马尾松毛虫质型多角体病毒NSP1蛋白在昆虫细胞表达及定位

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.024

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (11): 208-214.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.024

马尾松毛虫质型多角体病毒NSP1蛋白在昆虫细胞表达及定位

靳亮^{1, 2}, 许翠萍³, 王金昌¹, 关丽梅¹, 张稳超¹, 黄朝¹, 高学梅¹, 王洪秀⁴

1. 江西省科学院微生物研究所,南昌 330029;
2. 江西省科学院鄱阳湖重点实验室,南昌330029;
3. 鲁东大学生命科学学院,烟台 264025;
4. 江西省农业科学院农业应用微生物研究所,南昌 330200

收稿日期:2016-04-01 出版日期:2016-11-25 发布日期:2016-11-11
作者简介:靳亮,男,博士,研究方向：昆虫病毒分子生物学研究及生物农药产业推广 ;E-mail: jinliang079@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31260031）,江西省科技重大专项基金项目（2014ACF60002）,中国科学院开放基金项目（2014AEM003）,江西省科学院鄱阳湖中心重点实验室项目（[2013]19号-07）

Expression and Cellular Localization of Dendrolimus puntatus Cytoplasmic Polyhedrosis Virus NSP1 in Insects

JIN Liang^{1, 2}, XU Cui-ping³, WANG Jin-chang¹, GUAN Li-mei¹, ZHANG Wen-chao¹, HUANG Chao¹, GAO Xue-mei¹, WANG Hong-xiu⁴

1. Institute of Microbiology,Jiangxi Academy of Sciences,Nanchang 330029;
2. Key laboratory of Poyang Lake,Jiangxi Academy of Sciences,Nanchang 330029;
3. College of Life Science,Ludong University,Yantai 264025;
4. Institute of Agricultural Applied Microbiology,Jiangxi Agricultural Academy of Sciences,Nanchang 330200

Received:2016-04-01 Published:2016-11-25 Online:2016-11-11

摘要/Abstract

摘要： 马尾松毛虫质型多角体病毒（Dendrolimus punctatus cytoplasmic polyhedrosis virus,DpCPV）基因组S5片段编码一个由881个氨基酸组成、分子量为101 kD的非结构蛋白（NSP1）。为探寻DpCPV NSP1蛋白的功能,将DpCPV 1基因组S5-1片段的抗原区（1-600 bp）进行了原核表达,并将纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。将稀释后的病毒液感染甜菜夜蛾幼虫,感染后每天解剖甜菜夜蛾并取中肠样品,通过Western blot检测NSP1蛋白的合成时间曲线。Western blot检测结果显示,S5片段表达的蛋白在病毒感染第1天就有合成,并且除了检测到全长的蛋白（101 kD）外,也检测到了80 kD和20 kD的蛋白条带,说明NSP1蛋白为早期表达蛋白,并且蛋白发生了切割。另外,首次对DpCPV 1 S5片段进行了在昆虫细胞中表达和昆虫亚细胞定位,结果显示,昆虫细胞定位于细胞的细胞质。

关键词: 马尾松毛虫质型多角体病毒, NSP1, 抗体制备, 真核表达, 细胞定位

Abstract: Genome segment 5 of Dendrolimus puntatus cytoplasmic polyhedrosis virus（DpCPV）was predicted to encode a protein of 881 amino acids with a molecular mass of 101 kD non-structural protein（NSP1）. In order to study the function of the DpCPV NSP1 protein,PCR primers were designed according to the S8 segment genome sequence. The antigen of DpCPV 1 genome S5-1 piece's area（1-600 bp）was in prokaryotic expression,and the polyclonal antibodies against the expressed proteins were raised in rabbits. The diluted virus was used to infect Autographa californica,midgut anatomical samples were taken in each day after infection,and the synthesis curve of NSP1 protein vs time was measured by Western blot. The results of Western blot indicated that the synthesized protein expressed by S5 segment was observed in the first day of infection;in addition to full length protein（101 kD）,20 kD and 80 kD protein bands also were detected,indicating that the expression of NSP1 was initiated in early stage and cleaving of NSP1 protein occurred. Moreover,for the first time,the DpCPV 1 S5 fragment was expressed in insect cells and subcellular localization of insects was observed. The results revealed that the NSP1 protein was present in the cytoplasm of the cells.

Key words: Dendrolimus puntatus cytoplasmic polyhedrosis virus, NSP1, polyclonal antibody preparation, eukaryotic expression, cellular localization

靳亮, 许翠萍, 王金昌, 关丽梅, 张稳超, 黄朝, 高学梅, 王洪秀. 马尾松毛虫质型多角体病毒NSP1蛋白在昆虫细胞表达及定位[J]. 生物技术通报, 2016, 32(11): 208-214.

JIN Liang, XU Cui-ping, WANG Jin-chang, GUAN Li-mei, ZHANG Wen-chao, HUANG Chao, GAO Xue-mei, WANG Hong-xiu. Expression and Cellular Localization of Dendrolimus puntatus Cytoplasmic Polyhedrosis Virus NSP1 in Insects[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(11): 208-214.

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马尾松毛虫质型多角体病毒NSP1蛋白在昆虫细胞表达及定位

Expression and Cellular Localization of Dendrolimus puntatus Cytoplasmic Polyhedrosis Virus NSP1 in Insects

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