香樟Actin基因的克隆及表达分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.019

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (5): 120-127.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.019

香樟Actin基因的克隆及表达分析

李勇鹏, 张力维, 姚瑶, 黄蕊, 杜丽

（南阳师范学院生命科学与技术学院，南阳 473000）

收稿日期:2014-10-15 出版日期:2015-05-18 发布日期:2015-05-18
作者简介:李勇鹏，男，硕士研究生，研究方向：园林植物遗传育种；E-mail：daniel_lee1217@yeah.net
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（31100511），河南省高校青年骨干教师计划资助项目（2010GGJS-161），南阳师范学院博士科研启动资助项目（nynu200746），2015年度研究生创新基金项目（2015CX008）

Cloning and Expression Analysis of Actin Gene in Cinnamomum camphora

Li Yongpeng, Zhang Liwei, Yao Yao, Huang Rui, Du Li

（School of Life Science and Technology，Nangyang Normal University，Nanyang 473000）

Received:2014-10-15 Published:2015-05-18 Online:2015-05-18

摘要/Abstract

摘要： Actin作为一个看家基因，经常在实时定量PCR中被用作内参对不同样品中的mRNA进行定量，因此在基因表达分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法，根据GenBank中已经公布的其他植物的Actin基因的保守序列设计简并引物，采用RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）技术从香樟中获得了4个cDNA片段。分子生物学分析软件分析结果显示，4个片段大小为均为998 bp，编码332个氨基酸；同源性分析表明，所获得的片段属于Actin亚家族，分别命名为CcACTa、CcACTb、CcACTc 和CcACTd并提交GenBank（登录号：KM086736、KM086737、KM086738和KM086739）。实时定量PCR结果显示，CcACTc在根、茎、叶及低温处理的叶片中表达量相对稳定，可以作为候选内参基因。

关键词: 香樟, Actin, 基因克隆, 表达分析, 实时定量PCR

Abstract: As a house-keeping gene, Actin has been always being used as an internal standard to normalize mRNA levels between different samples by quantitative real-time PCR, thus plays an important role in gene expression analysis. In this research, through a method of homology cloning, a pair of degenerate primers were designed based on the conserved sequences of Actin genes from other plants submitted to GenBank, and then 4 cDNA fragments from Cinnamomum camphora were obtained using RT-PCR. Molecular biological analysis showed that, each of the 4 cDNA fragments was 998 bp and encoded a putative protein of 332 amino acids. Moreover, according to the homology analysis, the 4 cDNA fragments belonged to Actin subfamily, and they were named CcACTa, CcACTb, CcACTc and CcACTd, and deposited in GenBank（Accession number：KM086736 KM086737 KM086738 and KM086739）. Quantitative real-time PCR results revealed that the expression level of CcACTc in different organs such as root, stem, leaf and leaves under low temperature treaments was relatively stable. It could serve as a candidate reference gene.

Key words: Cinnamomum camphora, Actin, gene cloing, expression analysis, quantitative real-time PCR

引用本文

李勇鹏, 张力维, 姚瑶, 黄蕊, 杜丽. 香樟Actin基因的克隆及表达分析[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 120-127.

Li Yongpeng, Zhang Liwei, Yao Yao, Huang Rui, Du Li. Cloning and Expression Analysis of Actin Gene in Cinnamomum camphora[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(5): 120-127.

使用本文

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Ris|BibTeX

链接本文: https://biotech.aiijournal.com/CN/10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.019

https://biotech.aiijournal.com/CN/Y2015/V31/I5/120

参考文献

[1] Bjarnadottir H, Jonsson JJ. A rapid real-time qRT-PCR assay for ovine β-actin mRNA[J]. J Biotechnol, 2005, 117：173-182.
[2] 牙库甫江·阿西木, 关波, 张富春. 植物基因表达转录分析中内参基因的选择与应用[J]. 生物技术通报, 2011（7）：7-11.
[3] Xiao X, Li M, Wang K, et al. Characterization of large yellow croaker（Pseudosciaena crocea）β-actin promoter supports β-actin gene as an internal control for gene expression modul ation and its potential application in transgenic studies in fish[J]. Fish & Shellfish Immunology, 2011, 30：1072-1079.
[4] Wang Z, Wu Z, Jian J, et al. Cloning and expression of an actin gene in the haemocytes of pearl oyster（Pinctada fucata, Gould 1850）[J]. Marine Genomics, 2008, 2（1）：63-67.
[5] Pei WK, Du F, Zhang Y, et al. Control of the actin cytoskeleton in root hair development[J]. Plant Sci, 2012, 187：10-18.
[6] Li J, Henty-Ridilla JL, Huang S, et al. Capping protein modulates the dynamic behavior of actin filaments in response to phosphatidic acid in Arabidopsis[J]. Plant Cell, 2012, 24（9）：3742-3754.
[7] Henty JL, Bledsoe SW, Khurana P, et al. Arabidopsis actin depolymerizing factor 4 modulates the stochastic dynamic behavior of actin filaments in the cortical array of epidermal cells[J]. Plant Cell, 2011, 23：3711-3726.
[8] Fan T, Zhai H, Shi W, et al. Overexpression of profilin 3 affects cell elongation and F-actin organization in Arabidopsis thaliana[J]. Plant Cell Rep, 2013, 32（1）：149-160.
[9] 阎隆飞, 石德权. 高等植物中的收缩蛋白[J]. 生物化学与生物物理学报, 1963, 3（4）：490-495.
[10] 周海飞, 赵武玲, 阎隆飞. 玉兰肌动蛋白基因的克隆与序列分析[J]. 农业生物技术学报, 2001, 9（3）：274-278.
[11] 孟玉平, 张洁, 张春芬, 等. 枣树肌动蛋白基因cDNA片段的克隆及其表达分析[J]. 生物技术通报, 2009（11）：98-102.
[12] 许娟, 罗兴录. 木薯Actin基因片段的克隆及序列分析[J]. 生物技术通报, 2011（6）：65-70.
[13] Zhao DQ, Tao J, Han CX, et al. An actin gene as the internal control for gene expression analysis in herbaceous peony（Paeonia lactiflora Pall. ）[J]. African Journal of Agricultural Research, 2012, 7（14）：2153-2159.
[14] Zhang SB, Cheng FS, Wang C, et al. Cloning and tissue-specific expression of predicted pisum sativum actin isoform PEAc14-1[J]. Biochem Genet, 2013, 51：722-727.
[15] 肖政, 李纪元, 范正琪, 等. 荔波连蕊茶肌动蛋白基因全长cDNA 的克隆及其表达分析[J]. 林业科学研究, 2014, 27（3）：374-380.
[16] 杜丽, 庞振凌, 周索, 等. 香樟胚性愈伤组织遗传转化体系建立[J]. 林业科学, 2008, 44（4）：54-59.
[17] 蒋晓梅, 张新全, 等. 柳枝稷根组织实时定量PCR分析中内参基因的选择[J]. 农业生物技术学报, 2014, 22（1）：55-63.
[18] Peng XJ, Ma XY, Fan WH, et al. Improved drought and salt tolerance of Arabidopsis thaliana by transgenic expression of a novel DREB gene from Leymus chinensis[J]. Plant Cell Rep, 2011, 30：1493-1502.
[19] 张勇, 汤浩茹, 罗娅, 等. 草莓FaCBF1 基因的克隆及表达分析[J]. 园艺学报, 2014, 41（2）：240-248.
[20] Mehta R, Birerdinc A, Hossain N, et al. Validation of endogenous reference genes for qRT-PCR analysis of human visceral adipose samples[J]. BMC Mol Biol, 2010, 11（39）：1471-2199.
[21] 苏晓娟, 樊保国, 袁丽钗, 等. 实时荧光定量PCR分析中毛果杨内参基因的筛选和验证[J]. 植物学报, 2013, 48（5）：507-518.
[22] Paves H, Truve E. Incorporation of mammalian actin into microfil-aments in plant cell nucleus[J]. BMC Plant Biology, 2004, 4：7.
[23] Xue Y, Wang YY, Peng RH, et al. Transcription factor MdCBF1 gene increases freezing stress tolerance in transgenic Arabidopsis thaliana[J]. Biologia Plantarum, 2014, 58（3）：499-506.
[24] 王舟, 宗俊勤, 宣继萍, 等. 结缕草肌动蛋白基因全长cDNA 的克隆及序列分析[J]. 草业学报, 2010, 19（6）：154-163.
[25] 李军, 赵爱春, 王茜龄, 等. 三个桑树肌动蛋白基因的克隆与组织表达分析[J]. 作物学报, 2011, 37（4）：641-649.
[26] 陈颖, 赵俊霞, 郝丽梅. 花粉肌动蛋白研究进展[J]. 生物学杂志, 2002, 19（3）：5-8.
[27] Wang YT. Actin[J]. Encyclopedia of AIDS, 2014, 1-9.

相关文章 15

[1] 吕秋谕, 孙培媛, 冉彬, 王佳蕊, 陈庆富, 李洪有. 苦荞转录因子基因FtbHLH3的克隆、亚细胞定位及表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(8): 194-203.

[2] 王佳蕊, 孙培媛, 柯瑾, 冉彬, 李洪有. 苦荞糖基转移酶基因FtUGT143的克隆及表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(8): 204-212.

[3] 孙明慧, 吴琼, 刘丹丹, 焦小雨, 王文杰. 茶树CsTMFs的克隆与表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 151-159.

[4] 赵雪婷, 高利燕, 王俊刚, 沈庆庆, 张树珍, 李富生. 甘蔗AP2/ERF转录因子基因ShERF3的克隆、表达及其编码蛋白的定位[J]. 生物技术通报, 2023, 39(6): 208-216.

[5] 姜晴春, 杜洁, 王嘉诚, 余知和, 王允, 柳忠玉. 虎杖转录因子PcMYB2的表达特性和功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 217-223.

[6] 姚姿婷, 曹雪颖, 肖雪, 李瑞芳, 韦小妹, 邹承武, 朱桂宁. 火龙果溃疡病菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 92-102.

[7] 王艺清, 王涛, 韦朝领, 戴浩民, 曹士先, 孙威江, 曾雯. 茶树SMAS基因家族的鉴定及互作分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(4): 246-258.

[8] 刘思佳, 王浩楠, 付宇辰, 闫文欣, 胡增辉, 冷平生. ‘西伯利亚’百合LiCMK基因克隆及功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 196-205.

[9] 王涛, 漆思雨, 韦朝领, 王艺清, 戴浩民, 周喆, 曹士先, 曾雯, 孙威江. CsPPR和CsCPN60-like在茶树白化叶片中的表达分析及互作蛋白验证[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 218-231.

[10] 庞强强, 孙晓东, 周曼, 蔡兴来, 张文, 王亚强. 菜心BrHsfA3基因克隆及其对高温胁迫的响应[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 107-115.

[11] 苗淑楠, 高宇, 李昕儒, 蔡桂萍, 张飞, 薛金爱, 季春丽, 李润植. 大豆GmPDAT1参与油脂合成和非生物胁迫应答的功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 96-106.

[12] 葛雯冬, 王腾辉, 马天意, 范震宇, 王玉书. 结球甘蓝PRX基因家族全基因组鉴定与逆境条件下的表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 252-260.

[13] 杨旭妍, 赵爽, 马天意, 白玉, 王玉书. 三个甘蓝WRKY基因的克隆及其对非生物胁迫的表达[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 261-269.

[14] 陈楚怡, 杨小梅, 陈胜艳, 陈斌, 岳莉然. ABA和干旱胁迫下菊花脑ZF-HD基因家族的表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 270-282.

[15] 尤垂淮, 谢津津, 张婷, 崔天真, 孙欣路, 臧守建, 武奕凝, 孙梦瑶, 阙友雄, 苏亚春. 钩吻脂氧合酶基因 GeLOX1 的鉴定及低温胁迫表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 318-327.

编辑推荐

Metrics

阅读次数

全文

摘要

本文评价

摘要

参考文献

相关文章

编辑推荐

Metrics

本文评价

回顶部

香樟Actin基因的克隆及表达分析

Cloning and Expression Analysis of Actin Gene in Cinnamomum camphora

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	吕秋谕, 孙培媛, 冉彬, 王佳蕊, 陈庆富, 李洪有. 苦荞转录因子基因FtbHLH3的克隆、亚细胞定位及表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(8): 194-203.
[2]	王佳蕊, 孙培媛, 柯瑾, 冉彬, 李洪有. 苦荞糖基转移酶基因FtUGT143的克隆及表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(8): 204-212.
[3]	孙明慧, 吴琼, 刘丹丹, 焦小雨, 王文杰. 茶树CsTMFs的克隆与表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 151-159.
[4]	赵雪婷, 高利燕, 王俊刚, 沈庆庆, 张树珍, 李富生. 甘蔗AP2/ERF转录因子基因ShERF3的克隆、表达及其编码蛋白的定位[J]. 生物技术通报, 2023, 39(6): 208-216.
[5]	姜晴春, 杜洁, 王嘉诚, 余知和, 王允, 柳忠玉. 虎杖转录因子PcMYB2的表达特性和功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 217-223.
[6]	姚姿婷, 曹雪颖, 肖雪, 李瑞芳, 韦小妹, 邹承武, 朱桂宁. 火龙果溃疡病菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 92-102.
[7]	王艺清, 王涛, 韦朝领, 戴浩民, 曹士先, 孙威江, 曾雯. 茶树SMAS基因家族的鉴定及互作分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(4): 246-258.
[8]	刘思佳, 王浩楠, 付宇辰, 闫文欣, 胡增辉, 冷平生. ‘西伯利亚’百合LiCMK基因克隆及功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 196-205.
[9]	王涛, 漆思雨, 韦朝领, 王艺清, 戴浩民, 周喆, 曹士先, 曾雯, 孙威江. CsPPR和CsCPN60-like在茶树白化叶片中的表达分析及互作蛋白验证[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 218-231.
[10]	庞强强, 孙晓东, 周曼, 蔡兴来, 张文, 王亚强. 菜心BrHsfA3基因克隆及其对高温胁迫的响应[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 107-115.
[11]	苗淑楠, 高宇, 李昕儒, 蔡桂萍, 张飞, 薛金爱, 季春丽, 李润植. 大豆GmPDAT1参与油脂合成和非生物胁迫应答的功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 96-106.
[12]	葛雯冬, 王腾辉, 马天意, 范震宇, 王玉书. 结球甘蓝PRX基因家族全基因组鉴定与逆境条件下的表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 252-260.
[13]	杨旭妍, 赵爽, 马天意, 白玉, 王玉书. 三个甘蓝WRKY基因的克隆及其对非生物胁迫的表达[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 261-269.
[14]	陈楚怡, 杨小梅, 陈胜艳, 陈斌, 岳莉然. ABA和干旱胁迫下菊花脑ZF-HD基因家族的表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 270-282.
[15]	尤垂淮, 谢津津, 张婷, 崔天真, 孙欣路, 臧守建, 武奕凝, 孙梦瑶, 阙友雄, 苏亚春. 钩吻脂氧合酶基因 GeLOX1 的鉴定及低温胁迫表达分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(11): 318-327.