两种天然产物对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理研究

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0122

生物技术通报 ›› 2017, Vol. 33 ›› Issue (8): 199-205.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0122

两种天然产物对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理研究

程杏安¹, 张淑明¹, 周晓武¹, 吴波¹, 林贤伟¹, 秦湘静² , 黄素青¹, 刘展眉¹, 蒋旭红¹

1. 仲恺农业工程学院天然产物化学研究所，广州 510225；
2. 中国科学院南海海洋研究所，广州 510301

收稿日期:2017-02-22 出版日期:2017-08-01 发布日期:2017-08-01
作者简介:程杏安，男，博士，副教授，研究方向：天然产物化学；E-mail：anzai_28@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（21406274，21376281），广东省大学生创新训练项目（201411347034，201511347056）

Study on Inhibition Mechanism of Melanogenesis and Melanin Synthesis of B16F10 Cell Induced by Two Natural Products

CHENG Xing-an¹, ZHANG Shu-ming¹, ZHOU Xiao-wu¹, WU Bo¹, LIN Xian-wei¹, QIN Xiang-jing², HUANG Su-qing¹, LIU Zhan-mei¹, JIANG Xu-hong¹

1. Institute of Natural Product Chemistry，Zhongkai University of Agriculture and Engineering，Guangzhou 510225；
2. South China Sea Institute of Oceanology，Chinese Academy of Sciences，Guangzhou 510301

Received:2017-02-22 Published:2017-08-01 Online:2017-08-01

摘要/Abstract

摘要： 旨在研究10-羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin，HCPT）和白藜芦醇（Resveratrol，Res）对体外培养的小鼠恶性黑色素瘤B16F10细胞的增殖及黑色素合成抑制机理。利用MTT法、显微观察、L-Dopa氧化法、NaOH裂解法分析不同浓度HCPT和Res对细胞增殖、细胞形态、酪氨酸酶活性及黑色素合成含量的影响。荧光半定量PCR方法（Semi-RT-PCR）分析该化合物对黑色素合成关键因子酪氨酸酶（TYR）和小眼相关转录因子（MITF）基因表达的影响。结果表明HCPT（40、80、120、160和200 μmol/L）和Res（80、120、160和200 μmol/L）能够通过诱导细胞凋亡抑制B16F10细胞的增殖，同时对酪氨酸酶活性和细胞黑色素生成具有明显抑制作用（P<0.05），且呈现浓度依赖性。另外，不同浓度的HCPT以及高浓度Res（120和160 μmol/L）能够显著下调B16F10细胞TYR和MITF基因的mRNA水平。HCPT和Res可能通过诱导细胞凋亡抑制B16F10细胞的增殖，同时通过下调MITF基因转录，抑制TYR mRNA的表达及TYR酶活性，进而抑制细胞黑色素的生成。

关键词: 10-羟基喜树碱, 白藜芦醇, 酪氨酸酶, 黑色素, 小眼相关转录因子

Abstract: This study aims to clarify the inhibition mechanism of proliferation and melanin synthesis of B16F10 cell induced by 10-hydroxycamptothecin（HCPT）and resveratrol（Res）. MTT cytotoxicity assay，microscope observation-assay，L-Dopa oxidation-assay and NaOH cracking-assay were employed to investigate the proliferation，cellular morphology，tyrosinase（TYR）activity and melanin synthesis of B16F10 cells treated by HCPT and Res at different concentrations，respectively；and semi-RT-PCR to analyze the relative mRNA expression of TYR and microphthalmia associated transcription factor（MITF）in B16F10 cells. It was found that HCPT（40，80，120，160，and 200 μmol/L）and Res（80，120，160，and 200 μmol/L）inhibited B16F10 cell proliferation through inducing apoptosis，and exhibited significantly dose-dependent inhibiting effects on tyrosinase activity and melanin synthesis on B16F10 cell（P < 0.05）. In addition，relative mRNA expressions of the TYR and MITF genes in B16F10 cells were depressed remarkably by HCPT at different concentrations and Res at high concentrations（120 and 160 μmol/L）. Conclusively，HCPT and Res may inhibit the B16F10 cell proliferation via inducing cell apoptosis，and depress the melanin synthesis in B16F10 cells from down-regulating the transcription of MITF gene and subsequently inhibiting the gene expression of TYR mRNA and activity of TYR.

Key words: 10-hydroxycamptothecin, resveratrol, tyrosinase, melanin, microphthalmia associated transcription factor

程杏安, 张淑明, 周晓武, 吴波, 林贤伟, 秦湘静 , 黄素青, 刘展眉, 蒋旭红. 两种天然产物对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理研究[J]. 生物技术通报, 2017, 33(8): 199-205.

CHENG Xing-an, ZHANG Shu-ming, ZHOU Xiao-wu, WU Bo, LIN Xian-wei, QIN Xiang-jing, HUANG Su-qing, LIU Zhan-mei, JIANG Xu-hong. Study on Inhibition Mechanism of Melanogenesis and Melanin Synthesis of B16F10 Cell Induced by Two Natural Products[J]. Biotechnology Bulletin, 2017, 33(8): 199-205.

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两种天然产物对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理研究

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