绿色木霉耐热β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.09.025

摘要/Abstract

摘要： 旨在对绿色木霉-葡萄糖苷酶进行分离纯化并研究其酶学性质。对绿色木霉GIM3.139进行摇瓶发酵,经离心超滤和Sephadex G-200凝胶层析,得到纯化后的β-葡萄糖苷酶,并研究其酶学性质。结果显示,分离纯化组分经PAGE电泳检测达到电泳纯,研究发现,该酶最适反应温度为80℃,热稳定性好,在70-95℃时能长时间保持较高活力,最适pH值为6.5,耐酸碱稳定性好。金属离子中,Fe³⁺、Mg²⁺、K⁺对β-葡萄糖苷酶的活性起抑制作用,其中Fe³⁺对该酶的抑制作用最为明显,Fe²⁺、Mn²⁺对β-葡萄糖苷酶的活性起激活作用,其中Mn²⁺对β-葡萄糖苷酶的激活作用最为明显。有机溶剂中,甲醇、丙酮对该酶起到激活作用,其中甲醇的激活作用最明显,而乙酸乙酯对该酶具有明显的抑制作用。分离纯化得到了电泳纯的β-葡萄糖苷酶,并掌握了其基本的酶学性质。

关键词: 绿色木霉, β, -葡萄糖苷酶, 分离纯化, 酶学性质

Abstract: This study aims to separate and purify the β-glucosidase of Tridchoderma viride and to investigate its enzyme characterization. T. viride GIM3.139 was fermented in shaking flask,and the enzymatic properties of the purified β-glucosidase by centrifugal ultrafiltration and Sephadex G-200 gel chromatography were studied. Further,the separated and purified constituents were tested by PAGE（polyacrylamide gel electrophoresis）,and it reached the electrophoretic-purity. The results showed that the optimal reaction temperature was 80℃ and it was still in a high enzymatic activity for a long time in the range of 75-95℃;also the β-glucosidase presented a strong stability under acidic and alkaline conditions and its optimal pH value was 6.5. Some metal ions including Fe³⁺,Mg²⁺,and K⁺ inhibited the activity of β-glucosidase,among which Fe³⁺did it the most significantly. However,Fe²⁺ and Mn²⁺activated the enzyme,and Mn²⁺did it the most significantly. Organic solvents such as methanol and acetone increased the enzymatic activity,and methanol did it the most significantly. However,the ethyl acetate showed obvious inhibition effect. In conclusion,electrophoretic-purity β-glucosidase was separated and purified from T. viride and the enzymatic properties were characterized as well.

Key words: Tridchoderma viride, β-glucosidase, separation and purification, enzymatic properties

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