烟草胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的克隆及表达分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.018

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (5): 113-119.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.018

烟草胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的克隆及表达分析

林世锋, 付强, 余婧, 赵杰宏, 任学良, 王仁刚

（贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室，贵阳 550081）

收稿日期:2014-09-12 出版日期:2015-05-18 发布日期:2015-05-18
作者简介:林世锋，男，博士，副研究员，研究方向：烟草遗传育种与分子生物学；E-mail：linshifeng1978@163.com
基金资助:
中国烟草总公司重点项目（110201302004），贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金（黔科合人字［2013] 02 号），贵州省科学技术基金项目（黔科合J字［2012] 2256号）

Cloning and Expression Analysis of Cytosolic 6-phosphogluconate Dehydrogenase Gene in Tobacco(Nicotiana tabacum)

Lin Shifeng, Fu Qiang, Yu Jing, Zhao Jiehong, Ren Xueliang, Wang Rengang

（Key Laboratory of Molecular Genetics，CNTC，Guizhou Academy of Tobacco Science，Guiyang 550081）

Received:2014-09-12 Published:2015-05-18 Online:2015-05-18

摘要/Abstract

摘要： 采用电子克隆的方法，结合RT-PCR和SMART RACE技术，首次从烟草（Nicotiana tabacum）中克隆到1个胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）基因的cDNA序列，命名为Nt6PGDH（GenBank登录号：KM211534）。该基因cDNA全长1 932 bp，开放阅读框1 455 bp，编码484个氨基酸，与番茄（Solanum lycopersicum）和马铃薯（Solanum tuberosum）的6PGDH氨基酸序列一致性最高，为95%。生物信息学分析表明，Nt6PGDH氨基酸序列不存在信号肽和转运肽，无跨膜结构域，定位于细胞质。对烟草不同发育时期Nt6PGDH基因的表达情况分析发现，Nt6PGDH基因在烟草旺长期根、茎、叶中的表达量均高于苗期，并且在同一发育时期，烟草根中表达量最强，茎次之，叶片最弱。

关键词: 烟草, 胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶, 基因克隆, 表达分析

Abstract: A cDNA sequence of cytosolic 6-phosphogluconate dehydrogenase（6PGDH）gene was cloned from Nicotiana tabacum by in silico cloning combined with RT-PCR and SMART RACE technologies, and designated as Nt6PGDH（Accession number KM211534）. The full length of its cDNA sequence is 1 932 bp, with a 1 455 bp open reading frame, and the gene encoded a protein of 484 amino acids with the sequence of highest identity, 95% as 6PGDH from Solanum lycopersicum and Solanum tuberosum. Bioinformatics analysis indicated that Nt6PGDH had no signal peptide, no transit peptide and notrans-membrane domain, and it was located in cytoplasm. Gene expression analysis showed that the expression levels of Nt6PGDH in roots, stems and leaves were higher at fast-growirg stage than at seedling stage. Moreover, at the same developmental stage, the highest level of Nt6PGDH expression were in the roots, then in the stems, the lowest in the leaves.

Key words: Nicotiana tabacum, cytosolic glucose-6-phosphate dehydrogenase, gene cloning, expression analysis

引用本文

林世锋, 付强, 余婧, 赵杰宏, 任学良, 王仁刚. 烟草胞质6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的克隆及表达分析[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 113-119.

Lin Shifeng, Fu Qiang, Yu Jing, Zhao Jiehong, Ren Xueliang, Wang Rengang. Cloning and Expression Analysis of Cytosolic 6-phosphogluconate Dehydrogenase Gene in Tobacco(Nicotiana tabacum)[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(5): 113-119.

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