转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0299

生物技术通报 ›› 2020, Vol. 36 ›› Issue (5): 48-55.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0299

• 生物分析方法与标准物质专题（专题主编：李亮副研究员） • 上一篇下一篇

转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析

王颢潜¹, 肖芳², 杨蕾³, 缪青梅³, 张旭冬¹, 张秀杰¹

1.农业农村部科技发展中心,北京 100176;
2.中国农业科学院油料作物研究所,武汉 430062;
3.浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,杭州 310021

收稿日期:2020-03-19 出版日期:2020-05-26 发布日期:2020-06-03
作者简介:王颢潜,男,农艺师,研究方向：转基因生物安全评价与检测;E-mail：648368941@qq.com
基金资助:
转基因生物新品种培育科技重大专项（2016ZX08012003）

Analysis of Verification Results by PCR Methods for Genetically Modified Double-resistant 12-5 Event-specific Maize

WANG Hao-qian¹, XIAO Fang², YANG Lei³, MIAO Qing-mei³, ZHANG Xu-dong¹, ZHANG Xiu-jie¹

1. Development Center for Science and Technology,Ministry of Agriculture and Rural Affairs of the People’s Republic of China,Beijing 100176;
2. Oil Crops Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Wuhan 430062;
3. The Institute of Quality Standards for Agricultural Products,Zhejiang Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310021

Received:2020-03-19 Published:2020-05-26 Online:2020-06-03

摘要/Abstract

摘要： 抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种,该品种于2020年1月21日获得农业转基因生物安全证书,具有广阔的应用前景。转化体特异性PCR方法是进行转基因生物安全监管的最有效的技术手段之一,可以对转基因产品进行身份鉴定。本研究组织8家实验室对研发单位提供的的双抗12-5转化体特异性定性、定量PCR方法进行了验证,验证结果显示定性与定量PCR检测方法均具有稳定性好、特异性强和灵敏度高的特点,定量PCR方法能精确地定量检测质量分数为5%和0.5%的双抗12-5样品,并且具有良好的重复性和再现性,符合相关标准的要求。本研究有助于后续标准方法的建立和完善,为我国转基因生物安全监管提供技术支撑和决策依据。

关键词: 转基因玉米, 定性PCR, 定量PCR, 方法验证

Abstract: Insect-resistant and herbicide-tolerant genetically modified maize DR12-5 is a new transgenic strain independently researched and developed in China. It has been approved for the agricultural GMO safety certificate on January 21,2020,and thus has broad application prospects. The event-specific PCR method is one of the most effective detection methods in safety supervision for transgenic organisms,which can identify the genetically modified products. In this study,we organized 8 laboratories to verify the event-specific qualitative and quantitative PCR methods of the double-resistant（DR）12-5 transformants provided by its research and development institutions. The verified results showed that both the qualitative and quantitative PCR detection methods had good stability,strong specificity and high sensitivity. The quantitative PCR method can accurately and quantitatively detect DR 12-5 samples in mass fractions of 5% and 0.5%,and has good repeatability and reproducibility,which conforms the requirements of relevant standards. This study is conducive to the establishment and improvement of subsequent standard methods and provides technical support and decision-making basis for the safety supervision of GMOs in China.

Key words: genetically modified maize, qualitative PCR, quantitative PCR, methods validation

王颢潜, 肖芳, 杨蕾, 缪青梅, 张旭冬, 张秀杰. 转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析[J]. 生物技术通报, 2020, 36(5): 48-55.

WANG Hao-qian, XIAO Fang, YANG Lei, MIAO Qing-mei, ZHANG Xu-dong, ZHANG Xiu-jie. Analysis of Verification Results by PCR Methods for Genetically Modified Double-resistant 12-5 Event-specific Maize[J]. Biotechnology Bulletin, 2020, 36(5): 48-55.

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转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析

Analysis of Verification Results by PCR Methods for Genetically Modified Double-resistant 12-5 Event-specific Maize

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