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分选酶A在pET32a(+)原核表达载体中的表达和鉴定

朱芳;邓思;罗立新;   

  1. 华南理工大学生物科学与工程学院;
  • 出版日期:2011-06-26 发布日期:2011-06-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(20776051)

  • Published:2011-06-26 Online:2011-06-26

摘要: 旨在pET32a(+)原核表达载体中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶分选酶(SrtA)并进行鉴定。以合有pET22-srtA质粒为模板,设计并合成引物,PCR扩增得到SrtA_(△N24)和SrtA_(△N59)基因,经过BamHⅠ、XhoⅠ酶切,克隆入表达载体pET32a(+)中,构建重组载体pET32a-SrtA_(△N24)及pET32a-SrtA_(△N59),并转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物分别进行分析和鉴定。然后对重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达条件进行了优化。结果显示重组载体pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59)分别表达出相对分子量为约42 kD和37 kD的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting检测显示其分子量与预期的大小相符合。成功构建了重组质粒pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59),并且在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效融合表达。

关键词: 金黄色葡萄球菌, pET32a-SrtA_(△N24), pET32a-SrtA_(△N59), 大肠杆菌, 原核表达