小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (3): 129-133.

小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

王思民,张鸿杰,黎路林

华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室，武汉 430079

收稿日期:2012-07-03 修回日期:2013-03-21 出版日期:2013-03-20 发布日期:2013-03-21
作者简介:王思民，男，硕士研究生，研究方向：分子病毒学；E-mail ：wangsimin0724@sina.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（30770088）

Expression and Antibody Preparation of Plutella xylostella Granulovirus PP31

Wang Simin, Zhang Hongjie, Li Lulin

Hubei Key Laboratory of Genetic Regulation and Integrative Biology,College of Life Sciences,Central China Normal University,Wuhan 430079）

Received:2012-07-03 Revised:2013-03-21 Published:2013-03-20 Online:2013-03-21

摘要/Abstract

摘要： 杆状病毒PP31 是一种磷酸化的DNA 结合蛋白。pp31 基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。用PCR 方法从小菜蛾颗粒体病毒基因组扩增pp31 基因，将其克隆至原核表达载体pET28a，转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株。经IPTG 诱导，在被转化菌株中表达产生出携带6×His 标签的PP31 蛋白。用ProBondTM 树脂纯化的His-PP31 融合蛋白大小约29 kD 左右。用该融合蛋白免疫新西兰大白兔，获得PlxyGV PP31 蛋白抗血清。Western blot 分析显示，所获得的抗血清具有较强的特异性和高效价，可应用于PlxyGV PP31 蛋白分析。

关键词: 小菜蛾颗粒体病毒, PP31, 原核表达, 多克隆抗体

Abstract: Baculovirus PP31 is a phosphoprotein that could combine with DNA. The pp31 gene presents in all of the genomes of lepidopteran baculoviruses sequenced to date. In this study, Plutella xylostella pp31 gene was PCR-amplified and cloned into an expression vector pET28a, and transformed into the E. coli BL21（DE3）. In the transformed bacterial cells, induced by IPTG, a His-tagged PP31 protein with a size of 29 kD was expressed, which was purified using ProbondTM resin. Polyclonal antibodies against PlxyGV PP31 were prepared by immunizing a New Zealand rabbit with the purified his-tagged PP31. Western blot analysis showed that the antiserum had high titer and specificity and could be used in study of PP31.

Key words: Plutella xylostella granulovirus（PlxyGV）, PP31, Prokaryotic expression, Polyclonal antibody

王思民,张鸿杰,黎路林. 小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 生物技术通报, 2013, 0(3): 129-133.

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