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两个大豆MYB转录因子在原核细胞中的高效表达

李晓薇;苏连泰;赵旭;翟莹;张海军;张庆林;李景文;王庆钰;   

  1. 吉林大学植物科学学院;吉林省产品质量监督检验院;
  • 出版日期:2011-08-26 发布日期:2011-08-26
  • 基金资助:
    转基因生物新品种培育重大专项子课题(2008ZX08004-003);;国家自然科学基金面上项目(30971808);; 吉林省科技发展计划重点项目(20080204);; 长春市科技局国际科技合作项目(08GH10);; “211”三期建设项目

  • Published:2011-08-26 Online:2011-08-26

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摘要： 大豆(Glycine max)GmMYB12a与GmMYB12B2基因属于典型的植物R2R3-MYB转录因子。为进一步研究两个MYB12转录因子与相应顺式作用元件的相互作用,构建了两基因的原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中实现高效表达。利用PCR技术,将两端带有特异酶切位点的GmMYB12a与GmMYB12B2全长基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+),酶切、测序鉴定确认获得两基因的重组原核表达载体pET-28a-GmMYB12a与pET-28a-GmMYB12B2。然后把重组载体转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了两基因的原核表达载体,在IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导6 h后,目的蛋白能在Rosetta(DE3)中高效表达。

关键词: 大豆, MYB转录因子, 载体构建, pET-28a(+), Rosetta(DE3), 原核表达

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