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荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1 mRNA方法的建立

张文婷;张莲芬;周利苹;金坚;   

  1. 江南大学医药学院分子药理研究室;
  • 出版日期:2008-12-26 发布日期:2008-12-26

  • Published:2008-12-26 Online:2008-12-26

摘要: 为了建立用荧光定量PCR检测人微血管内皮细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)mRNA表达的方法。提取人微血管内皮细总RNA,经RT-PCR获得靶基因(PAI-1)及管家基因(β-actin)的PCR产物。纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线。方法学考核参数为特异性、线性范围、灵敏性和重复性。分析全反式维甲酸对内皮细胞表达PAI-1 mRNA的干预效果。这种定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为104~1010拷贝,循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2>0.990),批内变异≤4.93%,批间变异≤9.12%。全反式维甲酸能上调内皮细胞PAI-1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性。因此,荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1基因表达的方法有助于溶栓药物药理学的研究和新药筛选。

关键词: 荧光定量PCR, 纤溶酶原激活剂抑制物-1, 人微血管内皮细胞, 全反式维甲酸