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HIV-1 Gag多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的抗体制备

柳发勇;韩莉;刘朝奇;覃晓琳;杨凡;余枫华;   

  1. 三峡大学分子生物学研究所;三峡大学医学院;湖北省宜昌市疾病预防控制中心;
  • 出版日期:2010-04-26 发布日期:2010-04-26
  • 基金资助:
    湖北省卫生厅科研项目(2007-JX3B80);; 宜昌市科技项目(2008-A08302-26)

  • Published:2010-04-26 Online:2010-04-26

摘要: 旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础。选定HIV-1 Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blotting测定融合蛋白的表达,并免疫动物制备相应抗体。结果显示,构建的HIV-1 Gag多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长576bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为27kD,以包涵体的形式存在。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体IgG。ELISA和免疫荧光方法检测显示制备的多克隆抗体能具有特异性反应。成功构建和高表达了HIV-1 Gag多表位融合蛋白,纯化蛋白制备的抗体与HIV-1Gag有特异性结合。为进一步研究HIV-1奠定了试验基础。

关键词: HIV-1 Gag嵌合基因, 蛋白表达, 抗体, 免疫原性