生物技术通报

王忠华;俞超;吴月燕;

2012, 0(09): 1-7.

摘要 ( 150 )

PDF (416KB) ( 724 )

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花青素苷是一类重要的天然色素物质,是植物主要呈色物质之一,并在人类健康保护方面发挥越来越重要的作用。同时,它又是一类复杂性状,不仅与遗传基因相关,还与外界温度、湿度、光质及栽培措施等因素息息相关。葡萄花青素苷是近年来花青素苷研究的热点,主要从葡萄花青素苷的结构多样性和合成途径等方面展开简要综述,以期为葡萄花青素苷复杂性状的遗传机理和调控作用机制与分子育种及葡萄优质早熟栽培研究上提供有益的信息。

橡胶树“死皮”及其防控策略探讨

邹智;杨礼富;王真辉;袁坤;

2012, 0(09): 8-15.

摘要 ( 155 )

PDF (274KB) ( 1135 )

相关文章 | 计量指标

天然橡胶是一种重要的工业原料,在2 000多种产胶植物中,巴西橡胶树(Hevea brasiliensisMuell.Arg.)以橡胶含量高、质量好、经济寿命长、易采收等独特优点成为天然橡胶的主要来源。作为典型的热带雨林乔木,全球适合橡胶树种植的土地资源极其有限,因而增加橡胶树的单位面积产量一直都是橡胶生产的核心任务。随着高产无性系的大力推广和乙烯利刺激割胶制度的广泛应用,橡胶单产目前已达到了前所未有的高度。然而,由于种种原因,橡胶树产排胶过程中会出现割线局部或全部不排胶的现象,即所谓的"死皮"。"死皮"给橡胶生产带来了巨大的损失(每年造成的干胶损失已超过15%),目前已成为制约橡胶树单产提高的主要因素。由于"死皮"成因的复杂性,至今对"死皮"的发生发展规律知之甚少。结合生产实践,讨论了不同"死皮"类型的主要特征和发生规律,并针对不同"死皮"类型、严重程度提出了一些切实可行的防控策略。

骨形成蛋白-15基因研究进展

崔奎青;朱鹏;刘庆友;石德顺;

2012, 0(09): 16-20.

摘要 ( 100 )

PDF (226KB) ( 348 )

相关文章 | 计量指标

骨形成蛋白-15(BMP-15)是属于转移生长因子-β超家族生长因子的一种分泌型信号分子,仅在卵母细胞中特异性表达,具有促进卵泡生长,阻止黄体早熟的作用。开展对BMP-15基因的研究将有助于人们从基因角度阐明不育或多胎的形成和发展机制,对医学和畜牧业等领域将产生积极的影响。从BMP基因控制排卵数的机制入手,总结BMP-15基因的研究进展。

蛋白水解物在动物细胞培养中的应用研究进展

谷瑞增;刘艳;林峰;刘文颖;马涛;蔡木易;

2012, 0(09): 21-27.

摘要 ( 133 )

PDF (247KB) ( 1538 )

相关文章 | 计量指标

蛋白水解物是蛋白质经水解得到的混合物,其主要成分为肽类。蛋白水解物可优化动物细胞培养基的组成,并且其中所含部分肽段可作为外部分子信号对细胞代谢、生物合成、生长、凋亡及产物表达等生命活动产生特殊的调控作用,因而被广泛应用于动物细胞培养领域,以生产单克隆抗体、疫苗、干扰素等生物制品。其作为无血清或低血清培养基的营养成分,可消除或降低血清带来的病毒微生物污染。随着蛋白水解物生产工艺的改进及优质产品的问世,其必将在细胞培养等生物技术领域发挥越来越重要的作用。

热球菌目(Thermococcales)遗传操作系统研究与应用进展

付寅坤;肖湘;

2012, 0(09): 28-34.

摘要 ( 149 )

PDF (420KB) ( 532 )

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热球菌目(Thermococcales)是一类分离自浅海热泉或者深海热液口的超嗜热微生物,包括火球菌(Pyrococcus)、热球菌(Thermococcus)、古老球菌(Palaeococcus)。研究其生命活动的分子机制,基因的功能等必须借助遗传操作系统。由于选择标记的限制,Thermococcales遗传操作系统落后于其他菌株。近年来,在Thermococcales发现了内源质粒并可以将其改造用作遗传工具。如在Thermococcus kodakarensis及Pyrococcus furious等菌株内都建立了成熟的遗传系统,并用于基因敲除以及基因表达。将就Thermococcales内源质粒的发现和遗传操作系统的发展与应用加以阐述。

阿魏酸酯酶基因工程菌研究进展

陈静;朱汇源;侯运华;周燕燕;胡泓宇;

2012, 0(09): 35-40.

摘要 ( 110 )

PDF (224KB) ( 622 )

相关文章 | 计量指标

阿魏酸酯酶能水解阿魏酸、多聚阿魏酸与木聚糖以及木质素之间形成的酯键,有利于植物细胞壁的降解。介绍阿魏酸酯酶的微生物来源、阿魏酸酯酶基因工程菌构建和阿魏酸酯酶与其他酶相互协同作用等的研究进展。

红鳍东方鲀特异性免疫相关基因的研究进展

崔军;仇雪梅;姜志强;王秀利;

2012, 0(09): 41-45.

摘要 ( 88 )

PDF (209KB) ( 477 )

相关文章 | 计量指标

红鳍东方(Takifugu rubripes)是我国北方重要的经济鱼类,但随着人工养殖规模的扩大,红鳍东方的病害越来越突出,给红鳍东方的生产造成了影响。因此,对红鳍东方免疫相关基因的研究意义十分重大。综述红鳍东方特异性免疫相关基因的研究进展。

宏基因组学技术在微生物功能酶开发中的应用

金浩;李柏林;潘迎捷;欧杰;陈兰明;

2012, 0(09): 46-50.

摘要 ( 96 )

PDF (200KB) ( 791 )

相关文章 | 计量指标

宏基因组学技术以特定环境样品中微生物复杂群落的基因组总和为研究对象,突破了传统微生物纯培养方法的局限,为不可培养微生物中丰富的基因资源的开发和利用提供了强有力的工具,已经取得了令人瞩目的研究进展。对宏基因组学技术及其在微生物功能酶新基因发现中的应用进行综述。

核糖体工程与微生物次级代谢产物合成

蔡成平;王远山;郑裕国;

2012, 0(09): 51-58.

摘要 ( 174 )

PDF (876KB) ( 1093 )

相关文章 | 计量指标

核糖体工程通过对微生物次级代谢产物合成相关基因表达的两个重要元件——核糖体或RNA聚合酶进行修饰和改造,带来其结构和功能上的改变,进而影响次级代谢产物的合成。因此,向核糖体组成元件中引入特定的突变就能够有效地调节次级代谢产物的合成,通过该技术改造有重要商业价值的工业微生物,提高其次级代谢产物(如抗生素)的合成能力,对于微生物次生代谢产物研发及产业化具有重要的科研与经济价值。

烟草HrBP的研究与应用

陈卓;于丹丹;郭勤;刘家驹;王贞超;李向阳;毕亮;胡德禹;杨松;宋宝安;

2012, 0(09): 59-68.

摘要 ( 127 )

PDF (1666KB) ( 722 )

相关文章 | 计量指标

旨在进一步发掘HrBP在新农药创制和抗病品种选育等方面的价值,采用BLAST和Clustal X2软件对HrBP进行序列同源性分析,发现其序列较保守;采用PSIPRED Protein Structure Prediction在线服务器进行烟草HrBP二级结构预测,采用UCLDepartment of Computer Science进行HrBP跨膜结构预测,发现两种可能存在的跨膜方式;采用SWISS-MODEL、Phyre和CPH进行HrBP空间结构预测,发现以膜蛋白为模板进行模建的蛋白具有相似的空间结构;建立基于Real-time PCR的HrBP mRNA定量分析方法,其相关系数为0.999 6;通过ProtScale方法分析HrBP抗原指数,并获得序列特异性较高的多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法制备多肽,并由此制备多克隆抗体,采用Indirect-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,表明多克隆抗体可特异识别烟草HrBP。采用DIBA和Western blotting试验研究多克隆抗体对常见植物的抗原识别特性,发现多克隆抗体对这些植物的HrBP均有一定识别能力。此外,采用Real-time PCR和Indirect-ELISA等方法进行烟草各组织部位HrBP的表达量的研究,发现HrBP在各组织部位存在差异表达。

大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表达

田智蕊;韩红;武志海;李东哲;杨美英;

2012, 0(09): 69-73.

摘要 ( 88 )

PDF (729KB) ( 393 )

相关文章 | 计量指标

以盐诱导后的大豆根为材料,提取总RNA,RT-PCR得到GmOLPa目的片段。对其蛋白序列分析表明,该蛋白属于GH64-TLP-SF同源超家族中的PR-5蛋白,第25-244位氨基酸是其保守结构域,与番茄中的PR-5亲缘关系最为接近。构建GmOLPa基因ORF的原核表达载体pET-28-GP,并对其在大肠杆菌BL21中的表达条件进行优化。SDS-PAGE证实重组质粒能够在大肠杆菌BL21中表达,目的蛋白分子量约为30 kD,最佳诱导时间为4 h,最佳IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L。

绵羊高硫角蛋白KAP1.3基因启动子活性分析

朱汇;张红琳;代蓉;万鹏程;郭洪;石国庆;

2012, 0(09): 74-79.

摘要 ( 91 )

PDF (774KB) ( 402 )

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旨在研究高硫角蛋白基因启动子及相关调控序列的表达活性。以绵羊基因组为模板,克隆KAP1.3基因启动子序列,对其进行5个系列缺失片段pGL4.10表达载体构建,将不同重组质粒转染小鼠成纤维细胞,通过裂解细胞测定其荧光值方法来检测启动子的表达活性。结果显示,除KAP1.3-P5片段其余片段均具有表达活性,其中KAP1.3-P1片段表达活性最高,而缺失-944至-707处的KAP1.3-P2对启动子的活性没有显著影响,但缺失-944至-394处KAP1.3-P3片段对启动子活性影响比较大,从P3和P4的结果中可以看出,虽然两个片段都缺失了转录因子bHLH的结合位点,但P4的活性比P3高出约20%,由此推测在-394至-195之间可能存在一个负调控元件,在-195和-4之间可能存在一个增强元件,但具体的调控元件还需要再进行细致地分析,优化出活性最高且特异性不变的启动子片段。

河西绒山羊DRB3基因外显子2多态性分析

罗秀刚;马小军;张小丽;岳燕;李富强;姜力飞;

2012, 0(09): 80-86.

摘要 ( 79 )

PDF (1356KB) ( 354 )

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研究采用PCR-SSCP方法检测1 046只河西绒山羊DRB3基因第2外显子的多态性,并克隆、测序群体内变异产生的各等位基因,分析各等位基因间的遗传关系和进化意义。结果表明,河西绒山羊DRB3基因第2外显子表现了18个等位基因(LG001-LG018)控制的31个基因型,LG005为优势等位基因,LG005*005为优势基因型,18个单倍型序列分析发现44个核苷酸多态位点、29个氨基酸多态位点;与GenBank下载序列比对分析结果表明,16个DRB3的等位基因是本研究首次发现;DRB3基因遗传多态指数中,观察杂合度为0.269 6,多态信息含量为0.869 9,有效等位基因数为1.369 1;经χ2适合性检验,该群体偏离了Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05);18个DRB3基因外显子2的单倍型序列NJ系统发育树呈2支分化趋势。研究认为河西绒山羊DRB3基因第2外显子具有丰富的遗传多态性;河西绒山羊DRB3基因最初由2个等位基因突变分化成两大类等位基因。

荷包猪一类缺失型SLA-3等位基因的克隆及生物信息学分析

乔翠;许崇波;张兴会;张文军;郭丹;张胜;高凤山;

2012, 0(09): 87-93.

摘要 ( 88 )

PDF (1244KB) ( 351 )

相关文章 | 计量指标

为研究荷包猪SLA-3基因特征,设计引物克隆了荷包猪SLA-3,经生物信息学软件分析其基因特征。结果显示,所克隆的荷包猪SLA-3基因(暂命名为SLA-3-HB02)碱基序列长度为1 417 bp,其中2-1 054为ORF区,共编码350个氨基酸,在其编码的氨基酸334-344处存在缺失。SLA-3-HB02与其他SLA-3、SLA-2及SLA-1等位基因群的氨基酸同源率分别为87.8%-98.6%、82.8%-87.8%和83.7%-90.0%。分子进化关系分析,SLA-3-HB02与美国的Hanford遗传距离较近;各功能区分析,SLA-3-HB02保留了HLA-A2等的部分功能基因位点,并与HLA-B15和H-2K1有一定的交叉识别位点。同源模建揭示SLA-3-HB02分子与HLA-A2及H-2K1 3D结构相似。

绵羊胚胎性别鉴定试剂盒的研究

李海静;马友记;朱化彬;李发弟;

2012, 0(09): 94-98.

摘要 ( 78 )

PDF (741KB) ( 450 )

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根据绵羊Y-染色体的特异序列和常染色序列分别设计了确定公羊Y-染色体特异序列的3对特异性引物和内标基因的4对特异性引物。单重PCR扩增绵羊基因组DNA,筛选出了3对Y-染色体特异引物和3对羊DNA特异内标引物。将不同的绵羊Y-染色体特异引物与内标引物组合,利用多重PCR扩增绵羊基因组DNA,筛选出了1个可用于羊早期胚胎性别鉴定的PCR引物组合:A0/C1。按照最优PCR扩增DNA条件配制了绵羊PCR性别鉴定试剂盒并成功应用于绵羊血液、已知性别的绵羊成纤维细胞和胚胎,表明本研究建立的体系完全可用于绵羊早期的胚胎性别鉴定。

微生物源性抗氧化剂对小鼠抗氧化性能及免疫功能的影响

谷娟;陈小连;李杏;王雅芬;蔡旋;顾永远;徐建雄;

2012, 0(09): 99-103.

摘要 ( 89 )

PDF (212KB) ( 465 )

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旨在探究不同剂量的微生物源性抗氧化剂对小鼠抗氧化性能及免疫功能的影响。将60只28日龄雌性昆明小鼠随机分为4组,每组15只。试验组分别以0.5 g/kg bw*d(低)、1.0 g/kg bw*d(中)、1.5 g/kg bw*d(高)的剂量灌喂微生物源性抗氧化剂,每天1次,连续30 d,灌胃容量为0.2 mL/10 g bw*d,对照组灌喂等容量的蒸馏水。30 d后,测定微生物源性抗氧化剂对小鼠抗氧化性能及免疫功能的影响。结果表明,1.0 g/kg bw*d的微生物源性抗氧化剂可以极显著地提高血清中GSH-Px的活力(P<0.01),显著提高T-SOD活力(P<0.05),降低MDA的含量(P>0.05)。而1.5g/kg bw*d的微生物源性抗氧化剂可以极显著地提高血清中IgA的含量(P<0.01)和IL-2水平,以及ConA刺激的脾淋巴细胞转化率(P<0.01),促进脾脏和胸腺的发育(P>0.05)。提示1.0g/kg bw*d的微生物源性抗氧化剂可以显著增强小鼠的抗氧化能力,1.5 g/kg bw*d的微生物源性抗氧化剂可以增强免疫功能。

EBOV-Z和MARV的NP基因在杆状病毒表达系统的表达及反应原性鉴定

王宗尧;史子学;刘阳;朱紫祥;吴德峰;王水明;刘学辉;马志永;

2012, 0(09): 104-108.

摘要 ( 93 )

PDF (720KB) ( 497 )

相关文章 | 计量指标

利用昆虫杆状病毒表达系统,成功地对埃博拉(EBOV)扎伊尔型病毒和马尔堡病毒(MARV)的NP基因进行表达。Western blot结果显示,重组EBOV蛋白和重组MARV-NP与各自阳性血清有特异的反应原性,在血清学上无交叉反应。IFA检测感染重组昆虫杆状病毒的Sf9细胞表明,EBOV和MARV NP获得大量表达,呈现强烈的荧光,对照组细胞无特异荧光。该研究为EBOV和MARV流行病学调查和研制诊断试剂盒奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10的表达及鉴定

周思旋;徐健;周碧君;文明;王开功;

2012, 0(09): 109-113.

摘要 ( 59 )

PDF (864KB) ( 272 )

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为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株非结构蛋白Nsp10,以克隆质粒pMD18-T-Nsp10/JL为模板,将Nsp10基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对不同温度和IPTG浓度进行优化,以获得Nsp10蛋白表达的最佳条件,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,并通过Western blotting检测其免疫活性。结果表明,Nsp10基因成功克隆至pET-32a,有分子量约为43.4 kD的融合蛋白获得表达,重组蛋白于诱导4 h后达到高峰,IPTG浓度为0.2-1.2 mmol/L时,重组蛋白表达量无明显差异,Western blotting证实该表达蛋白具有反应原性。

狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化

鞠美芳;殷相平;柳纪省;

2012, 0(09): 114-119.

摘要 ( 79 )

PDF (939KB) ( 319 )

相关文章 | 计量指标

旨在有效检测狂犬病毒抗原及抗体。以狂犬病病毒aG株为模板,反转录扩增糖蛋白膜外区基因,并进行序列测定。将目的片段与表达载体pET-32a(+)分别双酶切、胶回收后相连并转化至Rosseta(DE3)菌株。选取阳性克隆经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting及质谱鉴定。结果显示,在大肠杆菌中成功表达了糖蛋白膜外区。本研究为建立检测狂犬病毒抗原及抗体的ELISA诊断方法奠定了基础。

hPdx1和△-hPdx1蛋白表达系统的构建及功能鉴定

王小莉;梁清乐;李东升;

2012, 0(09): 120-124.

摘要 ( 96 )

PDF (700KB) ( 350 )

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经鉴定成功构建了hPdx1和△-hPdx1蛋白表达系统,IPTG诱导蛋白表达后Western blot检测在37.2-52.3 kD之间出现了与两种目的蛋白理论分子量相符的蛋白条带。诱导后破碎菌体上清液,经分离纯化最终得到的目的蛋白纯度可达到95%以上。纯化的蛋白加入人胚胎干细胞培养基中1 h后通过细胞免疫荧光检测发现,hPdx1蛋白可进入细胞而△-hPdx1不能进入细胞,表明表达得到的蛋白具有生物活性。

CP7菌株抗菌物质对真菌的活性及其作用机制研究

黄旭华;廖富蘋;林健荣;朱方容;林强;汤庆坤;黄深惠;

2012, 0(09): 125-130.

摘要 ( 91 )

PDF (1129KB) ( 344 )

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旨在研究多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CP7菌株分泌的抗菌物质对玉米大斑菌和白色念珠菌的活性作用。结果显示,CP7菌抗菌物质对玉米大斑菌和白色念珠菌的菌丝、孢子生长有强烈的抑制作用,CP7菌抗菌物质处理后,玉米大斑菌的菌丝出现畸形、扭曲,细胞外壁皱缩,原生质发生凝聚,产生空泡,细胞器消溶,核区出现核固缩等现象;白色念珠菌的细胞壁和细胞膜模糊,原生质有凝聚现象,细胞器消溶,细胞核变形。推测CP7菌株抗菌物质是破坏真菌的细胞壁和细胞膜结构,形成通道,引起内容物外渗,破坏细胞内部结构,使原生质凝聚,细胞核固缩,最终使菌体死亡。

嗜热厌氧杆菌X514生长及代谢的初步研究

凌小芳;谢天;杨静;

2012, 0(09): 131-136.

摘要 ( 80 )

PDF (781KB) ( 242 )

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嗜热厌氧杆菌X514(Thermoanaerobactersp.X514)是纤维素乙醇生产中最具潜力的菌株之一。对X514在3种培养基中的生长及代谢特征进行分析后发现,培养基1190比GS-Ⅱ和2473更适合运用于X514的代谢研究及乙醇发酵。其次,分别在1190培养基中添加不同浓度的酵母提取物和葡萄糖,对X514的生长及代谢作进一步研究。结果表明,在0.5-2 g/L范围内,酵母提取物浓度的增加有助于提高X514的生物量,乙醇等产物的产量及乙醇产率,说明酵母提取物对X514生长及乙醇发酵有促进作用;在2-10 g/L范围内,葡萄糖浓度的增加可提高乙醇等产物的产量而不会改变各产物的产率;糖消耗量并不随着初始底物浓度的增加而线性增长,而是在一定阶段趋于消耗最大值。反映了X514在底物充分的条件下,只有通过改进其他制约条件,才有可能提高底物的利用率及产物的产率。

共附生微生物抗肿瘤活性菌的筛选与鉴定

马君千;王雪玲;缪莉;董昆明;周晓见;靳翠丽;封克;

2012, 0(09): 137-142.

摘要 ( 114 )

PDF (724KB) ( 484 )

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对分离自海绵和植物组织的一些微生物进行抗肿瘤活性菌株的筛选。采用SRB法对252株微生物菌株的发酵提取物进行了抗肿瘤活性的筛选。结果显示,28%的测试菌株在提取物浓度为100μg/mL时对HeLa细胞的抑制率在50%以上,经复筛确定有6株细菌和1株真菌具有良好且稳定的抗肿瘤活性,其提取物在100μg/mL时对HeLa细胞的抑制率均在80%以上,其中活性最高的两株菌HMJ-390和YX-5对HeLa细胞的IC50分别为40.56μg/mL和5.33μg/mL。经16S rDNA和ITS rDNA序列分析,鉴定HMJ-390为Cellulophagasp.,YX-5为Aspergillussp.。结果表明,作为抗肿瘤药物的潜在来源共附生微生物值得关注。

植物病原真菌广谱拮抗菌的筛选鉴定及发酵条件初步研究

谢昕;杨英歌;黄继翔;

2012, 0(09): 143-148.

摘要 ( 104 )

PDF (665KB) ( 557 )

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通过对峙培养法筛选到对8种植物病原真菌具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株,通过测量10-30℃下的抑菌圈直径发现AFB037菌株在不同温度下抑菌效果最好。通过表型和16S rDNA序列分析将AFB037菌株鉴定为多粘类芽孢杆菌。AFB037菌株抗菌成分的产生需要真菌菌体成分的诱导,提示其有效成分可能为细胞壁降解酶类。

短芽孢杆菌低温弹性蛋白酶酶学特性分析

高兆建;巫有华;张桂英;李同祥;张莉;

2012, 0(09): 149-154.

摘要 ( 94 )

PDF (539KB) ( 483 )

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旨在从短芽孢杆菌(Bacillus brevis)XZE116发酵液中分离纯化低温弹性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行纯化。结果显示,分离纯化到了均一的酶蛋白,酶纯度提高了37.21倍,回收率为35.3%。SDS-PAGE及Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析显示酶蛋白为单亚基蛋白,分子量是32.6 kD。最适作用温度25℃。在pH7.5-10.5范围内酶活性及稳定性较高,最适作用pH9.0,Mg2+对酶有明显激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂强烈抑制酶活性,表明所纯化到的弹性蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶。酶对阴离子表面活性剂(0.1%SDS)、阳离子表面活性剂(0.1%CTAB)和非离子型表面活性剂(1%Tween80)均具有很强的稳定性。鉴于短芽孢杆菌XZE116弹性蛋白酶具有以上优良酶特性,它在肉品嫩化领域具有潜在的应用价值。

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定

刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春;

2012, 0(09): 155-159.

摘要 ( 109 )

PDF (689KB) ( 363 )

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建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法。将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7%。最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。

斑马鱼神经介素S直系同源基因的克隆、序列分析及组织表达

陈文波;张珍;王琳凯;

2012, 0(09): 160-165.

摘要 ( 88 )

PDF (829KB) ( 438 )

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旨在更深入和广泛了解脊椎动物NMS前体基因的结构、进化和生理功能,利用生物信息学和分子生物学技术从斑马鱼脑组织中克隆得到了NMS前体基因序列,并对其基因和蛋白结构以及组织表达等方面进行了分析。结果表明,斑马鱼NMS前体基因cDNA序列编码110个氨基酸组成的多肽,其中包含22个氨基酸的信号肽。脊椎动物NMS前体蛋白序列比对结果显示,与哺乳动物不同,硬骨鱼类NMS前体蛋白在C端缺失很大一部分序列,不能形成类似哺乳动物的NMS成熟肽,经蛋白酶切割可能形成同源性较高的34个氨基酸的多肽。进化树和基因组分析显示,斑马鱼和青NMS前体蛋白聚类在一起,位于NMS这一分支上。同时,NMS前体基因在斑马鱼、青和人基因组中具有同线性关系。半定量RT-PCR结果显示,NMS前体基因在所检测的斑马鱼各组织中均有表达,其中以脑中表达量为最高。

斑点叉尾鮰NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建

张卓娜;陶妍;

2012, 0(09): 166-172.

摘要 ( 122 )

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以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,它们被推测与NK-lysin的抗菌活性有关。为了进一步构建原核表达系统用于成熟肽的表达,pET-32a(+)被选择作为融合表达质粒,该质粒含有1个trxA融合头基因,与目的片段mNK-lysin连接后形成融合基因trxA-mNK-lysin,进而有助于在工程菌E.coliBL21(DE3)中的可溶性融合表达。通过PCR、EcoR I和HindⅢ双酶切处理以及DNA测序鉴定,证明pET-32a-mNK-lysin重组融合表达质粒已经被成功构建;将其转化至工程菌E.coliBL21(DE3)后的测序结果表明该重组质粒未发生任何DNA变异。

德国小蠊变应原Bla g 8的克隆表达及进化分析

龙高群;张春林;

2012, 0(09): 173-178.

摘要 ( 90 )

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通过5'-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5'-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法分析预测Bla g 8蛋白的信号肽、疏水性、跨膜区、二级结构、三级结构;建立系统进化树;构建原核表达载体pET32a-B8,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,获得编码德国小蠊变应原Bla g 8的全长cDNA序列,其完整阅读框含618个碱基,编码205个氨基酸。序列分析显示该蛋白,肌球蛋白轻链,具有EF手蛋白保守功能域。IPTG诱导获得重组蛋白。获得德国小蠊Bla g 8的完整cDNA序列,成功构建重组原核表达质粒pET32a-B8,并表达出融合蛋白。

摄食不同饵料草鱼肠道菌群PCR-DGGE指纹图谱构建及分子鉴定

郁二蒙;毕香梅;谢骏;王广军;余德光;龚望宝;王海英;李志斐;

2012, 0(09): 179-184.

摘要 ( 86 )

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采用免培养的16S rDNA梯度凝胶电泳技术(DGGE)对摄食不同饵料(非膨化饲料组、膨化饲料组和蚕豆组)的草鱼肠道内容物细菌分析建立指纹图谱,并对主要优势条带进行了切胶克隆和测序。PCR-DGGE指纹图谱初步分析发现,非膨化饲料组、膨化饲料组和蚕豆组分别产生了19条、16条和15条可以鉴别的条带,且均有2-3条优势菌条带;非膨化饲料组样品和蚕豆组样品的DGGE指纹图谱的相似性系数为53.6%,非膨化饲料组菌群和膨化饲料组的相似性为39.4%。对PCR-DGGE指纹图谱主要条带进一步回收、克隆和测序,结果共得到25条序列,将所得到的序列在NCBI数据库中同源性分析,发现草鱼肠道内容物细菌群落主要为弧菌科、肠杆菌科和气单胞菌属细菌,其中包括14条不可培养细菌。

美丽硬仆骨舌鱼mtDNA D-loop区遗传变异特征

牟希东;宋红梅;汪学杰;杨叶欣;罗渡;顾党恩;罗建仁;胡隐昌;

2012, 0(09): 185-190.

摘要 ( 147 )

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采用直接测序法分析美丽硬仆骨舌鱼(Scleropages formosus)3个种群(金龙鱼、红龙鱼和青龙鱼)共24个个体的线粒体D-loop区的遗传变异特征。经序列比对、分析,金龙鱼、红龙鱼和青龙鱼的D-loop序列不仅在个体间存在位点序列的变异(17个简约性信息位点),而且还存在序列长度的多态性(长度为915-924 bp),这种长度的差异在于存在不同碱基长度的微卫星序列。3种龙鱼碱基组成基本一致,G含量偏低。定义了10种单倍型,但金龙鱼、红龙鱼和青龙鱼间没有共享单倍型,单倍型多样度较高(0.667-1.00),核苷酸多样度较低(0.001 09-0.003 23)。AMOVA分析显示,变异主要来自地理区内不同群体间,个体间遗传距离为0-0.008 7,显示遗传变异仍处于种内水平。NJ、MP和Bayesian构建的分子系统树拓扑结构基本一致,但不能有效地反映金龙鱼、红龙鱼和青龙鱼间的亲缘关系。

三个牡蛎群体遗传多样性的AFLP分析

陈之桥;仇雪梅;于旭蓉;常亚青;刘洋;王秀利;

2012, 0(09): 191-196.

摘要 ( 79 )

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采用AFLP技术对太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、近江牡蛎(Crassostrea rivularis)和褶牡蛎(Crassostrea plicatula)3个牡蛎群体共60个个体进行了遗传多样性分析。结果表明,14对引物共扩增得到662个位点,其中多态性位点619个,多态性位点比例为93.50%。太平洋牡蛎、近江牡蛎和褶牡蛎多态位点比例依次为73.26%、70.54%和75.08%,Nei氏基因多样性指数分别为0.256 9±0.197 7、0.226 1±0.195 2和0.268 3±0.194 1,Shannon信息指数分别为0.382 3±0.276 2、0.341 4±0.274 1和0.398 8±0.270 9。上述结果表明,3个牡蛎群体的遗传多样性水平褶牡蛎最丰富,太平洋牡蛎次之,近江牡蛎最小。基因分化系数Gst和基因流系数Nm表明这3个牡蛎群体之间存在一定的基因交流。UPGMA聚类分析表明,太平洋牡蛎和近江牡蛎先聚为一支,而后与褶牡蛎聚在一起。

宁波港压载水浮游植物多样性的研究

周君;刘兵;李春丽;王中华;姜南;苏秀榕;李太武;

2012, 0(09): 197-201.

摘要 ( 67 )

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为了避免压载水作为媒介转移外来物种并造成污染危害,利用分子生物学技术研究宁波港来自印度洋、新加坡和美洲的压载水浮游植物。结果显示,新加坡和美洲的压载水没有检测到浮游植物。而印度洋的压载水里面含有硅藻门的直链藻属(Aulacoseirasp.)、海链藻属(Thalassiosirasp.)、骨条藻属(Skeletonemasp.)、冠盘藻属(Stephanodiscussp.)和星盘藻属(Discostellasp.);隐藻门的全沟藻属(Teleaulaxsp.)和斜片藻(Plagioselmissp.);绿藻门的括小球藻属(Chlorellasp.)、卵囊藻属(Oocystissp.)和Pseudococcomyxasp.;链形植物门包括新月藻属(Closteriumsp.)。同宁波港的港池浮游植物相比,生长速度快、抗逆性强的硅藻数量明鲜增多,有些种类是外来的。

检测生精过程中减数分裂完成的质粒载体的构建

于泊洋;罗奋华;张岩;吴应积;

2012, 0(09): 202-207.

摘要 ( 76 )

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旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。

诱导多能干细胞技术的专利保护及价值分析

侯士芳;黄家学;

2012, 0(09): 208-210.

摘要 ( 114 )

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<正>1已授权iPS细胞专利格局2008年9月,日本专利局通过快速审批程序授权了首个iPS细胞技术专利,并将iPS细胞专利技术实例列入日本专利局(JPO)《审查基准》,以确保日本在本领域的领先地位。此后,美欧等多国专利局相继授权多项iPS细胞专利(表1)。

陶氏沃尔富纤维素业务部再献创新科技医药级美多秀~(TM)(METHOCEL~(TM))VLV助力中国制药行业控制总体拥有成本

生物技术通报

2012, 0(09): 212-212.

摘要 ( 81 )

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