马尾松毛虫质型多角体病毒非结构蛋白p44在Bac-to-Bac系统中的表达和亚细胞定位

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.020

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (3): 122-128.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.020

马尾松毛虫质型多角体病毒非结构蛋白p44在Bac-to-Bac系统中的表达和亚细胞定位

彭晗¹,王洪秀²,王金昌³,关丽梅³,靳亮³,万翠香¹

1. 南昌大学生命科学与食品工程学院, 南昌 330077；
2. 江西省农业科学院农业应用微生物研究所, 南昌 330200；
3. 江西省科学院微生物研究所, 南昌 330029

收稿日期:2015-05-19 出版日期:2016-03-24 发布日期:2016-03-25
作者简介:彭晗, 女, 硕士, 研究方向：昆虫病毒学；E-mail：penghan0830@163.com；王洪秀为本文并列第一作者
基金资助:
国家自然科学基金项目(31260031), 江西省科技重大专项基金项目(2014ACF60002), 中科院开放基金项目(2014AEM003)

Expression of Dendrolimus puntatus Cytoplasmic Polyhedrosis Virus(DpCPV1)Non-structural Protein p44 in Bac-to-Bac System and Localization in Infected Cells

PENG Han¹, WANG Hong-xiu², WANG Jin-chang³, GUAN Li-mei³, JIN Liang³, WAN Cui-xiang¹

1. School of Life Sciences and Food Engineering, Nanchang University, Nanchang 330077；
2. Institute of Agricultural Applied Microbiology, Jiangxi Agricultural Academy of Sciences, Nanchang 330200；
3. Institute of Microbiology, Jiangxi Academy of Sciences, Nanchang 330029

Received:2015-05-19 Published:2016-03-24 Online:2016-03-25

摘要/Abstract

摘要： 为探寻马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV 1)p44蛋白的功能, 构建了DpCPV 1基因组S8片段的原核表达体系, 表达纯化蛋白后免疫家兔制备了多克隆抗体。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统, 构建了3种重组的杆状病毒质粒(Bacmid-p44、Bacmid-p44-eGFP和Bacmid-eGFP)。转染昆虫细胞Sf9进行表达, 通过Western blot检测和蛋白的亚细胞定位观察。Western blot检测结果显示, Bacmid-S8在昆虫细胞Sf9中表达实际蛋白的大小为35 kD, 比在原核系统中表达的蛋白(44 kD)略小；利用激光共聚焦显微镜观察p44-eGFP的融合蛋白的亚细胞定位发现, 融合p44的绿色荧光蛋白(eGFP)主要聚集在细胞质中, 而未融合的 eGFP则分布于整个细胞, 说明 DpCPV 1的p44蛋白定位于细胞质中。

关键词: 马尾松毛虫质型多角体病毒, 多克隆抗体, 真核表达, 细胞定位

Abstract: In order to study the function of the Dendrolimus puntatus cytoplasmic polyhedrosis virus(DpCPV1)protein p44, PCR primers were designed according to the sequence of genome segment S8, the prokaryotic expression vector for genome segment 8 of DpCPV1 was constructed, and the polyclonal antibodies were prepared by immunizing rabbits with the purified expressed protein. Three recombinant plasmids(Bacmid-p44, Bacmid-p44-eGFP and Bacmid-eGFP)were constructed using Bac-to-Bac Baculovirus expression system., and they were transfected into insect cell Sf9 for the expression. The detection and subcellular localization of the protein were determined by Western blot. The results from Western blot showed that the actual expressed protein of Bacmid-S8 in Sf9 was 35 kD, smaller than the one(44 kD)expressed in the prokaryotic expression vector. The subcellular localization of fusion protein of p44-eGFP was determined by laser scanning confocal microscope, and the fused green fluorescent protein(eGFP)of p44 concentrated in the cytoplasm of the cells, while infused eGFP distributed throughout the whole cell, indicating that p44 protein of DpCPV1 was localized mainly in the cytoplasm of the cell. This work was the first study of having the eukaryotic expression of DpCPV1 S8 and subcellular location of it in insect cells,

Key words: Dendrolimus puntatus cytoplasmic polyhedrosis virus, polyclonal antibody, eukaryotic expression, cellular localization

彭晗,王洪秀,王金昌,关丽梅,靳亮,万翠香. 马尾松毛虫质型多角体病毒非结构蛋白p44在Bac-to-Bac系统中的表达和亚细胞定位[J]. 生物技术通报, 2016, 32(3): 122-128.

PENG Han, WANG Hong-xiu, WANG Jin-chang, GUAN Li-mei, JIN Liang, WAN Cui-xiang. Expression of Dendrolimus puntatus Cytoplasmic Polyhedrosis Virus(DpCPV1)Non-structural Protein p44 in Bac-to-Bac System and Localization in Infected Cells[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(3): 122-128.

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马尾松毛虫质型多角体病毒非结构蛋白p44在Bac-to-Bac系统中的表达和亚细胞定位

Expression of Dendrolimus puntatus Cytoplasmic Polyhedrosis Virus(DpCPV1)Non-structural Protein p44 in Bac-to-Bac System and Localization in Infected Cells

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