化也要求检测策略和检测技术的不断改进。系统综述针对各种作物转基因技术和转基因产品的检测策略和技术,全面比较各种技术的特点和适用范围,并对目前面临的问题和发展趋势进行分析。

拉曼光谱技术在微生物学中的应用

孙美娟;刘军贤;王雪;陶站华;

2012, 0(10): 63-68.

摘要 ( 205 )

PDF (250KB) ( 2110 )

相关文章 | 计量指标

拉曼光谱具有快速、灵敏、无损、实时监测等显著特点,在微生物学领域得到广泛应用。分别介绍共焦显微拉曼光谱、共振拉曼光谱、表面增强拉曼光谱、拉曼成像、相干反斯托克斯拉曼光谱、激光镊子拉曼光谱和Raman-FISH的原理和特点,并重点总结和分析不同拉曼光谱技术在微生物的结构、化学组成,以及代谢过程等相关研究中的应用优势。合理利用这些技术在基础微生物、发酵微生物和微生物诊断等方面具有潜在的应用价值。

淀粉样蛋白纯化方法的研究进展

何剑为;陈应广;王禹;宋有涛;

2012, 0(10): 69-74.

摘要 ( 162 )

PDF (223KB) ( 813 )

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淀粉样纤维是一种富含β折叠的高度有序的由淀粉样蛋白前体聚集而成的蛋白聚集体。由于淀粉样蛋白较普通蛋白具有不稳定、易于聚集的特性,此类蛋白的表达和纯化与常规方法有较明显的差别,主要体现在更为严格的技术和过程要求。基于近年来淀粉样蛋白分离纯化技术领域取得的进展,并结合作者的相关研究,总结淀粉样蛋白的分析和制样方法,为淀粉样蛋白沉积疾病的分子机理研究提供理论依据和技术支撑。

转Bar基因甘蓝型油菜叶片蛋白质组变化的初步分析

孔芳;薛正莲;杨超英;王幼平;

2012, 0(10): 75-82.

摘要 ( 94 )

PDF (878KB) ( 424 )

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采取SDS-PAGE与MALDI-TOF-MS联用的方法,对抗除草剂转Bar基因T1代甘蓝型油菜与普通栽培油菜的叶片蛋白质组进行比较性研究,获得差异蛋白质组的重要信息,并初步探讨差异蛋白的主要功能,以期找到与转Bar基因油菜抗除草剂有关的蛋白质,揭示其抗性机理。双向电泳表达图谱研究表明,Bar基因的转入使得转基因油菜中的差异蛋白表达质与量发生了显著变化,共得到16个发生差异表达的蛋白质点,其中11个经质谱分析功能得到鉴定,这些鉴定出的蛋白质涉及多个生理过程,如能量与代谢、信号转导、代谢相关蛋白离子转运和防御应答等。

有机胺(PTMAC)对盐胁迫小麦幼苗抗氧化能力的影响

金桂芳;于海彬;

2012, 0(10): 83-87.

摘要 ( 100 )

PDF (499KB) ( 390 )

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旨在研究有机胺(PTMAC)对盐胁迫小麦幼苗叶片内源保护酶活性及叶绿素、可溶性蛋白含量的影响,采用不同浓度的PTMAC进行种子浸泡和叶面喷施处理,并在幼苗两心一叶时进行100 mmol/L NaCl胁迫。结果表明,与未处理的样品相比,不同浓度的PTMAC均能显著提高盐胁迫下幼苗叶片中SOD、POD和CAT的活性,同时降低MAD的含量。PTMAC为10 mg/L时,MDA降低了12.21%;PTMAC为20 mg/L时,SOD、POD、CAT活性分别提高了434.71%、194.49%和227.27%,叶绿素含量提高了24.4%;PTMAC为50 mg/L时可溶性蛋白提高了12.68%。结果显示,在试验浓度范围内(PTMAC为20 mg/L),能大大地提高盐胁迫小麦幼苗叶片中内源保护酶的活性,提高叶绿素和可溶性蛋白的含量,从而提高小麦的抗氧化能力,改善光合性能,促进其生长。

黑线仓鼠CRH基因的编码序列及系统进化分析

张琪;薛慧良;徐金会;陈蕾;徐来祥;

2012, 0(10): 88-94.

摘要 ( 93 )

PDF (896KB) ( 506 )

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为探究黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)繁殖功能与促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因结构的关系,参考近缘种的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR法克隆得到了黑线仓鼠CRH基因的部分序列,克隆得到长度为1 112 bp,为外显子1和外显子2的部分序列,包括全部编码区序列564 bp;编码区共编码187个氨基酸,GenBank登录号为JQ416143。利用编码区序列构建系统进化树,结果显示,黑线仓鼠与大鼠、小鼠亲缘关系最近,与其他哺乳动物亲缘关系较近,而与原鸡亲缘关系最远,此结果与物种的进化关系相一致。同时对其编码的蛋白质进行一级结构分析及二级、三级结构预测,得到了CRH的信号肽序列和41个氨基酸组成。本研究首次报道了黑线仓鼠的CRH基因序列,为进一步探究CRH基因奠定基础,对系统分析CRH的功能具有重要的参考价值,同时该cDNA序列可作为物种亲缘关系或遗传距离研究的理想标记。

小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究

魏晓丽;金一帮;朱明;李亮;温浩;

2012, 0(10): 95-99.

摘要 ( 105 )

PDF (421KB) ( 366 )

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构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnI和XhoI双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达。通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白。将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性。成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21(DE3)。在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h条件下获得的融合蛋白。采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用。本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白。

苏云金芽胞杆菌cry2Ab、cry9Ea基因的表达及活性分析

李玉红;李海涛;高继国;赵世源;张春鸽;赵灿;

2012, 0(10): 100-105.

摘要 ( 110 )

PDF (537KB) ( 374 )

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旨在为农业害虫防治提供更多的苏云金芽胞杆菌基因资源,从中国吉林市龙潭山土壤样品中分离得到野生菌株命名为Bt LTS-7,扫描电镜显示该菌株产生晶体形状为双锥体和正方体,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该菌株产生130 kD和71 kD的晶体蛋白,通过PCR鉴定出该菌株中含有cry2Ab和cry9Ea基因,并成功克隆到了这两个新基因,并被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ab28和cry9Ea9,将两个基因分别在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,并进一步对其表达蛋白进行杀虫活性测定。结果显示,Cry2Ab28蛋白对棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫具有杀虫活性,LC50为32.45μg/mL。Cry9Ea9蛋白对小菜蛾初孵幼虫(Plutella xylostella)具有较高杀虫活性,LC50为0.77μg/mL。

碱性木聚糖酶产生菌的筛选、XynG1-3基因克隆表达及酶学性质研究

郑宏臣;刘逸寒;刘晓光;韩杨;王建玲;路福平;

2012, 0(10): 106-113.

摘要 ( 110 )

PDF (1006KB) ( 502 )

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从造纸厂周边碱性土壤中分离、筛选到一株产碱性木聚糖酶的细菌G1-3,根据形态和生理、生化特性并结合16SrDNA序列分析,鉴定菌株G1-3为短小芽孢杆菌,命名为Bacillus pumilusG1-3。利用克隆表达载体pET-22b(+),实现了Bacillus pumilusG1-3碱性木聚糖酶基因XynG1-3在E.coliBL21中的表达。经氨基酸序列分析,木聚糖酶XynG1-3属于GH11家族的小分子木聚糖酶。重组木聚糖酶XynG1-3经镍离子亲和层析一步纯化后,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测其分子量为24 kD。对酶学性质进行分析,重组酶XynG1-3最适作用温度为55℃,最适作用pH为8.0;该酶在60℃保温1 h,残余酶活保持为原来的56%,pH作用范围较广,在pH10.0下保存1 h,残余酶活仍能保持75%,为耐碱性木聚糖酶。

人FGFR1的BacMam系统构建、表达、纯化与鉴定

武艺;罗志勇;陈艳霞;孟俊炜;方成;

2012, 0(10): 114-118.

摘要 ( 149 )

PDF (402KB) ( 1106 )

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目前激酶类蛋白的表达大多由昆虫细胞表达系统实现,采用BacMam系统来表达受体型酪氨酸激酶人FGFR1,旨在获得更接近天然结构与功能的重组蛋白。首先,将pDEST20载体的多角体蛋白启动子替换成CMV enhancer启动子,获得BacMam表达载体pDEST20-CMVe。通过Gateway系统,将FGFR1具有酪氨酸激酶活性的区域克隆至改造后的载体中。利用昆虫细胞Sf9产生病毒,P2代病毒转导哺乳动物细胞FreeStyle 293-F进行表达,经亲和纯化后,成功获得了75 kD的融合蛋白。通过磷酸化底物的反应检测此FGFR1激酶的活性。结果表明,BacMam系统是一个良好的表达重组激酶FGFR1的平台,并且所表达的激酶活性高于昆虫细胞表达的激酶蛋白。

人巨细胞病毒编码蛋白pUL23在E.coliBL21(DE3)中的表达和纯化

李婧惠;刘明亮;李继东;张忠明;冉艳红;周天鸿;李弘剑;

2012, 0(10): 119-123.

摘要 ( 80 )

PDF (548KB) ( 504 )

相关文章 | 计量指标

大肠杆菌中高效表达携带组氨酸标签的人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23,并进行纯化以及鉴定。提取感染HCMVTowne病毒株的HFF细胞的总RNA,逆转录为cDNA作为模板,经PCR获得UL23的基因片段,将此片段插入表达载体pET-28a(+),构建pET28a(+)-UL23重组质粒。将pET28a(+)-UL23转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达。表达产物经Western blotting分析后进行发酵,再用Ni sepharose亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,成功构建pET28a(+)-UL23原核表达载体,表达及纯化了His-pUL23融合蛋白,为进一步研究pUL23奠定基础。

16S rRNA基因和COI基因序列分析在石斑鱼物种鉴定中的应用

陈双雅;王嘉鹤;陈伟玲;张永祥;徐敦明;周昱;

2012, 0(10): 124-130.

摘要 ( 123 )

PDF (336KB) ( 786 )

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对台湾海峡常见的8种石斑鱼进行了16S rRNA基因和COI基因的序列测定,并通过GenBank和BOLD两个数据库进行鱼种鉴定。序列分析表明,COI基因较16S rRNA基因有更大的分辨率;两个基因序列在GenBank中的搜索结果和COI基因序列在两个数据库的搜索结果大部分一致,但仍有部分差异。建议同时使用COI和16S rRNA两种保守基因,进行序列测定,然后在GenBank和BOLD SYSTEMS数据库进行搜索,选择一致的鉴定物种作为鉴定结果。

DGGE技术对南美白对虾养殖水体中微生物多样性的研究

王亭芳;金风杰;马士禹;常忠义;赵云龙;高红亮;

2012, 0(10): 131-136.

摘要 ( 102 )

PDF (748KB) ( 635 )

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以上海市金山区水产养殖基地的水样为试验材料,测定2011年一个养殖周期内7、8、9月不同养殖环境中水样的理化指标,并利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophresis,DGGE)的方法对养殖水体的微生物多样性进行分析。结果表明,不同月份中各个水样的微生物种类相似度在39%以上;不同养殖模式下养殖水体中微生物种类丰富,7、8月中各个取样点的DGGE条带在20条左右,其中以排水沟为最多;而9月为15条左右,以土池为最多。试验结果说明,养殖前中期水体微生物系统较稳定,后期微生物种类表现出大的差异性,各个池塘微生物种类减少但数量显著,需要在后期加大防病控病机制。另外,大棚养殖模式较开放的土池养殖更有优势,其中微气泡增氧机和绿色水生植物的引入,为建立更稳定健康的养殖模式提供参考。

PCR-DGGE技术分析染整废水微生物群落多样性

蒙嵘;浦跃武;任敦建;易绿云;

2012, 0(10): 137-141.

摘要 ( 78 )

PDF (478KB) ( 410 )

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旨在揭示水解酸化-生物接触氧化工艺处理染整废水过程中的微生物多样性。取初级沉淀池,水解酸化池,生物接触氧化池和二沉池的活性污泥,通过细胞裂解直接提取基因组DNA,以细菌通用引物进行16S rRNA基因V3区域PCR扩增,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳,获得微生物群落的DNA特征指纹图谱,并对条带进行统计分析和切胶测序,进行了同源性分析并建立了系统发育树。研究表明,整个水处理过程中含有丰富的微生物群落,其中初级沉淀池、水解酸化池、二沉池和生物接触氧化池的污泥样品分别测出36条带、42条带、30条带和29条带。不同区段微生物群落间相似度最高达68%,最低达42.4%,说明群落间演替明显,不同工艺区段既存在共同的微生物种属也存在特异微生物种属。

罗氏沼虾SSR标记再开发及其影响因素初探

戴习林;邓平平;施永海;何安元;蒋飞;丁福江;

2012, 0(10): 142-149.

摘要 ( 81 )

PDF (651KB) ( 643 )

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在NCBI的Nucleotide数据库中检索到592条罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)基因组序列,其中含有SSR(simple sequence repeats)的序列占总数的16.39%,重复基元共有29种,以二核苷酸重复类型和三核苷酸重复类型为主,出现频率分别为14.02%和6.08%。整理G-SSRs序列并设计44对引物,以罗氏沼虾上海地方种群样本DNA为模板,对设计引物进行筛选,有32对引物的扩增产物条带比较清晰,占所设计引物总数的72.72%。用初步筛选得到的26对设计引物和已报道的37对SSR引物对罗氏沼虾江苏、广西以及上海地方种群进行引物的多态性筛选,分别得到9对和7对多态性引物。结果表明,种群的不同、序列的筛选和引物的设计直接影响到获得多态性引物的数量。

Real-time PCR检测黄牛、牦牛、犏牛睾丸组织中Boule、Dazl基因mRNA表达

付永;魏雅萍;吴克选;陈生梅;张立成;王谢忠;孟茹;

2012, 0(10): 150-155.

摘要 ( 70 )

PDF (580KB) ( 462 )

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旨在探讨DAZ基因家族Dazl和Boule基因与犏牛雄性不育的关系。采用实时荧光定量PCR技术检测黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中DAZ基因家族Boule和Dazl基因mRNA表达并进行分析。结果表明,Boule和Dazl熔解曲线扩增产物呈现单特异峰,具有较高的灵敏度和特异性;标准曲线显示Ct值与重组质粒浓度间线性关系良好,相关系数均大于0.999;mRNA表达分析显示,3种牛中Dazl基因在犏牛睾丸组织中表达量最低,其中黄牛与牦牛、黄牛与犏牛差异显著(P<0.05),犏牛与牦牛差异不显著(P>0.05);Boule基因在3种牛睾丸组织中的表达量显示,黄牛与牦牛差异不显著(P>0.05),黄牛、牦牛与犏牛差异显著(P<0.05)。结果提示,Dazl和Boule基因可作为研究犏牛雄性不育的候选基因。

穿心莲ent-柯巴基焦磷酸合酶基因的克隆与生物信息学分析

姚攀;陈慧芝;李竹君;何瑞;杨锦芬;徐晖;

2012, 0(10): 156-162.

摘要 ( 84 )

PDF (1084KB) ( 345 )

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旨在克隆穿心莲CPS的编码基因,并进行序列分析。通过RT-PCR和cDNA末端快速扩增的技术从穿心莲叶片中获得目的基因;并利用生物信息学的方法对其编码蛋白进行功能分析。结果显示,获得了全长2 499 bp的cDNA序列,编码一个833 aa的蛋白。序列同源性比较表明,该蛋白与野甘草、咖啡等其他植物来源的CPS具有较高的同源性。保守功能结构域分析显示,该蛋白包含一个富含Asp残基的植物萜类合酶的共有保守功能域"DXDD",归属于萜类生物合成酶I类超级家族和顺式聚异戊二烯焦磷酸合酶超级家族。初步推测克隆得到了穿心莲CPS的编码基因(命名为ApCPS,GenBank登录号为JN216843.1)。

千里光泛素(Ubiquitin)基因生物信息学与功能分析

蔡振锋;平军娇;张珍;汤贤春;白威峰;钱刚;

2012, 0(10): 163-167.

摘要 ( 102 )

PDF (1102KB) ( 656 )

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为阐明泛素(Ubiquitin)在高等植物中结构与功能的关系,从千里光全长cDNA文库中分离到泛素基因,采用生物信息学方法对其进行系统分析。碱基序列和系统进化树结果显示,千里光泛素基因与果子蔓泛素基因的核苷酸序列(GenBank登录号:GQ890686.1)的同源性最高(87%);尽管碱基位点出现较大的变异,但高度保守氨基酸序列结果提示,泛素的保守位点对维持蛋白质结构和功能发挥关键作用;蛋白质的理化性质、三维结构预测与亚细胞定位结果表明,作为辅酶,泛素主要参与高等植物细胞的信号转导、转录调控和物质转运等功能。

多主棒孢菌调控致病性相关基因CCK1的克隆及生物信息学分析

刘晓妹;蒲金基;张欣;漆艳香;谢艺贤;张贺;郑服丛;

2012, 0(10): 168-172.

摘要 ( 75 )

PDF (531KB) ( 465 )

相关文章 | 计量指标

采用同源克隆、SEFA-PCR和RT-PCR技术克隆获得了多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)CCK1基因的DNA和cDNA。生物信息学分析表明,该基因DNA和cDNA全长分别为2 710 bp和1 065 bp,编码区含4个内含子(长53、54、50和56bp),推测编码354个氨基酸,其分子量约40.98 kD,等电点(pI)6.43。从GenBank搜索相似蛋白和构建进化树发现,CCK1与多个丝状真菌调控致病性相关的PMK1类MAPK蛋白聚为一类,且含1个参与双重磷酸化作用的MAPK蛋白激活域TEY和1个Ser/Thr蛋白激酶保守结构域。推测CCK1基因可能参与调控C.cassiicola菌丝生长、产孢和致病性等。

麻疯树悬浮细胞系的建立与优化

王琼;孔倩倩;李志辉;陈介南;

2012, 0(10): 173-179.

摘要 ( 92 )

PDF (622KB) ( 515 )

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以麻疯树无菌幼苗为外植体,研究疏松愈伤组织诱导方案及不同培养条件对麻疯树悬浮细胞生长的影响,旨在建立麻疯树悬浮细胞体系。结果表明,麻疯树疏松愈伤组织诱导的最适培养基及激素组合为:MS+2,4-D 0.6 mg/L+BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L,此培养基上诱导出的愈伤组织湿润松散,颜色鲜艳。接种愈伤组织进行悬浮培养的液体培养基最适激素组合为:NAA 0.2mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+BA 0.5 mg/L。初代愈伤组织适宜用于悬浮培养,摇床转速应低于120 r/min为宜,这样培养的悬浮细胞分散度最高。培养基中添加500 mg/L水解酪蛋白能有效地促进悬浮细胞的生长。悬浮细胞振荡培养过程中悬浮细胞生长的时间进程为起始培养的第5天前,细胞增殖十分缓慢;第5-11天期间生长迅速;第13天后基本停止生长。在上述优化培养条件下,麻疯树悬浮细胞系增长速率最快,细胞生长状态最佳。

烟草激活标签突变体库的创制和突变表型的初步鉴定

刘峰;刘贯山;张芊;王卫锋;丁昌敏;吕婧;路铁刚;王元英;

2012, 0(10): 180-185.

摘要 ( 95 )

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突变体库在烟草功能基因组研究中具有重要的作用,本研究建立了快速、高效农杆菌介导的烟草遗传转化体系,目前已经创制了3万份激活标签(pSK1015)突变体。利用PCR扩增对突变体库进行阳性检测,扩增结果表明其阳性率接近90%。大田T1代可视突变表型调查结果表明,在团棵期具有可视突变表型的概率为5.4%,在现蕾期具有可视突变表型的概率为3.6%。

A型产气荚膜梭菌α毒素Thr-272基因定点突变与结构分析

樛跃;许崇波;

2012, 0(10): 186-192.

摘要 ( 66 )

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利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第272位苏氨酸(ACA)定点突变成脯氨酸(CCG),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPA-T272P含有CPA-Thr272Pro突变基因,且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的18.34%。应用ExPASy服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-Thr272Pro突变体分子进行二级结构预测,同时模拟了其3D结构。结果显示,CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的二级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成,3D结构非常相似。CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现二者的CD光谱有一些微小变化。磷脂酶C活性检测结果表明,CPA-Thr272Pro突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性。免疫试验结果表明,用CPA-Thr272Pro突变体蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57-1毒素攻击。

不吸水链霉菌武夷变种CK-15遗传转化体系的探索及初建

杨振娟;孙蕾;武哲;张俊;檀贝贝;张克诚;

2012, 0(10): 193-198.

摘要 ( 93 )

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旨在对不吸水链霉菌武夷变种CK-15的遗传转化体系进行初步的探索及建立。首先对内源质粒的存在及对抗生素敏感性进行了测定,结果显示,在不吸水链霉菌武夷变种CK-15中不存在外源质粒。最终确定最适培养基为MS培养基,最适热激温度与时间为50℃热激10 min,37℃温育最适时间为2.5 h,最佳抗生素水溶液覆盖时间为16-18 h,并对转化子进行了验证。

一株南海北部深海沉积环境真菌00457的鉴定及其活性研究

黄智;王发左;田新朋;李洁;张偲;

2012, 0(10): 199-204.

摘要 ( 81 )

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从南海深海沉积环境样品中分离到一株编号为00457的真菌,基于形态学特征、ITS和5.8S rDNA序列比对分析,鉴定该菌株为白黄笋顶孢霉(Acrostalagmus luteoalbus)。活性研究表明,其代谢产物粗浸膏的卤虫致死活性明显,并具有一定强度的抑菌和DPPH自由基清除活性。此外,研究还发现代谢产物粗浸膏在25-100℃持续加热不超过30 min时,卤虫致死活性成分稳定,但在100℃持续加热超过60 min后卤虫致死活性成分显著减少,而一定强度的紫外光照射90 min内则无显著影响。

一株好氧反硝化细菌的分离鉴定及反硝化特性研究

郭端强;刘海龙;万亚涛;李小卫;陈艳艳;管丽冰;单林娜;

2012, 0(10): 205-209.

摘要 ( 105 )

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通过对采集水样进行富集培养,利用溴百里酚蓝(BTB)选择性培养基初筛和活性测定复筛得到一株好氧反硝化细菌N22',发现该菌在好氧条件下能有效去除培养液中的NO3--N。硝酸盐氮初始浓度为125 mg/L,培养40 h后硝酸盐氮去除率达86.39%;扫描电镜照片显示,菌株N22'为短杆菌,无鞭毛,大小约为(0.75-1.25)μm×(0.5-0.75)μm范围内,菌落表面呈乳白色。通过形态、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析,初步判断菌株N22'为不动杆菌属Acinetobactersp.。反硝化性能测试结果表明,该菌反硝化作用的最适温度为25-30℃,pH值7.0。

一株芝麻香型白酒高温大曲嗜热放线菌的分离与鉴定

刘洋;赵婷;姚粟;葛媛媛;信春晖;许玲;程池;

2012, 0(10): 210-216.

摘要 ( 116 )

PDF (491KB) ( 568 )

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自芝麻香型白酒高温大曲中分离到一株嗜热放线菌Zm60,对其进行形态学、生理生化代谢特征鉴定、化学成分分析以及细胞代谢酶活性测定,并结合16S rRNA基因序列分子生物学鉴定及系统发育学分析,结果表明,该菌株归属于高温放线菌属(Thermoactinomycessp.),并且可鉴定为普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris)。其最适生长温度为55℃,细胞壁肽聚糖及氨基酸分别为meso-DAP及Ala、Glu,醌为MK-7,主要脂肪酸组成分别为iso-C15:0(44.01%)、anteiso-C15:0(22.23%)、iso-C17:0(14.16%)、anteiso-C17:0(7.56%)和iso-C16:0(6.18%),具有碱性磷酸盐酶、酯酶、类脂酯酶及萘酚-AS-BI-磷酸水解酶的活性。该菌株是首次从我国芝麻香型白酒高温大曲中分离并鉴定得到的高温放线菌。

具有杀镰孢菌素合成功能基因菌株的筛选与鉴定

于晓溪;吴慧玲;刘铭;董丹;张殿朋;刘伟成;

2012, 0(10): 217-222.

摘要 ( 88 )

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在NCBI数据库中搜索已知多黏类芽孢杆菌基因组中分别编码Fusaricidin合成酶3个NRPS功能区段的核苷酸保守序列,利用Primer5.0软件设计3对引物,对供试的95个细菌菌株进行PCR检测,筛选到1株阳性菌株T99,其3对引物扩增产物的测序结果表明,所得3个功能片段核苷酸序列与多黏类芽孢杆菌SC2和M1的Fusaricidin合成酶基因序列的一致性分别为99%、97%和99%,说明菌株T99基因组中具有Fusaricidin合成相关功能基因。结合形态特征及培养性状、生理生化特性和16SrDNA序列同源性分析的结果,将菌株T99鉴定为多黏类芽孢杆菌。

一株阿维菌素降解菌AW1-18的筛选与分类鉴定

胡秀虹;李景壮;叶胜蓝;徐刚;黄剑;

2012, 0(10): 223-228.

摘要 ( 78 )

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利用富集培养法从长期施用阿维菌素农药的菜豆土壤中分离出18株能利用阿维菌素为唯一碳源和氮源生长的细菌。采用紫外分光光度法对菌株的阿维菌素降解能力进行测定,结果有4株菌有较好的降解率,其中降解率最好的菌株命名为AW1-18。通过高效液相色谱法对AW1-18的降解能力进行测定,结果表明,当接种量为2.5%时,该菌株在含100 mg/L的阿维菌素无机盐基础培养液中,30℃,150 r/min,pH7的条件下培养6 d后,对阿维菌素的降解率达75%以上。用16S rRNA通用引物,经PCR扩增、测序得到AW1-18的16S rRNA序列(GenBank登录号为JQ316540),在NCBI中通过BLAST后发现与不动杆菌属(Acinetobacter)的16S rRNA序列相似性达到99%,结合形态特征和生理生化特性分析结果,确定菌株AW1-18为Acinetobacter tandoii。

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