生物技术通报

张秋磊;林敏;平淑珍;

2008, 0(02): 1-4.

摘要 ( 172 )

PDF (109KB) ( 640 )

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氮是限制农业生产的重要营养元素。生物固氮指某些原核生物能利用体内的固氮酶将空气中的氮气还原为氨,为植物生长提供氮素。自然界中存在多种具有固氮能力的微生物,依据其固氮方式分为自生固氮、共生固氮和联合固氮三种类型。联合固氮菌通过趋化定殖在植物根表,并生长、固氮。

环境因子对植物叶绿体结构的影响

焦雨歆;赵琦;王雪英;夏亮;孙德兰;

2008, 0(02): 5-10.

摘要 ( 66 )

PDF (514KB) ( 1012 )

相关文章 | 计量指标

叶绿体是一种对环境变化敏感的细胞器,环境变化通常会直接造成叶绿体大小、位置、类囊体片层、淀粉粒数量等方面发生适应性变化。从上述几个方面综述了植物叶绿体结构对CO2浓度、温度、光照、水分胁迫等环境因子及多因子复合作用的适应性变化,分析了该领域的研究特点及方向。

赤霉病菌特异抗体-防御素融合蛋白的表达和功能鉴定

秦春圃;

2008, 0(02): 10-10.

摘要 ( 59 )

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<正>华中农业大学生命科学技术学院刘春雷,该校植物科技学院廖玉才,张静柏等科研专家选择对赤霉病菌具有高度特异性和亲和力的单链抗体,用它与植物防御素构建成融合蛋白基因,再将融合蛋白及防御素基因分别与细菌表达载体pGEX和植物表达载体pMBL4构建成重组载体,在细菌中经IPTG诱导表达GST融合蛋白、亲和层析纯化蛋白;用经根癌农杆菌介导的真空渗入法在烟草中瞬间表达,然后提取叶片总蛋白用于鉴定。经抑菌活性分析表明:烟草叶片瞬间表达的防御素和抗体-防御素融合蛋白,均对赤霉病菌有强烈的抑菌作用。他们发现从细菌中纯化的防御素蛋白,也能有效地抑制赤霉病菌的生长。

P_(SAG12)-ipt基因转化植株研究进展

张根良;王文泉;

2008, 0(02): 11-14.

摘要 ( 69 )

PDF (111KB) ( 264 )

相关文章 | 计量指标

叶片衰老是一种程序性死亡过程;ip(t isopentenyl transferas)基因转化植株,可以催化调控内源细胞分裂素合成,延缓转化株叶片衰老。SAG12基因启动子能够控制ipt基因在植株下部衰老叶片中表达。介绍了ipt基因和SAG12基因启动子的来源和应用,以及PSAG12-ipt基因的产生和转化植株在国内的研究概况。

植物丝氨酸羟甲基转移酶基因研究进展

马莉;陈丽梅;

2008, 0(02): 15-19.

摘要 ( 104 )

PDF (290KB) ( 506 )

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丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)是一个含有磷酸吡哆醛(PLP)的四聚体的蛋白质,在亚甲基四氢叶酸(CH2-THF)存在时催化丝氨酸和四氢叶酸生成甘氨酸和N5,N10-亚甲基四氢叶酸的可逆反应。SHMT在高等植物的一碳代谢和光呼吸中起着非常重要的作用,最近随着植物SHMT纯化技术的进步和重要模式植物基因组测序的完工,使很多植物SHMT基因被克隆出来,并对它们的结构和功能及表达调控进行研究。

植物多酚相关基因的研究进展

张虎平;

2008, 0(02): 20-22.

摘要 ( 79 )

PDF (114KB) ( 473 )

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植物多酚对人体的保健作用已引起人们的广泛关注。大豆异黄酮和白藜芦醇是两类重要的多酚物质。综述了大豆异黄酮和白藜芦醇的研究进展,重点阐述了大豆异黄酮合成酶基因和白藜芦醇合成酶基因的遗传转化,并对该领域今后的研究做了展望,为通过基因工程调控植物多酚的合成提供了新思路。

水稻光温敏不育基因研究概况

蔡春苗;施碧红;赵明富;黄招德;

2008, 0(02): 23-27.

摘要 ( 83 )

PDF (142KB) ( 267 )

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光温敏雄性核不育水稻的花粉育性受日照长度或温度的调控,在长日、高温条件下表现不育,短日、低温条件下表现可育。水稻这一特性的发现使得人们可以利用其进行‘两系法’杂交稻育种来补充传统的‘三系法’杂交育种体系。水稻光温敏核不育基因的研究对于‘两系法’杂交稻育种的利用研究至关重要。主要对光温敏核不育基因的遗传规律分析、基因的定位研究进展以及DAN分子标记在基因定位中的应用等方面进行了综述。

转基因动物器官移植的安全问题及对策研究

吴易雄;田勇泉;

2008, 0(02): 28-30.

摘要 ( 96 )

PDF (84KB) ( 461 )

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从转基因动物器官移植的概念入手,就转基因动物器官移植的安全问题作了分析,指出了目前转基因动物器官移植遇到的最大障碍是跨物种感染,并就加强转基因动物器官移植安全管理提出了一些对策。

表皮生长因子家族及其在海胆中的研究进展

郑明洁;王秀利;常亚青;仇雪梅;丁君;

2008, 0(02): 31-34.

摘要 ( 70 )

PDF (279KB) ( 364 )

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表皮生长因子家族(Epidermal growth factor family)是一组具有与表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)较高同源结构及相似生物学功能的糖蛋白,均为EGF受体的配体,具有调节胚胎细胞生长和分化以及与移动的细胞外基质蛋白相互作用等特点。综述了海胆EGF家族成员的基本生物学特性及其EGF相关蛋白家族的研究进展。

细菌的锌抗性基因及其在生物修复中的应用

刘义;何钢;陈介南;周再魁;王义强;

2008, 0(02): 35-38.

摘要 ( 57 )

PDF (442KB) ( 354 )

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随着工业时代的发展,人源性排放已成为环境锌污染的主要来源。这不但破坏了生态系统的稳定,更经食物链富集,对人类健康造成严重威胁。利用含锌抗性基因的(重组)细菌等进行锌治理是生物修复的途径之一。阐述了细菌锌抗性基因的结构、表达产物和一些相关的作用机制,展望其在生物修复方面的应用。

gyrB基因在细菌系统发育分析中的应用

郝云婕;韩素贞;

2008, 0(02): 39-41.

摘要 ( 154 )

PDF (86KB) ( 671 )

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细菌gyrB编码DNA促旋酶的B亚单位蛋白,对细菌DNA的转录和复制很重要。因不显现频繁的基因横向转移并且基于该序列的分析与DNA杂交同源性分析有较好的一致性,近年来常被选用于细菌系统发育分析及细菌鉴定,一般采用对该基因测序或对其PCR产物RFLP等方法进行研究。

食用菌原生质体融合育种研究进展

任轩;贾乐;杨凤苓;马福荣;李明才;

2008, 0(02): 42-44.

摘要 ( 73 )

PDF (112KB) ( 783 )

相关文章 | 计量指标

原生质体融合是微生物遗传育种中的一项重要技术,可以在种间、属间及科间构建出新型菌株,同时也是菌种改良的重要手段之一,在遗传育种中具有广阔的应用前景。从食用菌原生质体融合技术在育种上的特点,原生质体制备及影响因素,融合方法,融合子的鉴定以及前景展望等方面进行了综述。

金属硫蛋白的功能及应用前景

邢树礼;王洪光;赵帅;

2008, 0(02): 45-47.

摘要 ( 146 )

PDF (84KB) ( 465 )

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金属硫蛋白(Mt)是科学家margoshes和vallee发现的,它是一种低分子量,富含半胱氨酸可结合重金属的蛋白质,与调节细胞生长与增殖的金属调节蛋白有关,分布在哺乳动物组织器官中。人们为了能清肿瘤产生的过程,尝试了各种生物标记物,例如,癌基因、p53抑癌基因、waf1蛋白质、多育细胞核抗原、端粒转移酶、小随体标记物。人们发现在人类各种肿瘤中都有分泌Mt,因此它也可以作为生物标记物。人们对Mt的检测是利用免疫组织化学的方法,将肝切片放置在用石蜡密封的冷丙酮中保藏,用抗生物素蛋白链菌素免疫过氧化物酶的方法进行检测。

甜菊醇糖苷生物合成及关键酶研究进展

倪万潮;郭书巧;

2008, 0(02): 48-53.

摘要 ( 152 )

PDF (578KB) ( 1118 )

相关文章 | 计量指标

甜菊醇糖苷(steviol glycosides,SGs)是甜叶菊(Stevia rebaudian)叶片中一类天然甜味剂,具有高甜度、低热量、无毒副作用等特点,同时还具有一定的药理作用。植物体内主要是通过甲基赤藓糖醇(MEP)途径形成牻牛儿牻牛儿焦磷酸(GGPP),之后该物质在古巴焦磷酸合酶(CPPS)、贝壳杉烯合酶(KS)、贝壳杉烯氧化酶(KO)、糖菊苷转移酶(UGTs)等一系列结构功能各异的酶的作用下最终生成甜菊醇糖苷。SGs生物合成途径的调控及该途径中关键酶的研究已成为目前国内外生物学领域的一大热点。综述了甜叶菊SGs生物合成途径和参与该途径中的关键酶及其基因的研究进展,并展望了其应用前景。

提高有机催化脂肪酶活性和稳定性的途径研究

刘涛;闫云君;

2008, 0(02): 54-59.

摘要 ( 58 )

PDF (165KB) ( 337 )

相关文章 | 计量指标

随着非水酶学的发展,脂肪酶在有机催化反应中得到广泛应用,探寻提高有机催化脂肪酶的催化活性和操作稳定性的途径也随之成为研究热点。综述了近年来这一研究方向的成果及最新进展,着重阐述表面活性剂包衣、固定化以及二者结合的手段对脂肪酶在有机介质中的催化活性及操作稳定性的影响。

甘露聚糖酶的多样性分析

周海燕;赵文魁;吴永尧;

2008, 0(02): 60-63.

摘要 ( 58 )

PDF (430KB) ( 703 )

相关文章 | 计量指标

不同来源的甘露聚糖酶在组成、结构形式、理化性质以及催化功能等方面表现出丰富的多样性,其原因主要在于底物多样性的选择、编码基因的差异、翻译后加工修饰的差异以及酶作用微环境的影响,对此进行了综述。

酶的固体发酵生产研究进展

孙巍;刘学铭;

2008, 0(02): 64-67.

摘要 ( 61 )

PDF (370KB) ( 685 )

相关文章 | 计量指标

由于固体发酵具有基质来源广泛、能耗少、对环境友好和生产成本低等特点,在酶的生产中仍得到较广泛的应用。介绍了固体发酵产酶的种类和产酶微生物,基质来源及发酵条件控制技术等方面的进展,总结了固体发酵产酶存在的问题,并提出了今后该领域的研究方向。

透明质酸制备的研究进展

吴明霞;邓静;吴华昌;陈艺德;

2008, 0(02): 68-72.

摘要 ( 226 )

PDF (139KB) ( 538 )

相关文章 | 计量指标

透明质酸(Hyaluronic acid简称HA)是一种国际上公认的生物大分子保湿剂,用于眼科显微手术、关节炎治疗、高级化妆品等领域。目前,透明质酸的生产方法逐渐由动物组织提取法转向微生物发酵法。细菌发酵法生产透明质酸具有产量不受原料资源限制、成本低、产量高、有较高的相对分子量,分离纯化工艺简便,易于大规模生产等特点成为透明质酸生产的发展方向,应当进一步深入研究。综述了透明质酸的化学结构、理化性质、应用及生产方法等方面的研究现状,并预测了其以后发展趋势。

以油体作为生物反应器的研究进展

赵传志;卢金东;苏磊;毕玉平;王兴军;

2008, 0(02): 73-76.

摘要 ( 75 )

PDF (260KB) ( 396 )

相关文章 | 计量指标

获得安全、经济、稳定具有生物活性的重组蛋白,应用于基础研究及临床应用是一个重大的战略课题,现在可以利用酵母、细菌和动物细胞生产多种药物蛋白,但这些蛋白的生产过程还存在许多问题。利用植物作为生物反应器生产药用蛋白和疫苗是目前生物反应器研究的热点。油体蛋白在油料作物种子中高水平表达且易于分离,经过改造后是生产目的蛋白的一种理想载体。介绍了油体、油体蛋白的结构以及利用植物油体蛋白表达体系这一新型植物生物反应器生产目的蛋白的研究进展和前景。

细胞培养基底单轴拉伸装置的研制

梅翀;黄岂平;夏俊培;徐东;陈效;

2008, 0(02): 77-79.

摘要 ( 75 )

PDF (255KB) ( 366 )

相关文章 | 计量指标

为了解决现有加载装置存在因基底膜面积太小而不能实现对大量细胞内蛋白一次性取样进行研究的问题,研制了一种适于大面积细胞培养拉伸装置,该装置还具有具有对应变的大小、方向、频率和时间可控的优点,可广泛地运用于细胞力学加载的相关领域的研究工作。

基因敲除技术研究进展

李樊;刘义;何钢;

2008, 0(02): 80-82.

摘要 ( 205 )

PDF (208KB) ( 1821 )

相关文章 | 计量指标

基因中断技术是研究基因功能和实现基因的精确缺失重要手段。原核中断系统最近发展较快的是利用λ噬菌体的Red系统在细菌中进行的基因敲除技术,但多在大肠杆菌中进行;真核中断系统属PCR介导的酵母基因中断技术和RNAi干涉技术发展最快。这几种中断技术都大大简化了实验操作,缩短了实验时间,在研究生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景。

细菌人工染色体文库的构建方法分析

吴宏梅;刘长青;刘帅;包阿东;陆涛峰;关伟军;马月辉;

2008, 0(02): 83-87.

摘要 ( 158 )

PDF (140KB) ( 416 )

相关文章 | 计量指标

细菌人工染色体是一种承载大片段DNA的新型载体系统,它具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。在高等生物基因组文库的构建和基因功能的分析等方面有广泛应用。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的重要基础。介绍了近年来细菌人工染色体文库构建方法上的研究进展,对其中载体的制备和高分子量DNA的制备这两个关键环节作了较深入的探讨。

家蚕核型多角体病毒ORF 75基因的克隆和表达

秦春圃;

2008, 0(02): 87-87.

摘要 ( 65 )

相关文章 | 计量指标

<正>河南农业大学植保学院尹新明、安世恒、江志伟、胡鹏等博士、教授根据GenBank序列L 33180设计引物用PCR技术扩增了编码家蚕核型多角体病毒bombyx mori nueleopolyhedrovirus,BmNPV ORF 75基因的DNA片段,将其连接至PMD 18-T载体上,获得了该基因的成熟蛋白阅读框序列,用设计的酶切位点将目的基因从克隆载体上切下,表达质粒PGEX-4T-2经Bam HL/XhoI双酶切,与目的片段连接,得到重阻表达质粒PGEX/Bm75。

RNAi在抗HIV-1中的应用研究进展

陈保锋;张东;孙景梅;张杰;

2008, 0(02): 88-92.

摘要 ( 63 )

PDF (172KB) ( 444 )

相关文章 | 计量指标

目的综述RNA干扰在抗HIV-1治疗中的应用研究进展。方法广泛查阅国外和国内近年来有关RNA干扰在抗HIV-1治疗中的应用研究的文献并进行综述。结果RNA干扰这一自然存在的、进化保守的抗病毒感染机制,导致序列特异的基因沉默。体外证明小干扰RNA能有效对抗HIV-1感染并抑制HIV在细胞内复制与表达。结论RNA干扰有可能成为一种新的防治HIV-1感染的有效治疗方法。

单核苷酸多态性检测方法的研究进展

陈冬;吴登俊;

2008, 0(02): 93-96.

摘要 ( 111 )

PDF (391KB) ( 2132 )

相关文章 | 计量指标

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)作为第三代遗传标记已经广泛应用于基因作图、疾病相关性分析、群体遗传学及药物研究等领域。因此建立高度自动化和高通量的SNP检测分析技术十分重要。简要介绍了国内外几种主要SNP检测技术的原理和检测分析手段,并对SNP高通量检测技术的发展进行了展望。

有机磷水解酶的表面显示技术研究进展

方建军;柳华贵;钟卫鸿;

2008, 0(02): 97-100.

摘要 ( 83 )

PDF (152KB) ( 234 )

相关文章 | 计量指标

有机磷化合物在农业中的广泛应用,给农作物带来增产的同时对环境造成污染,严重威胁着人类的健康,其生物解毒已受到高度重视。有机磷水解酶(OPH)是目前处理有机磷化合物最有效的水解酶类,而通过基因工程手段获得高表达、高降解效率的OPH,尤其是OPH的表面显示技术是近年来的研究热点。主要综述了大肠杆菌、假单胞菌、酿酒酵母的OPH表面显示技术研究及应用进展和发展趋势。

多浆旱生植物霸王Actin基因片段的克隆及序列分析

伍国强;席杰军;包爱科;王锁民;

2008, 0(02): 101-104.

摘要 ( 71 )

PDF (797KB) ( 529 )

相关文章 | 计量指标

根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以霸王叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明:该片段长598bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的Actin基因序列的同源性均在82%以上,与其他肌动蛋白的氨基酸序列的同源性达91%以上。

植物翻译控制肿瘤蛋白的分子结构特征与功能预测分析

陈玉芹;王喆之;

2008, 0(02): 105-112.

摘要 ( 85 )

PDF (1381KB) ( 638 )

相关文章 | 计量指标

翻译控制肿瘤蛋白(The translationally controlled tumor protein,TCTP)是一类广泛存在于动物、植物及酵母中的,在进化上高度保守、与其它任何蛋白家族均未显示出明显的序列同源性的蛋白。采用生物信息学的方法和工具对已在GenBank上注册的拟南芥(Arabidopsis thaliana)、牵牛(Ipomoea nil)、草莓(Fragaria x ananassa)、橡胶树(Heveabrasiliensis)、南瓜(Cucurbita maxima)、卷心菜(Brassica oleracea)的翻译控制肿瘤蛋白的核苷酸及氨基酸序列进行分析,并对其组成成分、转运肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质的二级及三级结构、分子系统进化关系等进行预测和分析。结果表明,该基因的全长包括5'、3'非翻译区和一个开放读码框,其编码的蛋白是一个无跨膜结构域,不具转运肽的亲水性蛋白,包括一个β-折叠核心区和一个主要的α-螺旋区,不规则卷曲散布于整个蛋白质中,具有TCTP-1和TCTP-2两个特征结构域。

小麦eIF3c基因片段的克隆及序列分析

李俊卿;沈进娟;蔡平钟;王贵学;王闵霞;张志雄;蒲志刚;韩琳琳;

2008, 0(02): 113-115.

摘要 ( 90 )

PDF (1096KB) ( 360 )

相关文章 | 计量指标

根据真核翻译起始因子eIF3c的保守序列,搜索小麦EST,由拼接的序列设计引物,从普通小麦‘川麦107’幼苗总RNA中克隆出1 102bp的小麦eIF3c1基因片段命名为WeIF3c1。序列分析表明,该片段推断的氨基酸序列与两个拟南芥、水稻、甜樱桃、人类、线虫、老鼠等物种的真核翻译起始因子eIF3c相比较同源性分别为69、61%、85%、72%、38%、36%和38%。

拟南芥TOC1蛋白特异片段原核表达培养基的优化

赵峰;赵德刚;傅永福;

2008, 0(02): 116-122.

摘要 ( 84 )

PDF (1242KB) ( 244 )

相关文章 | 计量指标

通过正交设计实验,优化蛋白诱导培养基中的有机成分和无机成分及各因素之间的相互组合,将各因素对拟南芥生物钟重要组成成分TOC1诱导的影响进行方差分析,发现氧气充足和氧气较缺乏时,培养基最佳组合不同。对各因素进行回归分析得到目的蛋白的培养基最佳配方为:氧气充足时为酵母提取物19g.L-1,NaCl 5g.L-1,DifcoPeptone 25g.L-1,CaCl2 0.092g.L-1,KCl 0.372g.L-1;氧气较缺乏时为酵母提取物19g.L-1,NaCl 5g.L-1,葡萄糖6g.L-1,胰蛋白胨21.7g.L-1,NaH2PO4.2H2O 0.184g.L-1,MgCl2 0.847g.L-1,KCl 0.372g.L-1。通过进一步的试验发现氧气充足时的最佳配方优于氧气较缺乏时的最佳配方。

枳壳CBF转录激活因子基因片段的克隆

张杰;汤浩茹;罗娅;张勇;

2008, 0(02): 123-126.

摘要 ( 71 )

PDF (540KB) ( 348 )

相关文章 | 计量指标

根据不同植物CBF同源基因的保守区设计合成简并引物,采用PCR技术首次从枳壳基因组中分离出一个DNA片段并克隆到pMD18-T载体中。序列测定和分析表明,该片段长464bp,与拟南芥3个CBF基因的核酸序列及其推导的氨基酸序列分别具有79%和67%～69%的同源性,而且推导的氨基酸序列含有同源性更高的AP2 DNA结合域和CBF蛋白的两段特征序列PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAWR。结果表明,本研究克隆的片段为枳壳CBF基因片段。

山茶叶片可溶性蛋白双向电泳技术的建立

周蕴薇;董文珂;刘艳萍;戴思兰;

2008, 0(02): 127-132.

摘要 ( 58 )

PDF (423KB) ( 507 )

相关文章 | 计量指标

建立了山茶低温诱导蛋白研究中叶片蛋白双向电泳技术体系.采用固相pH胶条在IPGphor TM等电聚焦系统上进行等电聚焦,在Ettan TM DaltⅡ高通量电泳仪上进行SDS-PAGE电泳,以银染法染色,得到了分离效果良好的蛋白质双向电泳图谱。讨论了蛋白沉降方法、蛋白提取液的组成及其他技术环节对蛋白图谱的影响。

黄瓜CsEXP10蛋白的结构构建和分析

孙涌栋;罗未蓉;李贞霞;

2008, 0(02): 133-135.

摘要 ( 54 )

PDF (449KB) ( 370 )

相关文章 | 计量指标

利用一系列生物信息学软件预测了黄瓜CsEXP10蛋白的理化性质、卷曲螺旋、疏水性、信号肽、跨膜结构、糖基位点、活性位点、亚细胞定位及二级和高级结构。结果表明:该蛋白是一个疏水性稳定蛋白,定位于细胞壁,含有4个-α螺旋,11个β-折叠,5个跨膜区域和10个糖基化位点。

菜薹花药培养诱导胚状体的研究

朱允华;刘清;吴朝林;刘明月;

2008, 0(02): 136-139.

摘要 ( 56 )

PDF (380KB) ( 345 )

相关文章 | 计量指标

分别以特早50、青梗菜心、9872和四九菜心(19)为供试材料,进行了基因型、温度、碳源等因素对菜心花药培养诱导胚状体影响的研究。结果表明:不同基因型菜薹花药诱导率的差异显着,在改良B5固体培养基上特早50、9872、四九菜心(19)的诱导率依次降低,而青梗菜心诱导不出胚状体;不同温度的前处理对9872花药的诱导率也存在影响,其中以4℃低温预处理幼花序1～2d和33℃高温预培养24～48h的处理效果最佳;碳源对胚状体的诱导也有较大影响,其中蔗糖效果好于麦芽糖,且质量浓度为13%的蔗糖对特早50诱导率最高,而13%的麦芽糖诱导不出胚状体。

多重PCR在烟草转基因检测中的应用

高玉龙;焦芳婵;徐照丽;李文正;

2008, 0(02): 140-142.

摘要 ( 85 )

PDF (859KB) ( 508 )

相关文章 | 计量指标

通过添加PCR增强剂DMSO,优化了检测转基因烟草中外源基因35S启动子、NPT II基因和NOS终止子的PCR体系。将多重PCR应用于烟草转基因检测,实现了同一反应中可以检测35S启动子与烟草内源基因硝酸还原酶(NR)或NPT II基因和NOS终止子。通过对待检样品试验,该方法稳定、可靠。

Chelex-100快速提取用于转基因检测DNA模板的研究

王永;张莉;兰青阔;赵新;程奕;

2008, 0(02): 143-145.

摘要 ( 66 )

PDF (414KB) ( 325 )

相关文章 | 计量指标

目的:建立从转基因作物中快速提取DNA的方法。方法:采用Chelex-100法提取抗草甘膦大豆和非转基因大豆、转基因抗虫玉米Bt176和非转基因玉米中的DNA,使用PCR扩增大豆和玉米的内源基因(Lectin,zSSIIb)及外源特异性序列(CaMV35S,Bt176)评价提取核酸的质量。结果:Chelex-100法能够快速在1h之内从大豆和玉米中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,转基因抗草甘膦大豆样品和转基因抗虫玉米Bt176检测均出现强阳性结果。结论:Chelex-100法提取DNA可以作为转基因检测的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于转基因检测工作。

中间锦鸡儿种子特异性fad2基因克隆及fad2-1A基因酵母表达载体的构建

林萍;李春秀;齐力旺;张守攻;

2008, 0(02): 146-150.

摘要 ( 97 )

PDF (555KB) ( 347 )

相关文章 | 计量指标

Δ12脂肪酸脱氢酶(Δ12 fatty acid desaturase,Δ12 FAD,也称为fad2)催化油酸生成亚油酸,是植物体内生成多不饱和脂肪酸的关键酶,种子中特异表达的fad2基因负责种子贮脂中多不饱和脂肪酸亚油酸的生成,决定种子油脂的成分和营养价值。采用RT-PCR和RACE技术从中间锦鸡儿未成熟种子中克隆了种子特异表达的fad2-1A、fad2-1B基因,fad2-1A编码的前283个氨基酸与fad2-1B的同源性高达98.9%,前者比后者多编码97个氨基酸,全部氨基酸残基的同源性为70.71%。将fad2-1A克隆到真核表达载体pYES2中,构建了重组质粒pYES2-fad2-1A,经PCR检测、质粒酶切、测序等检测,目的基因确实插入重组质粒,且方向正确,为进一步研究fad2基因的功能和表达调控机理奠定了基础。

运动发酵单孢菌ZM4-pdc基因的克隆及在大肠杆菌TOP10中的表达与活性分析

谭力;张伟涛;陈介南;王义强;韩笑;

2008, 0(02): 151-154.

摘要 ( 68 )

PDF (358KB) ( 441 )

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利用高保真聚合酶从运动发酵单胞菌中克隆出丙酮酸脱羧酶基因,加A后克隆到pGM-T载体,测序验证无误。经酶切、连接、转化到表达载体pUC-18。形成重组质粒pUC-18-pdc,转化到大肠杆菌TOP10中,经定性定量分析丙酮酸脱羧酶基因在大肠杆菌中高效表达,成功构建出乙醛的代谢途径。

鱼腥草内生微生物的分布特征初探

胡汝晓;李珊;谭周进;赵武能;谢丙炎;谢达平;肖冰梅;伍参荣;

2008, 0(02): 155-157.

摘要 ( 58 )

PDF (166KB) ( 334 )

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为了探明鱼腥草中内生菌的分布规律,便于有目的筛选有益菌株,对湖南农业大学附近一农户栽培鱼腥草不同器官中内生菌的数量分布及细菌的一般特性进行了研究。结果表明,鱼腥草根、茎、叶中都存在大量内生菌,总的数量趋势是根大于茎,茎大于叶。同时各器官中细菌数大于放线菌数,放线菌数大于真菌数(叶中真菌数大于放线菌数)。各器官中的内生细菌以革兰氏阴性芽胞杆菌为主,其中茎表现最为明显。

利用西瓜汁合成细菌纤维素的研究

李静;朱平;

2008, 0(02): 158-162.

摘要 ( 53 )

PDF (421KB) ( 383 )

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利用木醋杆菌为实验菌种,通过选择不同的种龄、接种量、发酵培养基液面积/液体积、初始pH值、培养温度和时间,对西瓜汁合成细菌纤维素的发酵条件进行研究,得到了最佳培养条件,并利用扫描电镜、红外光谱、元素分析等手段对合成细菌纤维素的微结构进行了观察分析。

外加肌醇对嗜鞣管囊酵母发酵的酒精产量及其耐酒精能力的影响

季冉;袁兴中;曾光明;刘佳;

2008, 0(02): 163-167.

摘要 ( 82 )

PDF (441KB) ( 424 )

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嗜鞣管囊酵母(Pachysolen tannophilus)是可以同时发酵葡萄糖和木糖为酒精的菌种,在其生长和发酵培养基中分别添加不同浓度(0～200mg/L)的肌醇以及不同起始浓度的酒精,以考察外加肌醇对嗜鞣管囊酵母生长、产酒精能力和耐酒精能力的影响。结果表明,添加肌醇前后,嗜鞣管囊酵母的生物量及发酵的酒精产量均有所增加。外加肌醇对嗜鞣管囊酵母生长有轻微的刺激作用,酵母生长最适肌醇浓度为150mg/L;而对酵母生长的耐酒精能力却有明显的影响,并且,菌种在YEPD培养基中的耐酒精能力高于在YEPX培养基中的耐酒精能力。经实验测定,肌醇对嗜鞣管囊酵母产酒精能力及发酵的耐酒精能力均有显着的影响。发酵培养基中未添加起始浓度的酒精时,菌种发酵的最适肌醇浓度为100mg/L,此时生成的酒精产量为45.20g/L。当分别添加起始酒精浓度为10%和12%时,随着肌醇浓度的增加,菌种发酵生成的酒精浓度均呈上升趋势;肌醇浓度为200mg/L时,两种起始酒精浓度下,酒精的净生成量均达到最大,分别为17.18g/L和16.68g/L。

2型登革病毒ns1基因克隆及其表达产物的生物学特性研究

但妍;张娟;张君;郑建;黄爱龙;

2008, 0(02): 168-171.

摘要 ( 81 )

PDF (777KB) ( 513 )

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目的克隆并表达2型登革病毒非结构蛋白ns1基因片段,初步鉴定重组蛋白的生物学特性。方法利用登革热2型病毒重组质粒,经PCR方法扩增出ns1全长基因片段,在pQE30表达系统中表达,表达产物用Ni柱亲和层析纯化后,用鼠抗登革病毒免疫血清对重组蛋白进行Western Blot及ELISA鉴定。结果构建的重组质粒pQE-30/NS1,pQE-30/NS1-N,pQE-30/NS1-80-200aa和pQE-30/NS1-C经IPTG诱导,重组蛋白高效表达并纯化成功,经Western Blot及ELISA证实重组蛋白可以被免疫血清特异识别。结论2型登革病毒结构蛋白表达载体在大肠杆菌SG13009中高效表达。纯化产物具有较强的免疫原性,为进一步研究NS1的生物学特性和血清学检测奠定了基础。

Ru-486、安宫黄体酮、环孢菌素、维拉帕米对非P-g介导的卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP耐药性的逆转

康楷;黄林;董晓静;朱园方;胡丽娜;

2008, 0(02): 172-179.

摘要 ( 80 )

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目的在同一实验系统中比较Ru-486、MPA、VP、CsA对非P-g介导的卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP耐药性的逆转作用并对其作用机制进行探讨,为临床克服耐药提供参考依据。方法采用MTT法从细胞代谢,DNA凝胶电泳从细胞凋亡方面系统观察比较DDP、Ru-486、MPA、VP、CsA 5种药物对卵巢癌多药耐药细胞系COC1/DDP的影响及相互关系,检测上述5种药物与COC1/DDP作用时细胞内GSH-ST和GSH-Px活性的变化,并采用westernblotting以Bcl-2抗体为分子探针对上述5种药物与COC1/DDP作用时细胞内Bcl-2基因的表达进行测定对其逆转机制进行探讨。结果1)Ru-486、CsA、MPA对COC1/DDP有直接抑制作用,其抑制率随浓度增高进行性升高,而VP对COC1/DDP没有直接抑制作用。和DDP联用时,Ru-486、MPA、VP、CsA都能显着增强COC1/DDP对DDP的敏感性,达到一定浓度后,可以完全逆转COC1/DDP对DDP的耐药性。这种逆转是通过抑制细胞代谢、诱导细胞凋亡的结果。2)单纯2.5μg/ml的DDP能使GSH-Px及GST活力上升,除VP外,Ru-486等药物可降低GSH-Px和GST活力,与DDP联用时亦如此。提示,Ru-486、CsA、MPA可以通过抑制GSH转移酶系统阻止对细胞损伤的修复而达到对耐药性的逆转。3)单独的DDP、Ru--486等药物非但对Bcl-2的表达没有抑制作用,反而促进了其表达,以MPA最甚。与DDP联用时,却出现了一个有趣的现象,即可以抑制Bcl-2的表达,Ru-486与DDP联用时Bcl-2的表达几乎完全被阻截。结论:VP、Ru-486、CsA和MPA对卵巢癌多药耐药细胞系COC1/DDP的耐药性有确切逆转作用。其逆转机制可能与降低GSH转移酶系统活性有关。当与DDP联用时可以通过降低Bcl-2蛋白表达来逆转耐药。

超抗原融合基因VEGF-SEA的克隆、原核表达及蛋白纯化

朱宏丽;孙嘉琳;罗金凤;

2008, 0(02): 180-183.

摘要 ( 74 )

PDF (466KB) ( 387 )

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根据Genebank报道的VEGF(NM-003376)、SEA(A28664)基因序列,对密码子进行优化,合成血管内皮细胞生长因子和超抗原基因序列,将VEGF-SEA基因片段插入质粒pET22b构建重组质粒pET22b-VEGF-SEA。重组质粒经序列分析正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析蛋白条带与预期一致,证明融合蛋白原核表达成功。产物经His.Bind Buffer kit试剂盒纯化,纯度达到90%,这一成果为进一步研究VEGF-SEA融合蛋白的活性及其功能,探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础。

以绿色荧光蛋白为报告基因的原核启动子检测体系构建

陈坤;黎明;高伟;路福平;

2008, 0(02): 184-187.

摘要 ( 88 )

PDF (544KB) ( 951 )

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以质粒pMUTIN-GFP+扩增获得的gfp+基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBE2-GFP+。将组成型启动子P43和诱导型启动子Pspac克隆入pBE2-GFP+,得到重组表达载体pBE-GFP-P43和pBE-GFP-Pspac,转化至大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。荧光显微镜检测GFP+蛋白的表达情况。结果表明,2种不同类型的启动子均能在大肠杆菌BL21和枯草芽孢杆菌1A751中启动gfp+基因的表达。

鳞翅目昆虫中甾体载体蛋白-2的初步鉴定

吴彦艳;余学全;彭建新;洪华珠;

2008, 0(02): 188-190.

摘要 ( 61 )

PDF (188KB) ( 312 )

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甾体载体蛋白-2(SCP-2)是介导昆虫胆固醇吸收和运输的一种重要载体蛋白,已在双翅目中被发现和鉴定。利用SDS-PAGE和western blot鉴定鳞翅目昆虫棉铃虫和粉纹夜蛾离体培养细胞中SCP-2的存在,结果表明棉铃虫中肠组织和粉纹夜蛾Tn5B1细胞中确实存在SCP-2蛋白。

H5亚型AIV NS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

詹爱军;王新卫;王宪文;覃健萍;毕英佐;于康震;曹永长;

2008, 0(02): 191-194.

摘要 ( 67 )

PDF (512KB) ( 607 )

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应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H5亚型毒株NS1基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H5亚型AIV的NS1基因,通过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切位点将H5NS1基因插入转移质粒载体pFastbac HTa中,获得重组转移载体pFastbac HTa-H5NS1并将其转化DH10 Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H5NS1,再将其转染昆虫细胞High Five,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDS-PAGE和Western Blot检测,NS1基因在High Five细胞中得到了表达,H5NS1大小约为28kD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。

巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

张建哲;韩红玉;姜连连;董辉;赵其平;卞庆松;闫晓菲;黄兵;

2008, 0(02): 195-198.

摘要 ( 65 )

PDF (251KB) ( 276 )

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为构建巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)孢子化卵囊cDNA表达文库,从E.maxima孢子化卵囊中提取总RNA,以总RNA为模板、λTriplex2TM为载体,利用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒构建全长cDNA表达文库。经测定构建的E.maxima cDNA表达文库的原始文库容量为1×106 pfu/ml,扩增后的文库滴度为5×1010 pfu/ml,重组率为95%,插入片断主要集中在0.5～1kb之间。根据已知序列设计引物,能从文库中扩增出编码E.maxima免疫球蛋白重链结合蛋白的基因序列片段。结果表明所构建的E.maxima cDNA表达文库质量良好,为克隆、筛选E.maxima的功能性基因奠定了基础。

马IgM、IgG单克隆抗体的研制与鉴定

姜焱;陈国强;王凯民;唐泰山;张常印;

2008, 0(02): 199-201.

摘要 ( 76 )

PDF (711KB) ( 424 )

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以马IgM、IgG作为免疫抗原,以此免疫BALB/c小鼠,并取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选,结果获得了4株分泌抗马IgM和2株分泌抗IgG的单克隆抗体的杂交瘤细胞,特异性试验证明,4株IgM单抗有很好的特异性,仅与马的IgM特异反应,而不与IgG反应;这4株单抗分别命名为IgM4H、IgM6B、IgM8A和IgM12F。经鉴定,IgM4H、IgM6B、IgM12F株为IgG1亚类,IgM8A株为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条。杂交瘤细胞培养上清液及小鼠腹水McAb的ELISA都具有较高的效价,该杂交瘤细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体。2株IgG的单克隆抗体有很好的特异性,只与IgG反应,而不与IgM发生交叉反应。

不同培养条件对猪卵母细胞IVM、IVF的影响

刘丽莉;叶绍辉;严明理;何艳;

2008, 0(02): 202-206.

摘要 ( 89 )

PDF (497KB) ( 347 )

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通过优化猪卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎体外发育体系,以进一步提高体外胚胎的生产效率和质量。研究了激素存在时间、不同激素和不同血清对猪卵母细胞体外成熟的影响;共培养体系、精卵作用时间、去除卵丘细胞的方法对猪体外受精及早期胚胎发育的影响。猪卵母细胞IVM培养48h,前24h内加入PMSG、hCG,后24h将其去除,卵母细胞总成熟率为79.54%;培养液添加15%FCS或15%NCS,卵母细胞成熟率分别为79.48%和74.81%;PMSG、HCG和E2配合使用后卵母细胞成熟率为81.42%。在IVF前用吹打法获得的卵裂率、桑椹胚率分别为37.89%和8.54%,精卵共孵育6h或8h的卵裂率(40.52%,37.24%)、桑椹胚率(8.42%,7.85%),以及用输卵管上皮细胞共培养所获得的卵裂率(40.84%)、桑椹胚率(9.53%)均显着高于其它各组。

牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区的克隆及其功能检测

施志仪;顾一峰;陈晓武;胡燕林;

2008, 0(02): 207-213.

摘要 ( 63 )

PDF (971KB) ( 430 )

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通过基因组步移的方法扩增出一段924bp的牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区序列,在线软件分析表明5'调控区内可能含有GKLF、Oct、CREB、E2F、CEBP、GATA-1、Pitx-1、Pit1、RARE/TRE、AP4等转录因子结合位点。采用DNA重组的方法,将克隆得到的5'调控区片段插入启动子缺失的增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-1中,构建重组表达载体pEGFP-JFALP。重组载体瞬时转染COS-7细胞,在倒置荧光显微镜下可以检测到绿色荧光信号,且荧光信号随着时间的延长而增强。结果表明本实验克隆的牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区具有一定的启动子活性,为今后进一步研究碱性磷酸酶基因表达调控的分子机制奠定基础。

光镊探索DNA凝聚过程

韩旭;

2008, 0(02): 214-215.

摘要 ( 145 )

PDF (130KB) ( 341 )

相关文章 | 计量指标

<正>自从20年前光镊技术被Ashkin、Chu及其同事发明[1],该技术已被应用于各种生物学研究并由此获得丰富信息。例如应力下生物高分子的行为[2],DNA连接酶如何译码或如何消化DNA[3～6],动力蛋白如何沿分子轨道移动[7,8],以及RNA和蛋白质分子如何折叠/展开[9～11]。通过对单个分子的操纵,光镊技术可用于探索这些生物系统在分子层面的工作模式。在本期222页,Case等描述了该技术的另一精巧应用。揭示了凝聚子蛋白质如何产生紧凑形式的DNA[12]。

诱变育种新途径——航天搭载太空诱变育种

2008, 0(02): 216-216.

摘要 ( 59 )

相关文章 | 计量指标

<正>1航天搭载,太空(空间)诱变航天搭载,空间诱变可以简称为航天诱变育种,亦称太空育种。它是将农作物种子或供试诱变材料搭乘返回式卫星或宇宙飞船,送到距地球200～400km的太空,利用空间宇宙射线的强辐射,在高真空、微重力和交变磁场等特殊环境中进行诱变处理,使供试的农作物种子和材料产生变异,返回地面后筛选、培育出符合要求的新品种。

拟南芥钴胺素合成相关蛋白CSRP基因克隆及其功能分析

秦春圃;

2008, 0(02): 217-217.

摘要 ( 69 )

相关文章 | 计量指标

<正>湖南农业大学生物科学技术学院朱兆海、洪亚辉和夏石头及湖南省植物激素与生长发育重点实验室萧浪涛科研工作者以拟南芥为研究对象,以已知生物信息数据通过反向遗传学法对钴胺素合成相关蛋白CSRP基因进行分子克隆,得到该基因组序列和cDNA序列,构建二元重组质粒,利用根癌农杆菌介导的花浸泡转基因方法分别转化突变体和野生型植株,进行互补试验和过表达试验,筛选转基因植株,并进一步预测其编码蛋白的亚细胞定位于叶绿体中。

九株猪圆环病毒Ⅱ型流行毒株全基因组克隆及序列分析

秦春圃;

2008, 0(02): 217-217.

摘要 ( 10 )

相关文章 | 计量指标

<正>广西大学动物科技学院严业师、黄伟坚和屈素洁等科研工作者参考GenBank发表的猪圆环病毒Ⅱ型Porcine circovirus2,PCV2全基因组序列,设计一对引物,通过反向PCR技术扩增出9株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定与分析。结果发现9株PCV2的基因组全长为1 768bp或1767bp,同源性比较发现,这9株PCV2之间的核苷酸同源性为95.6%～100%,与GenBank上的PCV2分离株之间的同源性为95.1%～99.8%,与法国和新西兰代表株的亲缘关系较近,与美国、加拿大、澳大利亚的代表株的亲缘关系较远。

《农业展望》2008年征稿启事

2008, 0(02): 218-218.

摘要 ( 52 )

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<正>《农业展望》是经国家新闻出版总署批准,由中华人民共和国农业部主管、农业部市场与经济信息司指导、中国农业科学院农业信息研究所主办的综合性刊物。2005年8月创刊,面向国内外公开发行,是中国首份农产品市场分析与预测专业期刊,创刊两年来已形成了自己的行业特色,得到了社会各方的认可。

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