盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.04.014

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (4): 110-115.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.04.014

盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达

王宁¹,陈静¹，²,高飞¹,李华云¹,隋欣¹,周宜君¹

1. 中央民族大学生命与环境科学学院，北京 100081;
2. 公安部物证鉴定中心，北京 100741

收稿日期:2015-07-09 出版日期:2016-04-25 发布日期:2016-04-26
作者简介:王宁，女，硕士，研究方向：植物分子生物学，E-mail：wzpn123@163.com；陈静为本文并列第一作者
基金资助:
国家自然科学基金项目（31370356，31070361），中央民族大学一流大学一流学科项目（YLDX01013，2015MDTD08C），中央民族大学研究生科研创新项目（2015）

Cloning，Subcellular Localization and Prokaryotic Expression of Gene TsGPX3 from Thellungiella salsuginea

WANG Ning¹, CHEN Jing¹，², GAO Fei¹ ,LI Hua-yun¹ ,SUI Xin¹, ZHOU Yi-jun¹

1. College of Life and Environmental Sciences，Minzu University of China，Beijing 100081;
2. Institute of Forensic Science， Ministry of Public Security of P. R. China，Beijing 100741

Received:2015-07-09 Published:2016-04-25 Online:2016-04-26

摘要/Abstract

摘要： 以盐芥（Thellungiella salsuginea）为材料，获得TsGPX3的cDNA全长序列，其开放阅读框（ORF）序列长591 bp，编码196个氨基酸，具有GPXs家族的3个保守的特征结构域。系统进化分析显示，TsGPX3与同属于十字花科的萝卜RsGPX3、油菜BnGPX3和花椰菜BoGPX3等具有较高的同源性。构建植物表达载体pRTL2-TsGPX3-GFP，利用PEG转化拟南芥原生质体细胞进行瞬时表达，发现TsGPX3蛋白主要定位在细胞膜上。构建原核表达载体pET-TsGPX3，采用不同浓度IPTG对转入E.coli BL21（DE3）的pET-TsGPX3进行诱导表达，获得了分子量约为27 kD的蛋白，该蛋白在37℃、诱导培养5 h时可获得较高的表达量。

关键词: TsGPX3, 盐芥, 亚细胞定位, 原核表达

Abstract: A cDNA of TsGPX3（Thellungiella salsuginea GPX3）was isolated from T. salsuginea，and it contained a complete ORF with 591 bp encoding 196 amino acid residues. The three conservative domains of TsGPX3 protein in GPXs family was predicted by bioinformatics analysis. Phylogenetic analysis discovered that TsGPX3 was in high homology with RsGPX3 of Raphanus sativus，BnGPX3 of Brassica napus，and BoGPX3 of B. oleracea etc.，all belonging to Brassicaceae. The plant-expressed vector pRTL2-TsGPX3-GFP was transiently expressed by transforming the protoplasts of Arabidopsis thaliana via PEG method，and it was discovered that the TsGPX3 protein was mainly located in the plasma membrane. The constructed prokaryotic vector pET-TsGPX3 was transferred into Escherichia coli strain BL21（DE3）for induced expression under different concentration of IPTG，and a 27 kD recombinant protein was highly expressed after induced for 5 h at 37℃.

Key words: TsGPX3, Thellungiella salsuginea, subcellular localization, prokaryotic expression

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盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达

Cloning，Subcellular Localization and Prokaryotic Expression of Gene TsGPX3 from Thellungiella salsuginea

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