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实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾proPO基因标准曲线构建

孙双双;王亚军;唐杰;刘必谦;   

  1. 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室;宁波大学海洋生物工程重点实验室;
  • 出版日期:2011-02-26 发布日期:2011-02-26
  • 基金资助:
    浙江省教育厅基金项目(Y200804766)

  • Published:2011-02-26 Online:2011-02-26

摘要: 酚氧化酶原(proPO)系统属于一种酶联级系统,在凡纳滨对虾抵抗病原菌侵袭过程中具有重要作用。Real-time PCR检测技术已经成为国际上检测基因表达通用的方法,能对低丰度mRNA水平进行定量,可在体外对细胞活性进行评估,选择该方法进行外界环境因子胁迫下的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织proPO表达分析。在实时荧光定量PCR中,标准曲线法是最为简单、准确的定量方法。为了快速、准确的定量proPO基因在逆境下的表达水平,构建了正确、可靠的proPO基因表达标准品质粒和标准曲线。结果表明,该法所构建的标准曲线能够保证数据的精确性,满足实时荧光定量试验的要求,完全可以作为proPO基因荧光定量检测的参照标准。

关键词: 凡纳滨对虾, proPO基因, 标准曲线, 荧光定量PCR