生物技术通报

转基因苜蓿的研究进展

李静;薛鑫;吴金霞;

2012, 0(11): 1-8.

摘要 ( 209 )

PDF (1247KB) ( 1077 )

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苜蓿素有"牧草之王"的美称,其作为饲草已有2 000多年历史。近几年,随着转基因技术的发展与应用,苜蓿还被用作生物反应器等。国内外科学家对苜蓿的研究领域越来越广泛,转基因技术在苜蓿中的研究报道也越来越多。综述转基因技术在苜蓿品种改良中的应用,介绍遗传转化方法和苜蓿转基因育种的研究方向,并概述苜蓿转基因育种的优点及其应用前景。

全基因组与串联复制后白菜基因的保留

方璐;程锋;武剑;王晓武;

2012, 0(11): 9-14.

摘要 ( 278 )

PDF (1280KB) ( 1610 )

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全基因组复制与串联复制是两种重要的基因扩增途径,在生物进化过程中普遍存在。这两种复制方式相互关系的研究在拟南芥中已经取得很多成果。白菜(Brassica rapa)属于十字花科(Brassicaceae)芸薹属(Brassica),是一类重要的经济作物,也是研究基因组多倍化和形态演化的模式植物。白菜基因组的测序与组装工作已经取得了重大成就,运用比较基因组学的方法,通过比较白菜与模式植物拟南芥,可以清晰鉴定白菜基因组经历的全基因组三倍化事件。同时,白菜与拟南芥同属于十字花科,有较近的起源关系和良好的基因组共线性关系。因此,拟南芥可以作为外群研究白菜全基因组三倍化以及串联重复之后基因的偏向性保留。结果发现,在白菜中存在物种特有的偏向性保留基因,即与环境刺激相关的基因和与激素相关的基因。

植物抗病毒分子机制的研究进展

孔君;杜智欣;朱水芳;鲁洁;

2012, 0(11): 15-20.

摘要 ( 155 )

PDF (1237KB) ( 993 )

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植物在进化过程中为微生物提供了丰富的物质环境,微生物的生存依赖于植物的生物合成和产生能量的能力。有近450种植物致病病毒,可导致一系列的疾病。但植物不是被动地面对病毒的攻击,而是进化了精细而有效的防御机制来抵抗、限制或损害病毒的感染。植物抗病基因(R-gene)可以抵抗包括病毒在内的多种病原体。由特定病毒而引发的防御反应是先天固有的,而且研究人员已经鉴定了与这种防御反应相关的细胞学和生理学特性。作为抵抗外来核酸(包括病毒)的重要细胞防御途径,RNA沉默近来获得了显著性的研究进展。在植物中这些途径的协同作用有效地防御了病毒的感染。

植物NAC转录因子的研究进展

康桂娟;曾日中;聂智毅;黎瑜;代龙军;段翠芳;

2012, 0(11): 21-26.

摘要 ( 195 )

PDF (1227KB) ( 1401 )

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NAC(NAM、ATAF1、ATAF2和CUC2)转录因子是植物特有的一类转录因子,在多种陆生植物基因组中发现有超过100个成员,是植物基因组中最大的转录因子家族之一。该家族转录因子的共同特点是其N端具有保守的NAC结构域,C端则为高度变异和具有转录激活功能的调控区。具有多种生物功能NAC家族转录因子在植物生长发育、胁迫应答和激素调节等过程中具有重要作用。就植物NAC转录因子的基本结构特征和生物学功能最新研究进展进行综述。

植物MAPK C族基因的研究进展

朱斌;梁颖;

2012, 0(11): 27-31.

摘要 ( 138 )

PDF (1274KB) ( 853 )

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促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它包括MAPKKK、MAPKK和MAPK等3组,它们共同构成MAPK级联系统。MAPK级联系统通过参与蛋白质磷酸化作用传递和放大信号,调控下游基因的表达,最终引起植物的一系列生理反应。MAPK的基因包括A族、B族、C族和D族4类。就C族MAPK基因的种类和功能,以及近几年来对C族MAPK基因的研究方法作综述。

病原物诱导型植物启动子的研究方法

马睿;陈华民;吴茂森;吴祖建;何晨阳;

2012, 0(11): 32-37.

摘要 ( 162 )

PDF (1233KB) ( 782 )

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植物启动子是控制基因转录的DNA序列之一,按其表达方法可分为组成型(或非特异性)表达和诱导型(或特异性)表达启动子两种类型。当受到病原物侵染时,植物通常通过诱导型启动子中的W-box、RAV1 AAT和WRKY等元件/位点、调控下游基因的表达,作出相应的应答反应。近年来,通过计算机预测与试验测定方法的有效结合,发掘和鉴定出了一些病原物诱导型启动子,并进行了调控功能的解析。此外,在通过转基因方法改良植物抗病性的途径中,利用病原物诱导型启动子可以实现对抗病功能相关基因表达的精准控制,避免由组成型启动子持续驱动基因表达、对植株本身带来的负效应。结合本室对水稻启动子OsBTF3-p的研究结果,重点对近年来国内外有关病原物诱导型启动子及其调控元件/位点的研究方法和应用进展作一综述。

昆虫RNAi效率的影响因素研究进展

李良德;刘婕;姜春来;赖先文;

2012, 0(11): 38-42.

摘要 ( 174 )

PDF (1256KB) ( 745 )

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RNA干扰(RNAi)是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA诱发的、导致mRNA特异性沉默的过程。简单总结昆虫RNAi的研究现状,从理论和实践两个方面重点介绍昆虫RNAi效率影响因素的研究进展,最后对昆虫RNAi应用于害虫防治的前景进行展望。

菌蜕系统作为新型渔用疫苗体系的研究进展

李绍戊;卢彤岩;

2012, 0(11): 43-48.

摘要 ( 127 )

PDF (1215KB) ( 577 )

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菌蜕系统作为一种新型疫苗体系,是通过对噬菌体PhiX174裂解基因E的精确表达调控建立的。细菌菌蜕兼顾了组合抗原免疫原性、佐剂效应、靶向性载体等作用,特别适合于黏膜免疫及口服免疫;由于缺乏内含物而更加安全;生产过程简单,适宜大规模生产。这些特性决定了细菌菌蜕是一种具有良好应用前景的候选疫苗及递送系统。近年来随着水产养殖业的发展,鱼类细菌性疾病大规模爆发并造成严重损失。鉴于化学药物和常规疫苗的种种缺陷,新型渔用疫苗的研究日渐受到人们重视。在阐述细菌菌蜕系统形成和调控机制的基础上,着重介绍菌蜕疫苗在几种鱼类细菌性病害防治中的研究进展,并对菌蜕系统作为新型渔用疫苗体系的可行性和优越性进行讨论,对其应用前景进行展望。相信随着研究的深入,渔用菌蜕疫苗将在水产养殖病害防治中发挥着越来越重要的作用。

重组腺相关病毒载体的研究进展

邱燕;杨彬;柳纪省;

2012, 0(11): 49-53.

摘要 ( 160 )

PDF (1165KB) ( 1820 )

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重组腺相关病毒(rAAV)载体作为基因治疗的工具,具有无致病性、长期表达、低免疫原性和感染多种细胞等特点。因此,rAAV载体越来越受到重视。就rAAV载体在生物学特性、构建、安全性和应用方面作一介绍。

TAL效应子应用研究进展

梁龙;皮文辉;

2012, 0(11): 54-59.

摘要 ( 262 )

PDF (2306KB) ( 1670 )

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转录激活因子样效应子(transcription activator-like effectors,TALEs)是一类在植物病原黄单胞菌(plant pathogen Xanthomonas sp.)中发现的天然的DNA结合蛋白,它具有与目标DNA序列特异性结合的能力。随着研究的深入,TALEs的结构信息和特异性结合DNA序列的分子机理被破解,这就为人工设计构建TALE-DNA结构结合域提供了理论基础。人工构建的TALEs可以应用于各种各样的基因组工程,包括转录调控和基因组编辑。综述TALE的结构、TALE与DNA结合的分子密码,重点综述人工构建TALEs的应用,并对其未来的发展方向进行展望。

从随机整合到靶向修饰的转基因动物技术

魏庆信;郑新民;毕延震;

2012, 0(11): 60-65.

摘要 ( 152 )

PDF (1196KB) ( 642 )

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转基因动物技术产生30年来取得了迅速发展,先后建立了多种转基因方法,尤其是从外源基因的随机整合发展到定位整合,成为定向进行动物遗传改造的强大工具。介绍各种转基因动物技术的建立及目前发展的概况,以及从随机整合到靶向修饰的发展过程。

牛奶中残留抗生素免疫检测方法研究进展

李周敏;方惠群;许丹科;

2012, 0(11): 66-72.

摘要 ( 164 )

PDF (1218KB) ( 1162 )

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抗生素已经被广泛应用于人类及动物细菌感染的治疗与预防中,但由于它们有可能被添加至动物饲料中,而导致牲畜及牛奶中抗生素残留量超过最大残留允许量,因此抗生素使用的水平是否会造成对人类健康的危害成为人们持续关注的问题。为了测定抗生素残留的含量,人们正在研发准确、简单和低成本的新型检测方法。几类用于检测牛乳及乳制品中残留抗生素的方法已经建立,包括仪器分析方法、微生物检测法和免疫检测法等。主要综述基于抗原抗体特异性识别原理的免疫分析技术以及免疫传感器、蛋白芯片与表面等离子体共振(SPR)等几种新的免疫检测方法,阐述这些方法所具有的简便、成本低、高灵敏和特异性好等特点。

黑芥子酶基因pyk10根特异启动子在番茄中的验证

崔姗姗;乔亚科;李桂兰;钟磊;刘杰;王林红;

2012, 0(11): 73-77.

摘要 ( 132 )

PDF (3310KB) ( 467 )

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黑芥子酶是一类催化芥子油苷水解的同工酶,pyk10是一个在拟南芥根和下胚轴中特异表达的黑芥子酶基因。从拟南芥Columbia生态型基因组中克隆的长度为1 450 bp的pyk10基因启动子片段,以gus基因为报告基因构建了植物表达载体pPykG。通过农杆菌介导法,将pyk10的根特异表达启动子以及gus基因转入了番茄中蔬6号,经PCR检测,转化植株中扩增出pyk10启动子特异性条带。组织化学法检测及定量分析,显示pyk10启动子驱动gus基因在番茄的根部特定表达。

Cu/Zn-SOD基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

姚冉;李轶女;张志芳;沈桂芳;潘沈元;

2012, 0(11): 78-82.

摘要 ( 142 )

PDF (3139KB) ( 849 )

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为研究Cu/Zn-SOD基因在提高转基因植物抗逆性方面的作用,从一株地热芽孢杆菌(Geobacillus)中克隆得到Cu/Zn-SOD基因,以pZP211质粒为表达载体,构建了植物表达载体pZP211-Cu/ZnSOD,并通过农杆菌介导对烟草进行遗传转化。经PCR检测证明已获得转Cu/Zn-SOD基因的烟草。进而测定转基因烟草的SOD活力,结果表明Cu/Zn-SOD基因在烟草中高效表达。对转基因烟草进行耐盐性检测,证明Cu/Zn-SOD基因确实能够提高烟草对盐胁迫的耐受性。

草莓MDHAR及AO基因的克隆及序列分析

林源秀;顾欣昕;汤浩茹;侯艳霞;代小娟;张勇;罗娅;刘泽静;

2012, 0(11): 83-89.

摘要 ( 135 )

PDF (2830KB) ( 478 )

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从新鲜幼嫩‘丰香’草莓(Fragaria×ananassa cv.Toyonaka)果实中提取分离总RNA,反转录成cDNA,根据已报道的其他植物单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)及抗坏血酸氧化酶(AO)基因的保守区分别设计一对引物,通过PCR扩增均得到目的条带。序列分析发现:mdhar基因片段长372 bp,与刺梨同源性最高达96%,该片段编码123个氨基酸,推导的氨基酸序列与苹果属植物同源性为91%,与其他植物该基因编码的氨基酸序列也有较高相似性;ao基因片段长842 bp,编码280个氨基酸,该片段与其他多种植物的ao基因均具有较高同源性,与甜瓜和黄瓜ao基因的同源性最高,均为70%,编码的氨基酸序列与其他多种植物均具有70%左右的相似性。

小鼠TIE2基因启动子的克隆及转录活性分析

陆俊佳;袁志刚;许淑茹;廖明;赖青鸟;畅荣妮;袁广之;侯伟;舒伟;

2012, 0(11): 90-94.

摘要 ( 200 )

PDF (1825KB) ( 837 )

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克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性。设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-TIE2-Luc。报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1细胞系,48 h后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况。构建的pGL3-TIE2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;转染4种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,TIE2基因启动子区域(-2056-+1)具有较强的转录活性。成功构建小鼠TIE2基因启动子报告质粒,证实TIE2基因上游区域(-2056-+1)具有较强的启动子活性。

牦牛HORMAD1基因的克隆及生物信息学分析

金帅;齐社宁;阎萍;梁春年;郭宪;包鹏甲;裴杰;褚敏;丁学智;刘文博;吴晓云;刘建;

2012, 0(11): 95-100.

摘要 ( 155 )

PDF (2294KB) ( 437 )

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利用分子克隆技术获得了牦牛HORMAD1基因编码区序列,并采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构等方面进行了预测和分析。结果表明,牦牛HORMAD1基因包含一个长度为1 182 bp的开放阅读框,编码393个氨基酸;其编码蛋白属于亲水性蛋白,无明显的信号肽,含有很多个磷酸化位点。二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主。HORMAD1基因编码产物氨基酸邻接系统树表明,牦牛HORMAD1与黄牛、马和猪等物种的HORMAD1氨基酸遗传距离较近,具有高度相似性。

木薯淀粉合成相关酶基因的克隆及表达分析

许娟;罗兴录;赵德征;

2012, 0(11): 101-109.

摘要 ( 143 )

PDF (5051KB) ( 725 )

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根据核苷酸同源性设计简并引物,克隆了一段大小为665 bp的木薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(sAGP)片段,并根据已知序列设计特异引物,克隆分离得到GBSS基因和SBE基因的cDNA片段。半定量RT-PCR分析结果表明,在木薯不同生长时期,3种淀粉合成相关酶基因的时空表达规律不同,GBSS基因表达有时期特异性和组织特异性,只在块根形成期和块根成熟期表达,在组织部位茎中表达最多,并且在这3种基因中表达水平相对较低。而sAGP基因在这3种基因中表达水平最高,在木薯块根成熟期竟达超量表达水平,并且在华南124和辐选01中有品种差异,差异明显,在辐选01中的表达要优于华南124的表达。SBE基因表达较平稳,在各个时期表达水平都处于中间水平,在4个时期中,块根成熟期时的表达水平相对较高,块根形成期和苗期其次,收获期最低,也具有品种间差异,在辐选01中的表达要优于华南124的表达。

东方肉座菌EU7-22纤维素酶基因的克隆及序列分析

龙传南;成奕瑾;邬小兵;刘健;龙敏南;

2012, 0(11): 110-117.

摘要 ( 126 )

PDF (4759KB) ( 436 )

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东方肉座菌EU7-22与XC-9、里氏木霉、康宁木霉、黑曲霉、斜卧青霉进行产纤维素酶比较,结果表明菌株EU7-22具有较高的产纤维素酶能力及完整的纤维素酶系。根据里氏木霉和绿色木霉的外切葡聚糖酶,内切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶相关基因序列,设计引物PCR扩增出菌株EU7-22 cbhⅠ、cbhⅡ、egⅠ、egⅡ及bglⅠ。基因序列经NCBI Blast分析表明,cbhⅠ与绿色木霉cbh1基因(FJ871063)同源性最高达99%;cbhⅡ与康宁木霉cbh2基因(DQ504304)同源性最高达99%;egⅠ与长枝木霉eg1基因(GU144298)同源性最高达99%;egⅡ与绿色木霉eg2基因(EF602036)同源性最高达99%;bglⅠ与菌株Trichodermasp.SSLbgl基因(FJ040193)同源性最高达100%。5种纤维素酶基因编码的相应氨基酸序列与其他木霉纤维素酶的氨基酸序列相似性也非常高。对上述纤维素酶基因编码的相应蛋白的分子量、等电点、N-糖基化位点、信号肽序列进行分析;对纤维素结合区及糖基水解酶家族特征结构区进行了定位;用SWISS-Model模拟了酶蛋白的三级结构。

牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估

王子东;苏建国;段彪;杨春荣;高广琦;康峰;张荣芳;胡晓明;扈廷茂;李光鹏;

2012, 0(11): 118-126.

摘要 ( 155 )

PDF (8045KB) ( 561 )

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采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性。根据GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11>EEF1A2>18S rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。

镜鲤骨骼肌酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

王书;张研;蒋丽;赵紫霞;孙效文;

2012, 0(11): 127-132.

摘要 ( 124 )

PDF (2137KB) ( 516 )

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为了研究蛋白质之间的相互作用,利用Gateway技术构建了镜鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)骨骼肌酵母双杂交cDNA文库。经检测表明,构建的初级cDNA文库的库容量为8×106CFU;酵母双杂交cDNA文库的库容量为6.64×106CFU,插入片段集中在1-2 kb之间,具有较好的多态性。随机挑取的24个克隆没有空载体,全部发生了重组。较高的库容量、较长的插入片段以及较高的重组率保证了文库的完整性和覆盖度。镜鲤骨骼肌酵母双杂交cDNA文库的构建为克隆全长目的基因及研究影响骨骼肌发育的信号传导通路奠定了基础。

凡纳滨对虾7个不同家系遗传差异的微卫星标记分析

冯娜娜;徐真;马洪雨;马春艳;乔振国;马凌波;

2012, 0(11): 133-138.

摘要 ( 102 )

PDF (3531KB) ( 535 )

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应用7对微卫星引物对凡纳滨对虾3个世代共7个家系进行了遗传多样性分析,共检测到20个等位基因,每个位点的等位基因数为2-3个,平均为2.86个,观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)分别为0.47-0.90、0.50-0.66、0.37-0.58,平均为0.61、0.60、0.51,说明凡纳滨对虾具有较高的遗传杂合水平。F2代的多样性水平略高于F1代,而F3代则明显低于F1代和F2代。两两家系间的遗传分化指数FST介于0.01-0.34之间,其中C-F1和L-F1家系之间FST最小(0.01),C-F1和O-F3家系之间FST最大(0.34),表明世代间的家系遗传分化程度大于同一世代的家系。各家系间的Nei's遗传距离和FST分析结果相一致,表明凡纳滨对虾世代间具有明显的遗传分化。本试验将为开展凡纳滨对虾家系选育工作提供理论依据和技术指导,并对甲壳动物的遗传选育具有参考价值。

鲫鱼(Carassius auratus)表达序列标签资源的SSR构成与分布分析

杨曦;

2012, 0(11): 139-143.

摘要 ( 131 )

PDF (1469KB) ( 489 )

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分析鲫鱼EST资源的SSR信息,为开发EST-SSR标记奠定基础。从GenBank中获得鲫鱼EST序列,然后用Sequencher 4.8软件进行序列拼接得到Uni-EST序列,再通过SciRoKo 3.4软件扫描Uni-EST序列中的SSR,最后得出EST-SSR的分布特征、频率和重复基元类型等特征。通过搜索共获得9 230条鲫鱼EST原始序列,通过使用计算机软件进行预处理共得到全长为3.81×106bp的无冗余Uni-EST 7 092条。在这些序列中共搜索出597个SSR位点,分布在545条Uni-EST序列中,发生频率为8.13%,EST-SSR的平均长度为(19.34±6.23)bp,平均每Mb含156.55个SSR位点。单核苷酸重复在鲫鱼EST-SSR中占主导地位,发生频率为39.53%,其次为二核苷酸重复,发生频率为36.68%以及三核苷酸重复的15.41%。在所有非单核苷酸重复基元中,AC基元出现频率最高,其次为AG。设计出引物404对。最后得出结论鲫鱼EST中SSR出现的频率较高,并且类型较为丰富,为进行遗传多样性分析和重要经济性状筛选等方面的研究提供了基础和指导。

利用PCR-RFLP技术对鲫鱼6个不同品系的鉴定

庄怡;刘必谦;唐杰;

2012, 0(11): 144-149.

摘要 ( 124 )

PDF (1737KB) ( 524 )

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采用PCR-RFLP方法分析鲫鱼不同品系mtDNA ND3/ND4L/ND4基因片段,对野鲫、异育银鲫、红鲫、白鲫、彩鲫及金鱼的基因片段进行测序,测序结果用RESearch-version1.0软件对限制性内切酶特异性位点进行分析,最终选择MvaⅠ核酸限制性内切酶对目的基因片段进行酶切,同时引入鲤鱼作为外类群,构建了系统树。酶切结果分析表明,基于聚合酶链式反应——限制性片段长度多态性分析能快速而准确地区分鲫鱼的4个不同品系,首次提出异育银鲫和浙江地区野鲫(河鲫鱼)在mtDNAND3/ND4L/ND4基因上的分子鉴定法,为物种鉴定提供了一定的理论研究基础。但野鲫、金鱼、彩鲫的基因序列两两只有一个碱基的差异,相似度接近100%,用酶切软件(RESearch-version1.0)进行分析后未能找到区别三者的限制性内切酶位点,这一结果也验证了关于金鱼、彩鲫起源于野鲫的观点。

鹅副黏病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及应用

鲜思美;韦洪才;尹强军;孔维祥;苏刚;

2012, 0(11): 150-154.

摘要 ( 117 )

PDF (3483KB) ( 561 )

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参照GenBank中登录的鹅副黏病毒(gallinacean paramyxovirus,GPMV)序列(AY325797),针对GPMV的F基因保守区域设计了4条引物,通过优化反应条件,建立了检测GPMV的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),并进行了特异性试验、敏感性试验及临床样本检测。结果显示,建立的RT-LAMP方法对GPMV阳性样品扩增产物的电泳呈特征性梯状条带,而鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)、鸭源沙门氏菌(Salmonella anatamu)、鸡马立克病毒(MDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的扩增产物电泳后均无扩增条带。建立的RT-LAMP方法对GPMV的最低检出量为9.5 fg的cDNA模板,敏感性比常规RT-PCR方法高1 000倍。表明建立的RT-LAMP方法特异性强、敏感性高。对6份临床样本的检出率为100%(6/6),与常规RT-PCR的符合率为100%。

甜椒叶绿体小分子量热激蛋白(CaHSP26)对大肠杆菌抗氧化能力的影响

郭尚敬;李妹芳;孟庆杰;冀芦沙;

2012, 0(11): 155-160.

摘要 ( 104 )

PDF (2809KB) ( 439 )

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旨在探讨大肠杆菌中CaHSP26基因的异源表达对原核生物抗氧化能力的影响。通过构建CaHSP26基因原核表达载体pET30-CaHSP26,经不同浓度过氧化氢处理后,分析大肠杆菌菌种存活率及抗氧化能力。结果表明,与转空载体pET-30a(+)的对照大肠杆菌菌株P30相比,过量表达CaHSP26提高了转基因的大肠杆菌菌株P750过氧化氢胁迫下的存活率,降低了MDA的产生,CaHSP26的表达可以提高原核生物抗氧化能力。试验初步证实超表达CaHSP26的转基因烟草生长势明显高于对照,为今后研究植物中CaHSP26抗氧化能力的作用机理提供依据。

罗非鱼3种C型溶菌酶重组蛋白的制备及与几种鱼虾溶菌酶溶菌谱的比较

瞿兰;叶星;田园园;张莉莉;高风英;卢迈新;张蕊;

2012, 0(11): 161-166.

摘要 ( 134 )

PDF (2243KB) ( 564 )

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应用基因工程技术制备了3种奥利亚罗非鱼C型溶菌酶的重组蛋白,并应用比浊法比较了它们与草鱼C型溶菌酶、G型溶菌酶和斑节对虾C型溶菌酶重组蛋白对无乳链球菌、嗜水气单胞菌等8种细菌的溶菌作用。研究发现,6种重组溶菌酶对这8种菌均具有溶菌活性,但是溶菌活力强弱不一。其中罗非鱼C3溶菌酶对革兰氏阳性菌无乳链球菌的溶菌作用最强,草鱼C型与G型溶菌酶次之;所有重组溶菌酶对革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌均具较强的溶菌活性。与斑节对虾C型溶菌酶、草鱼C型与G型溶菌酶相比,罗非鱼的C型溶菌酶对嗜水气单胞菌具有较强的溶菌作用,且以C1的溶菌活性最强。本研究结果可为选择具较强溶菌活力的溶菌酶应用于养殖生产提供依据,并可为应用转基因技术培育抗病品种提供靶基因。

高畸形率水牛精子与正常水牛精子差异表达蛋白的分离和鉴定

杨丽;付强;黄愉淋;蒋丽;张明;卢克焕;

2012, 0(11): 167-171.

摘要 ( 130 )

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旨在分析高畸形率和正常水牛精子的差异表达蛋白。运用双向凝胶电泳以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析鉴定出高畸形率和正常的水牛精子的差异表达蛋白,并对部分蛋白进行生物信息学分析。结果显示,高畸形率和正常水牛精子之间存在16个表达差异明显的蛋白点,与正常水牛精子相比,5个蛋白斑点表达量上调,6个蛋白斑点下调,3个蛋白斑点缺失,2个蛋白斑点在畸形率高的水牛精子特有。质谱鉴定16个差异蛋白,成功鉴定出6个差异蛋白斑点,对应4种蛋白:左旋天冬酰胺酶、热应激蛋白β-9、半乳糖激酶、β-微管蛋白-2C。研究表明,高畸形率和正常水牛精子蛋白质表达存在一定的差异。

家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因截短多肽的表达和抗体制备

李国辉;王鹏;胡朝阳;姚勤;

2012, 0(11): 172-176.

摘要 ( 115 )

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通过PCR扩增家蚕二分浓核病毒(Bombyx moribidensovirus,BmBDV)VD1-ORF4基因序列中的两个DNA片段,将测序正确的两个目的片段分别亚克隆到原核表达载体pET-30a上,通过不同浓度的IPTG对含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导,对诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,这两个截短多肽都获得了表达,其N-端融合有6个组氨酸。将割胶纯化的蛋白多肽与佐剂充分研磨,以研磨后的匀浆液对昆明小鼠进行皮下多点注射。获得的抗血清分别对原核诱导表达产物进行Western blot分析,结果表明,在特定的位置都能杂交到一条特异的蛋白带,表明制备的两个多抗能为深入研究VD1-ORF4基因的功能提供基础。

FgβNAC基因对禾谷镰刀菌生长发育及致病性的影响

麦合木提江·米吉提;王旭丽;张桦;曾洪梅;Sehroon Khan;邱德文;

2012, 0(11): 177-184.

摘要 ( 127 )

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以裂殖酵母NAC蛋白β亚基为对象在禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)基因组数据库中进行搜索,发现了同源蛋白基因FGSG_08675并命名为FgβNAC。通过基因敲除技术对禾谷镰刀菌FgβNAC基因进行敲除和回补,分别获得了敲除菌株fgβnac和回补菌株fgβnac::FgβNAC,并分别对野生型菌株、敲除菌株和回补菌株进行了表型和致病性研究。结果表明,与野生型菌株PH-1相比,敲除菌株fgβnac在固体马铃薯培养基(PDA)上生长速率明显减慢,约为野生型菌株的一半,气生菌丝致密短小;同样在液体PD培养液中培养3 d的敲除突变株的菌丝干重仅为野生型的56%。另外,敲除突变株的分生孢子产量相比野生型菌株下降了78.5%。进一步采用麦穗离体接种法对其致病性进行了检测,发现FgβNAC基因的缺失引起致病力显著地下降,仅局限于接种部位及邻近的小颖,而无法侵入维管束组织引起穗枯症状。

谷氨酸棒杆菌ilvE基因的敲除对相关氨基酸合成的影响

罗玉常;窦文芳;张晓梅;史劲松;许正宏;

2012, 0(11): 185-191.

摘要 ( 139 )

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L-缬氨酸是谷氨酸棒杆菌SYPS-062发酵生产L-丝氨酸的主要副产物。为减少L-缬氨酸的积累,利用基因重组技术敲除SYPS-062转氨酶B编码基因ilvE内部的987 bp核苷酸序列,构建了ilvE基因缺失突变株SYPS-062△ilvE。研究表明,重组菌ilvE基因的缺失直接导致了分支氨基酸(Val、Ile、Leu)的合成能力的降低,影响了菌体的生长,其中Ile成为生长限制性因子,在培养基中添加分支氨基酸能明显促进其生长。重组菌培养96 h,发酵液中L-缬氨酸含量低于0.5 g/L,与出发菌株相比,其生成率降低90%。

不同启动子表达Cry1Ie蛋白的特性分析

张春鸽;赵灿;束长龙;孙冰;宋福平;高继国;张杰;

2012, 0(11): 192-196.

摘要 ( 130 )

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苏云金芽胞杆菌启动子P1Ac与T7启动子表达的Cry1Ie蛋白对鳞翅目害虫小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫的杀虫活性有较大差异。P1Ac启动子表达的Cry1Ie蛋白LC50为1.73μg/mL,T7启动子表达的Cry1Ie蛋白LC50为18.18μg/mL,后者是前者的10.5倍。主要从形态、碱溶性及抗胰蛋白酶稳定性等方面对其进行了初步的探索。结果显示,两者在形态上无显著差异,均有相对较为规则的颗粒存在;在碱溶性方面无显著差异,均有约20.0%的包涵体能溶解于pH10.5 50.0 mmol/L Na2CO3的溶液;在对抗胰蛋白酶的稳定性方面无明显差异,由此说明这三方面都不是二者活性差异的原因,推测是T7启动子表达的Cry1Ie蛋白折叠不正确导致其活性较差。

一种简单、快速的苏云金芽胞杆菌基因组DNA提取方法

张彦蕊;束长龙;宋福平;黄大昉;张杰;

2012, 0(11): 197-201.

摘要 ( 129 )

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从培养时间、裂解溶液、抽提和沉淀时间等方面对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因组DNA提取技术进行改进。提取8株对蛴螬有杀虫活性的野生Bt菌株的基因组DNA,分析其纯度,并进行PCR分析与酶切分析。试验结果表明,新的提取方法耗时36 min,明显短于旧方法所用时间(97 min);两种方法提取的基因组DNA A260/A280均大于1.8,无明显区别;琼脂糖凝胶电泳结果显示,上样量相同时,新方法提取的基因组DNA浓度是旧方法的5倍以上;新方法提取的基因组DNA能作为模板灵敏地扩增出测试基因,所提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,证明DNA具有很高的纯度。本研究改进的基因组DNA提取方法耗时短、产量高,并能满足PCR扩增、酶切等分子生物学需要。

一株芝麻香型白酒高温大曲的施莱格尔氏菌的分离与鉴定

李辉;李红;姚粟;葛媛媛;信春晖;许玲;程池;

2012, 0(11): 202-206.

摘要 ( 147 )

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从芝麻香型白酒高温大曲中分离到一株革兰氏阴性高温细菌Zm91,并对其进行形态学、生理生化代谢特征以及细胞代谢酶活性和药物敏感性分析,结合16S rRNA基因序列分析结果,Zm91鉴定为水生施莱格尔氏菌(Schlegelella aquatica)。该菌株是首次从我国芝麻香型白酒高温大曲中分离得到的施莱格尔氏菌,其G+C mol%含量为67.5%,具有碱性磷酸盐酶、酯酶(C4)、脂酯酶(C8)、白氨酸芳胺酶、颉氨酸芳胺酶、胰凝乳蛋白酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶及α-葡萄糖苷酶活性,对青霉素、氨苄西林、链霉素、利福平敏感。

《生物技术通报》2011年文献计量分析

马鑫;狄艳红;李楠;

2012, 0(11): 207-212.

摘要 ( 107 )

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运用文献计量学的相关理论和方法,对《生物技术通报》2011年所刊论文从载文、作者和引文三个方面的载文量等多项指标进行统计分析,为主办单位掌握期刊现状,提高办刊质量提供依据,也为本刊读者进行文献阅读和投稿提供信息参考。

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