重组羧肽酶G2的原核表达、纯化及活性分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.029

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (3): 184-189.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.029

重组羧肽酶G2的原核表达、纯化及活性分析

李树刚¹,王勇¹,张伟¹,辛渝¹,但国平¹,柴新娟¹,龚会英¹,于廷和²

1. 重庆科润生物医药研发有限公司, 重庆 401121；
2. 重庆医科大学附属第二医院, 重庆 400010

收稿日期:2015-07-02 出版日期:2016-03-24 发布日期:2016-03-25
作者简介:李树刚, 男, 博士生导师, 研究方向：生物医学工程；E-mail：kerunlsg@126.com

Prokaryotic Expression, Purification and Activity Analysis of Recombinant Carboxypeptidase G2

LI Shu-gang¹, WANG Yong¹, ZHANG Wei¹, XIN Yu¹, DAN Guo-ping¹, CHAI Xin-juan¹, GONG Hui-ying¹, YU Ting-he²

1. Chongqing Kerun Biopharm R&D Co., Ltd., Chongqing 401121；
2. The Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010

Received:2015-07-02 Published:2016-03-24 Online:2016-03-25

摘要/Abstract

摘要： 在原核表达系统中实现羧肽酶G2(Carboxypeptidase G2, CPG2)的表达, 并对CPG2进行了纯化和活性测定。通过PCR扩增得到编码CPG2的基因片段, 利用基因重组技术构建原核表达质粒pET-30a-CPG2, 在Escherichia coli中进行诱导表达, 菌体经超声破碎后利用金属螯合亲和柱和阴离子交换层析柱对目标蛋白进行纯化。目的蛋白能够以可溶形式表达, SDS-PAGE和Western blotting检测有特异的蛋白表达条带。纯化的CPG2有降解氨甲喋吟(MTX)活性, 酶活力达到400 U/mg。

关键词: 羧肽酶G2, 原核表达, 纯化, 氨甲喋吟

Abstract: This work is to express carboxypeptidase G2(CPG2)in prokaryotic expression system, purify it and detect its activity in vitro. The gene fragment encoding CPG2 was amplified by PCR, and the prokaryotic expressed plasmid pET-30a-CPG2 was constructed by gene recombinant technology, then it was transformed into Escherichia coli BL21(DE3)for the expression with induction. The target protein from grounded cells was purified by metals chelating affinity chromatogram and anion-exchange chromatography. Majority of the fusion protein was expressed in soluble form, and its specificity was confirmed via SDS-PAGE and Western blotting. The preliminary experimental result showed that the recombinant protein degraded MTX, and the specific activity reached 400 U/mg.

Key words: CPG2, prokaryotic expression, purification, MTX

李树刚,王勇,张伟,辛渝,但国平,柴新娟,龚会英,于廷和. 重组羧肽酶G2的原核表达、纯化及活性分析[J]. 生物技术通报, 2016, 32(3): 184-189.

LI Shu-gang, WANG Yong, ZHANG Wei, XIN Yu, DAN Guo-ping, CHAI Xin-juan, GONG Hui-ying, YU Ting-he. Prokaryotic Expression, Purification and Activity Analysis of Recombinant Carboxypeptidase G2[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(3): 184-189.

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Prokaryotic Expression, Purification and Activity Analysis of Recombinant Carboxypeptidase G2

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