生物技术通报

王宇;潘兴;卜宁;陶思源;王勇;马莲菊;

2011, 0(12): 1-5.

摘要 ( 162 )

PDF (1258KB) ( 846 )

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植物在逆境胁迫下发生复杂的表观遗传变化,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和RNA介导的基因沉默等。其中DNA甲基化是表观遗传学中的重要组成部分,主要通过甲基化、去甲基化来参与逆境胁迫下基因表达的调控,进而增强植物体的抗逆性,调节植物体的生长发育。就非生物与生物胁迫对水稻DNA甲基化水平的影响进行综述,为从表观遗传水平研究水稻抗逆性的机制提供理论参考。

拟南芥耐盐、耐旱和抗寒的分子机理及其利用

刘春;李玉中;彭晚霞;王显生;

2011, 0(12): 6-13.

摘要 ( 177 )

PDF (1334KB) ( 562 )

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非生物胁迫,尤其是盐分、干旱和寒冷是导致全球作物减产的主要原因。植物对环境胁迫的适应,依赖于与胁迫感知、信号转导、基因表达相关的分子级联网络的激活。因此,保护和维持细胞成分的结构和功能的基因工程可以增强植物对胁迫的耐受性。综述拟南芥对盐分、干旱和寒冷3种主要非生物胁迫因子耐受性的分子机理,以及相关机理和耐逆基因在改良作物耐逆性方面的应用。

亚麻外源基因遗传转化研究进展

温昕;邵铁梅;李雪;焦展;孔卫娜;安胜军;

2011, 0(12): 14-21.

摘要 ( 99 )

PDF (1353KB) ( 638 )

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亚麻作为重要的经济作物,其遗传转化研究对亚麻新品种的选育工作具有重要意义。分析亚麻遗传转化方法、提高转化效率及转化组织筛选等方面,重点从抗除草剂基因、抗病基因、抗重金属逆性基因、改善亚麻纤维质量基因,以及改善亚麻油质量基因方面综述亚麻遗传转化外源基因的研究和应用进展,并讨论亚麻遗传转化过程中存在的问题和解决策略。

AAV衣壳蛋白基因工程的修饰研究进展

连文昌;许佳佳;李招发;

2011, 0(12): 22-26.

摘要 ( 168 )

PDF (1325KB) ( 698 )

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腺相关病毒(AAV)作为载体进行基因治疗已经越来越受人们的青睐,其安全性在帕金森病、囊性纤维病和视网膜疾病等单基因突变疾病临床治疗中得到证明。利用AAV载体进行临床治疗的应用在逐渐增多,提高AAV靶向性和转染效率是人们期盼解决的一道难题。而目前对AAV衣壳蛋白基因工程的修饰,可以明显提高其转导效率和靶向性,一定程度上扫除了其广泛应用AAV的障碍。阐述重组AAV(rAAV)衣壳蛋白在基因工程修饰方面的研究进展及其对基因治疗应用前景的综述。

丙氨酸脱氢酶研究概况

何广正;徐书景;马宁;刘东;鞠建松;

2011, 0(12): 27-32.

摘要 ( 412 )

PDF (1410KB) ( 810 )

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丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,ALD,EC 1.4.1.1)是一种以烟酰胺腺嘌呤(NAD)为辅酶的氨基酸脱氢酶。丙氨酸脱氢酶可逆催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸、氨及NADH。丙氨酸脱氢酶也是调节氨基酸代谢和糖代谢的重要酶类,其催化反应的产物丙酮酸广泛应用于医药、农药和食品等领域,具有良好的发展前景。主要介绍丙氨酸脱氢酶的纯化及活力检测、酶空间结构(底物结合位点),以及催化反应机理等方面的研究。

促绒毛生长基因及其在转基因动物中的应用

刘明涛;杨军;王志钢;

2011, 0(12): 33-36.

摘要 ( 79 )

PDF (1289KB) ( 430 )

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通过转基因克隆技术使得外源基因在皮肤细胞内超表达,进而促进毛囊发育和绒毛生长是培育高产量绒毛动物品系的有效途径。在转基因动物中构建真核表达载体常用的皮肤特异性启动子主要是皮肤角蛋白基因启动子,具有促绒毛生长功能的基因则包括编码生长因子、转录因子及小分子蛋白的基因。目前已获得利用这些特异性启动子调控外源基因在皮肤细胞内超表达的转基因动物。

纤毛虫抑动抗原及其诱导的免疫反应的研究进展

原丽平;徐阳;陈金铃;黄晓红;

2011, 0(12): 37-42.

摘要 ( 89 )

PDF (1304KB) ( 751 )

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概述了纤毛虫抑动抗原基因的结构特征、基因特点、克隆、表达、生物学功能,以及与抑动抗原蛋白有关的免疫反应最新研究进展。指出抑动抗原可能是有效疫苗的候选分子之一,为有效的预防"白点病"提供了依据。

干细胞用于乳腺癌治疗的研究进展

郭亚慧;申小涛;王文朋;刘鹏霞;

2011, 0(12): 43-50.

摘要 ( 247 )

PDF (1359KB) ( 446 )

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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,是一种严重影响女性身心健康甚至危及生命的恶性肿瘤,男性乳腺癌罕见。目前,乳腺癌的治疗仍以外科治疗为主。随着干细胞生物学的发展,人们发现造血干细胞移植在恶性肿瘤大剂量放、化疗后的造血重建和免疫重建中有着重要作用,而间充质干细胞可以作为基因载体而抑制肿瘤细胞的生长。这些研究为乳腺癌的治疗提供了全新的思路。分析目前人们应用干细胞治疗乳腺癌的研究现状,同时统计分析了中国临床试验注册中心数据库和美国clinicaltrials数据库中用干细胞治疗乳腺癌的临床试验的最新数据,并且指出了干细胞用于乳腺癌治疗的研究趋势,目的是为后续开展的用干细胞治疗乳腺癌的研究提供一定的参考。

基因表达系列分析技术在真菌功能基因组学中的应用

殷朝敏;雷靖行;陈叶叶;马爱民;

2011, 0(12): 51-56.

摘要 ( 169 )

PDF (1345KB) ( 873 )

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基因表达系列分析(SAGE)是一种在mRNA水平上高通量、快速、灵敏分析细胞或组织基因表达信息,并在基因组学研究中广泛应用的技术。该技术不仅能够全面地分析特定组织或细胞表达的基因,比较不同时空条件下基因表达的差异,还可以在全基因组范围内获得基因的表达谱,从而发现新基因。综述基因表达系列分析技术在材料用量、标签长度、技术流程和标签测序等方面的研究进展及该技术在病原真菌、工业真菌和食用真菌功能基因组学中的应用。

代谢组学研究技术及其应用

赵维薇;许文涛;王龑;彭晓丽;黄昆仑;

2011, 0(12): 57-64.

摘要 ( 162 )

PDF (1361KB) ( 1935 )

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介绍代谢组学的研究技术,主要包括核磁共振技术,色谱-质谱联用技术,同时介绍常用的数据处理方法和数据库。对目前代谢组学在医药领域、生物研究领域、资源环境,以及农业和食品领域的应用情况进行综述。

分子标记在百合属植物遗传多样性研究中的应用

陈名红;熊华斌;李成云;

2011, 0(12): 65-69.

摘要 ( 116 )

PDF (1276KB) ( 1010 )

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介绍分子标记技术及其发展概况,并重点论述几种常见分子标记技术如随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphism DNA,RAPD)、简单重复序列间区(inter-simple sequence repeat,ISSR)、扩增片段长度多态性(amplified fragment lengthpolymorphism,AFLP)和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)等的基本原理、技术上的优缺点及其在百合属植物遗传多样性研究中的应用现状,同时对分子标记技术在百合属植物遗传多样性研究中的应用前景进行展望。

玉米基因组DNA提取及浓度测定方法评价

陈丽丽;张鹏;黄新;朱水芳;

2011, 0(12): 70-74.

摘要 ( 165 )

PDF (1364KB) ( 940 )

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以非转基因玉米种子为材料,比较了常用的3种植物基因组DNA提取试剂盒及改良的CTAB法,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度及实时荧光PCR扩增检测,对提取得到的基因组DNA的纯度、得率及4种提取方法的重复性、提取时间进行分析;比较紫外分光光度法、Qubit荧光法、Pico Green荧光分光光度法,以实时荧光定量PCR检测结果为参照,对3种DNA浓度测定方法的准确性进行分析。结果显示,磁珠法(Promega)最适合应用于快速、简便、高效检测中的植物基因组DNA提取,能有效获得纯度高、完整性好的基因组DNA,并且磁珠法提取效率高,重复性好,提取时间短;在基因组DNA浓度测定中,紫外分光光度法、Qubit荧光法、Pico Green荧光分光光度法的相对误差分别为99.8%、49.8%和28.9%,表明Pico Green荧光分光光度法测定DNA浓度的准确度最高。

大豆转录因子GmC2H2基因转化拟南芥效果分析

单曙光;于国红;徐娜;程宪国;

2011, 0(12): 75-81.

摘要 ( 121 )

PDF (1817KB) ( 991 )

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GmC2H2转录因子基因是本实验室获得的一个编码172个氨基酸携带516 bp核苷酸的转录因子,属于经典C2H2型锌指蛋白。通过构建植物表达载体GmC2H2-pCAMBIA1304,借助优化的Floral-dip法转化模式植物拟南芥,经潮霉素Hygromycine(45-50 mg/L)抗性筛选获得转基因拟南芥植株。GUS组织染色分析表明,GmC2H2基因在生长12 d的转基因拟南芥幼苗中,表达部位主要集中在根部。对转基因拟南芥进行了低温(1℃)和脱落酸(200μmol/L)胁迫处理,测定其生理生化指标,通过real-time qPCR确定目的基因在转基因拟南芥中的表达情况。结果表明,携带GmC2H2目的基因的转基因拟南芥中脯氨酸和可溶性糖水平要高于野生型植株,而丙二醛水平要低于野生型,在抗逆性方面明显优于野生型拟南芥植株;并且胁迫处理下的转基因拟南芥中GmC2H2基因的表达量要高于未胁迫处理的转基因植株,说明GmC2H2基因的表达受低温和ABA的诱导,初步明确了该转录因子基因的功能。

不同葡萄品种CBF_1基因的克隆及序列分析

肖啸;王旺田;孙萍;张哲敏;李唯;

2011, 0(12): 82-87.

摘要 ( 90 )

PDF (1632KB) ( 349 )

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根据欧洲葡萄CBF1基因序列设计1对特异引物,采用PCR方法从山葡萄、贝达、SO4、Ln33和黑比诺的基因组中各扩增出1个DNA片段并克隆到pMD18-T载体中。经序列测定和分析,各片段均长756 bp,与欧洲葡萄CBF1基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列分别具有98%和99%的同源性,而且推导的氨基酸序列中包含有同源性更高的AP2/EREBP DNA结合域,以及CBFs蛋白的两段特征序列(PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAWR)。结果表明从5种葡萄中均可以克隆出CBF1基因。

四种贺兰山紫蘑菇rDNA ITS序列分析

张靠稳;杨振华;刘建利;马爱瑛;

2011, 0(12): 88-91.

摘要 ( 78 )

PDF (1314KB) ( 465 )

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对4种紫蘑菇的rDNA ITS区段进行克隆测序和序列特征比较分析,并与GenBank检索获得的相似性最高菌株的ITS序列一起计算遗传距离并构建系统发育树,旨在探索紫蘑菇的分子鉴定方法及亲缘关系。结果显示,CM-1、CM-2、CM-3及CM-4四种紫蘑菇均属于丝膜菌(Cortinarius),分别与C.rufoolivaceus、C.coerulescens、C.humolens和C.calochrous序列进行比对后,均显示了较高的遗传相似性。贺兰山紫蘑菇隶属于丝膜菌属(Cortinarius)。

前沟藻18S rDNA序列克隆和分子鉴定分析

胡乐琴;唐晨;汪卿;陈霁升;何培民;

2011, 0(12): 92-95.

摘要 ( 132 )

PDF (1510KB) ( 697 )

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旨在扩增一株未知微藻18S rDNA,并进行序列分析和物种鉴定分析。提取该微藻总DNA,用PCR技术扩增其18S rDNA,对序列进行测序,在GenBank进行序列比对分析,用Clustal X软件构建进化树;用光学显微镜进行形态学分析。经测序其序列长度为1 736 bp,G+C为47%;同源性分析表明,与GenBank中多个强壮前沟藻种的18S rDNA基因序列同源性达99%;与前沟藻属的其它藻种同源性均达95%以上。而与裸甲藻属和环藻属的藻株同源性为85%左右。经光学显微镜观察,该藻具有典型的强壮前沟藻形态。结合该藻18S rDNA序列分析和粗略的形态学分析,推断该藻可能为前沟藻属的强壮前沟藻。微藻形体微小,结构简单,需借助电子显微镜才可准确地从形态学上鉴定其种属,鉴定工作繁琐费时;而利用分子技术,则可能使鉴定工作变得简单快捷。

莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达与活性分析

牛丽红;耿丽丽;张蕊;孙长坡;张杰;

2011, 0(12): 96-101.

摘要 ( 101 )

PDF (1557KB) ( 596 )

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采用RT-PCR方法克隆到莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因lyd15,与毕赤酵母表达载体pPIC3.5K连接,电击法转化毕赤酵母GS115。转化子经高浓度G418筛选出高抗性重组子,经PCR鉴定目的基因已整合入毕赤酵母基因组中。甲醇诱导表达,RT-PCR检测表明莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中得到了表达;毕赤酵母总脂肪酸甲酯经气相色谱(GC)分析结果显示亚油酸的含量明显降低,而α-亚麻酸的含量有所提高。

植物Kunitz蛋白酶抑制剂的生物信息学分析

张亚光;黄勇;宋玉娇;陈访访;周嘉裕;廖海;

2011, 0(12): 102-107.

摘要 ( 146 )

PDF (1604KB) ( 920 )

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运用生物信息学的方法,对已在GenBank数据库中注册的大豆、海红豆、凤凰木、象耳豆及洋紫荆等植物Kunitz蛋白酶抑制剂的氨基酸序列进行分析。结果显示,这些植物的Kunitz蛋白酶抑制剂中甘氨酸、谷氨酸、亮氨酸、丝氨酸、天冬氨酸及缬氨酸含量较丰富;不同植物Kunitz蛋白酶抑制剂的氨基酸序列具有较高的同源性,其中P1位点的氨基酸残基序度保守;分子进化研究表明Kunitz蛋白酶抑制剂可作为植物遗传分化和分子进化研究的重要依据;部分序列中存在信号肽;分子中不存在跨膜结构域,可能受蛋白激酶C的磷酸化;无规卷曲是多肽链中的主要结构元件;分子中包含典型的STI功能结构域。

基于EST和GSS序列的玉米未知微RNA的数据挖掘

李婧;熊莉丽;胡久梅;郭志云;

2011, 0(12): 108-112.

摘要 ( 126 )

PDF (1374KB) ( 697 )

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miRNAs通过与靶基因互补位点配对结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达。根据miRNA进化上的保守性,以拟南芥、水稻等已知的植物miRNAs为探针,与相关数据库中玉米表达序列标签(EST)和基因组序列(GSS)中的非编码序列比对,采用一系列的标准进行筛选,最后预测得到24个玉米miRNA前体,通过靶基因的预测共得到61个靶基因。通过生物信息学方法大大提高了人们发现miRNAs及其靶基因的效率,补充了玉米miRNA数据库的不足。

转油菜素内酯合成基因DET2烟草对NaCl胁迫的反应

束红梅;郭书巧;倪万潮;

2011, 0(12): 113-116.

摘要 ( 98 )

PDF (1417KB) ( 429 )

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通过农杆菌介导法,将含有油菜素内酯合成基因DET2的植物表达载体pCAMBIA2301-DET2转入烟草,获得转基因烟草植株。用T1代转基因阳性株进行耐NaCl试验,结果显示,NaCl胁迫下转基因烟草、非转基因对照烟草的出苗率、幼苗鲜重、株高及根长均随NaCl浓度增加而下降。但在相同NaCl浓度下,转基因植株鲜重、株高及根长均明显高于非转基因对照烟草,并且转基因植株的丙二醛(MDA)含量低于非转基因植株,诱导蛋白基因P5CS表达高峰出现时间晚于非转基因植株。说明DET2的表达提高了烟草的耐NaCl能力。

丽江云杉体胚发生过程差异蛋白分析

陈少瑜;吴涛;陈芳;王寅冰;易善军;

2011, 0(12): 117-122.

摘要 ( 95 )

PDF (1410KB) ( 493 )

相关文章 | 计量指标

以丽江云杉非胚性愈伤组织、胚性愈伤组织以及体胚发育过程的球型胚、鱼雷胚和子叶胚培养物为材料,采用双向电泳技术对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析。结果表明,丽江云杉非胚性、胚性愈伤组织及不同发育阶段体胚的蛋白质种类丰富(1 857-2 344个),胚性愈伤及发育体胚蛋白种类多于非胚性愈伤,球型胚蛋白种类最为丰富(2 344个)。非胚性、愈伤组织及各发育阶段体胚共检测到44个差异表达蛋白,它们有明显的变化特点,子叶胚阶段的差异蛋白变化最为显著(23个,占特异蛋白总数的52.3%),鱼雷胚新出现大比例的分子量小于30 kD、pI为6.0左右的弱酸性小分子量特异蛋白(8个,占此阶段特异蛋白总数的88.9%),这些体胚发育晚期特异表达蛋白可能与体胚形态建成有密切关系。

激发子PebC1原核表达蛋白的生物活性分析

张云华;杨秀芬;曾洪梅;袁京京;邱德文;

2011, 0(12): 123-126.

摘要 ( 75 )

PDF (1415KB) ( 341 )

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将激发子PebC1基因在大肠杆菌中进行表达,重组蛋白可以明显促进植物生长,诱导植物产生抗旱性和抗病性。用不同浓度的重组表达蛋白PebC1处理番茄,其幼苗的株高分别增加了24.56%-48.34%;同时诱导了番茄对灰霉病的系统抗性,番茄的病叶率和病情指数均明显下降,诱抗效果达到34.06%-52.44%。小麦经重组表达蛋白PebC1处理后,叶片的抗衰度和幼苗存活率也明显增加,抗旱综合系数从15.28提高到了64.88。

中国美利奴绵羊MHC 222G18 BAC克隆的基因筛选与结构分析

邱巍;董慧芹;白大章;陈芳;马润林;高剑峰;

2011, 0(12): 127-131.

摘要 ( 94 )

PDF (1394KB) ( 456 )

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绵羊主要组织相容性复合体(MHC)是与控制绵羊抗病性和易感性紧密连锁的基因簇。为了深入了解该类基因的组成与结构,利用中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段克隆222G18,经BsaJⅠ酶切后制备α-32P放射性探针,通过噬菌斑原位杂交技术筛选中国美利奴绵羊cDNA文库,经过两轮杂交筛选,获得12个cDNA阳性克隆,经测序、比对等生物信息学分析确定获得7条与免疫相关的序列,其中3条具有完整的编码序列。利用SIM4软件将7条序列定位到BAC克隆上,结果显示绵羊MHC区段的表达序列多为断裂基因且跨度很大,可能是形成其基因多样性的重要原因之一。

河西绒山羊GOLA-DRB1基因第2外显子变异特征分析

王佳泰;王继卿;胡江;马小军;罗玉柱;

2011, 0(12): 132-138.

摘要 ( 89 )

PDF (1916KB) ( 408 )

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采用PCR-SSCP、克隆测序等方法,分析600只河西绒山羊GOLA-DRB1基因第2外显子遗传特征、SNPs变异类型,同时分析该基因与山羊流产的关联性。结果表明,河西绒山羊DRB1基因第2外显子上存在26个等位基因,序列比对后发现26个等位基因中存在71个核苷酸变异位点,占分析位点总数的30%。其中转换位点25个,占核苷酸多态位点的35.21%;颠换位点35个,占核苷酸多态位点的49.3%;转换和颠换共存位点9个,占12.68%。山羊流产关联性分析结果表明,在河西绒山羊病例组中DRB1*18、DRB1*23、DRB1*26等位基因频率高于正常对照组(P<0.05),χ2值分别为6.31,4.859,6.396,RR值为2.55,2.72,DRB1*8等位基因频率显著高于正常对照组(P<0.01),χ2值为17.618,RR值为3.59;病例组中DRB1*14等位基因频率低于正常对照组(P<0.05),χ2值为4.812,RR值为0.65,DRB1*1和DRB1*11显著低于正常对照组(P<0.01),其中B1的χ2值和RR值分别为14.11和0.61,初步推断DRB1*8可能是河西绒山羊流产发病单体型中的遗传易感基因,DRB1*1和DRB1*11可能为其遗传保护基因。

北京油鸡肺间充质干细胞的分离培养及鉴定

田少囡;侯玲玲;关伟军;马月辉;

2011, 0(12): 139-144.

摘要 ( 96 )

PDF (1482KB) ( 363 )

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以9-14日龄北京油鸡肺脏组织为材料,Ⅳ型胶原酶消化,percoll分离,获得肺间充质干细胞。进行免疫组化和RT-PCR鉴定,并比较3种培养体系对北京油鸡肺间充质干细胞增殖的影响。RT-PCR结果显示,细胞免疫组化鉴定结果 CD44、CD29呈阳性,CD34呈阴性。证实所培养的细胞为北京油鸡肺间充质干细胞;比较不同扩增培养体系,结果表明,培养体系DMEM/F12+10%FBS+2.5 ng/mL bFGF较有利于北京油鸡肺间充质干细胞的增殖。该试验成功地分离并鉴定了北京油鸡骨骼肌卫星细胞,建立了适于北京油鸡肺间充质干细胞体外扩增的培养体系。

Wistar大鼠CD9的cDNA克隆、原核表达及生殖腺中的检测

鄂尔浑塔娜;李莉;谷辰;邢万金;

2011, 0(12): 145-149.

摘要 ( 96 )

PDF (1495KB) ( 520 )

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为了用Wistar大鼠研究CD9对精卵融合的影响和与其它精卵融合相关蛋白的作用,克隆了Wistar大鼠的CD9cDNA。测序结果显示,Wistar大鼠的CD9 cDNA编码区与GenBank中发布的SD(Sprague-Dawley)大鼠相同,但在3'非翻译区多一个T。用Western blotting方法检测Wistar大鼠睾丸和卵巢总蛋白发现睾丸和卵巢里均表达内源性CD9蛋白,分子量相同。此外,在大肠杆菌中表达了GST-CD9融合蛋白,并用GST标签纯化CD9蛋白,为体外研究CD9与其它精卵融合相关蛋白的作用提供参考。

虾夷扇贝铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与转录表达特性分析

姜冰;鲍相渤;张明;高祥刚;李石磊;刘卫东;

2011, 0(12): 150-156.

摘要 ( 92 )

PDF (1953KB) ( 682 )

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利用RACE和克隆等方法得到了虾夷扇贝铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)基因全长cDNA序列,该序列全长1 064 bp,5'和3'非编码区(UTR)分别为61 bp和541 bp,开放阅读框(ORF)462 bp,编码153个氨基酸和一个终止密码子。分析发现,此氨基酸序列含有形成二硫键的两个半胱氨酸残基以及4个铜结合位点、4个锌结合位点,与已知的Cu/Zn-SOD结构相似,与其它物种同源性较高。进行虾夷扇贝组织分布及发育过程中不同时期的实时荧光定量监测,发现鳃中Cu/Zn-SOD基因mRNA相对表达量最高,肾次之,血淋巴中最低;不同发育阶段Cu/Zn-SOD表达量变化明显,其中受精卵和早期D形幼体两个时期表达量相对较高。

海洋真菌灰绿曲霉地标蛋白编码基因AgTeaA的克隆与序列分析

张盈;沈伟;蔡孟浩;周祥山;张元兴;

2011, 0(12): 157-161.

摘要 ( 111 )

PDF (1855KB) ( 466 )

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为考察灰绿曲霉中地标蛋白AgTeaA对菌丝极化生长的作用,首先需要获得AgTeaA基因序列的相关信息。通过简并PCR的方法得到AgTeaA基因编码区的一段序列,以已知序列为基础通过染色体步移的方法获得基因全长及两端侧翼序列,然后通过逆转录PCR的方法确定出氨基酸序列,并利用相关生物学软件进行蛋白结构域的分析和系统进化树的构建。结果显示,AgTeaA基因编码区全长4 706 bp,对应氨基酸全长为1 477 aa,在256-320 bp,733-780 bp,1064-1150 bp处各有一个内含子。与粟酒裂殖酵母Tea1蛋白和构巢曲霉TeaA蛋白相似的是,AgTeaA在290-339 aa,340-390 aa处各有一个Kelch结构域,在818-899 aa,938-999 aa,1 021-1 116 aa,1 183-1 335 aa处各有一个卷曲螺旋(coiled coil)结构域。

环鸟苷二磷酸代谢相关基因PXO_03877的原核表达

王红敏;田芳;陈华民;何晨阳;

2011, 0(12): 162-165.

摘要 ( 108 )

PDF (1436KB) ( 592 )

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分别利用表达载体pET-32a(+)和pGEX-4T-1,对水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,简称Xoo)中环鸟苷二磷酸代谢相关基因PXO_03877进行了原核表达,并进行可溶性检测。结果显示,用pET-32a(+)载体构建的表达质粒载体经诱导后,重组蛋白大多位于沉淀而非上清中,经诱导条件优化后,蛋白仍以包涵体形式存在;而利用pGEX-4T-1载体表达的含有GST标签的重组蛋白为可溶性蛋白,可用于下一步纯化后进行功能分析。

利用染色质免疫共沉淀技术确定转录因子RIN调控的靶基因

李玲;傅达奇;朱毅;田慧琴;罗云波;朱本忠;

2011, 0(12): 166-170.

摘要 ( 147 )

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以粉红期番茄果实为材料,用含不同浓度甲醛的缓冲液交联DNA和蛋白质,利用超声波将其染色质随机断裂成大小为200-1 000 bp的片段,用RIN蛋白的特异性抗体免疫沉淀与RIN蛋白结合的DNA片段,然后解交联和纯化DNA片段,最终用普通PCR试验和测序验证与转录因子RIN结合的DNA序列。结果表明,适用于番茄果实的最佳ChIP试验条件为:用1%甲醛溶液交联DNA和蛋白质的复合物;用20%功率,工作6 s,间隔10 s,脉冲3次超声破碎该复合物,可以得到适当大小的片段,用于后续的试验。普通PCR和测序验证结果证明转录因子RIN与LeACS2和LeACS4启动子区域的CArG box序列结合。

犬细小病毒VP2基因在枯草芽孢杆菌中的表达及鉴定

李爽;黄文斌;黄爱玲;吕暾;

2011, 0(12): 171-174.

摘要 ( 134 )

PDF (1379KB) ( 765 )

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从犬细小病毒/犬瘟热二联苗中提取CPV基因组,根据GenBank发表的CPV-VP2基因序列设计一对引物,对VP2基因进行PCR扩增,并克隆至TA Cloning Kit Dual Promoter(pCRⅡ),获得克隆载体pCR-VP2。将重组质粒亚克隆到枯草芽孢杆菌表达载体pHT43上,获得重组表达载体pHT43-VP2。经双酶切鉴定及序列比对分析后,将pHT43-VP2载体转化入枯草芽孢杆菌WB600中进行诱导表达,产物使用PAGE胶蛋白回收法纯化。结果表明,在69 kD处存在目的蛋白,ELISA检测发现,纯化后的目的蛋白与阳性血清存在特异性反应。

丙酮酸羧化酶基因的过量表达对富马酸代谢的影响

吴世根;张婷;邓利;

2011, 0(12): 175-180.

摘要 ( 149 )

PDF (1617KB) ( 804 )

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旨在研究丙酮酸羧化酶胞质同工酶(PC)基因在毕赤酵母中的过量表达对TCA还原途径碳源分流及草酰乙酸、L-苹果酸生产的影响,构建了表达载体pPIC3.5K-PC,并转化了毕赤酵母GS115。转化子经过表型鉴定,PCR分析和G418浓度梯度筛选获得了高拷贝的重组子(pas-01)。甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE分析及PC活性检测,发现酶活提高了3倍,说明PC在毕赤酵母中获得了成功表达。以pPIC3.5K转化菌为对照,对该重组子进行了草酰乙酸及苹果酸的发酵研究。结果显示,草酰乙酸产量(177.4 mg/L)提高了109.6%,L-苹果酸的产量(127.45 mg/L)提高33.7%,菌体生物量提高15.7%,表明PC的过量表达有助于L-苹果酸和草酰乙酸的积累,并且对菌体的生长有一定的促进作用。

过表达CodY蛋白的苏云金芽胞杆菌基因工程菌YBT-881-L1的构建及特性鉴定

黄凯;金鑫;梅菲;王阶平;喻子牛;李明顺;

2011, 0(12): 181-187.

摘要 ( 99 )

PDF (1655KB) ( 344 )

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为研究革兰氏阳性菌中的全局性转录调控因子CodY在苏云金芽胞杆菌中的作用机制,利用苏云金芽胞杆菌野生株YBT-881,构建了过表达CodY蛋白的基因工程菌YBT-881-L1,并对此工程菌的特性进行了研究。结果表明,YBT-881-L1和野生株的生长曲线以及伴胞晶体形态无明显差异。SDS-PAGE及质谱分析发现,野生株中沉默的cry2Ac4基因在工程菌中被激活,并产生大量的Cry2Ac4蛋白。生物测定结果表明,重组菌株YBT-881-L1较野生株对鳞翅目害虫棉铃虫的杀虫活性明显增强。

盐藻酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活鉴定

李照熙;杨瑞;林艳;杨保胜;王天云;

2011, 0(12): 188-191.

摘要 ( 88 )

PDF (1336KB) ( 471 )

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构建用于杜氏盐藻核基质结合区结合蛋白(matrix attachment region binding protein,MBP)酵母双杂交试验的诱饵载体,进行自激活及毒性验证。以含有盐藻MBP质粒为模板,经PCR扩增后连接pMD18-T载体,经测序鉴定正确后,EcoRNde双酶切获得目的基因MBP,克隆入经同样双酶切的酵母载体pGBKT7,转化酵母菌株AH109及Y187,检测其自激活以及毒性。结果显示,成功扩增出盐藻MBP基因,重组质粒pGBKT7-MBP经酶切、测序表明序列正确,转化酵母菌株无自激活,无毒性。

重组人抗血栓蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达及纯化

龚志飞;杨翔;颜法宝;陈强;孙小强;华子春;

2011, 0(12): 192-198.

摘要 ( 140 )

PDF (1618KB) ( 890 )

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旨在优化重组人抗血栓蛋白(rHAP)工程菌的自诱导培养基,以提高菌体产量及可溶性的重组rHAP蛋白含量。选取蛋白胨、酵母提取物、甘油、葡萄糖为因素,各取4个水平,采用正交表L16(45)进行试验设计,对影响菌体生长和可溶性rHAP表达水平的乳糖浓度进行了优化。结果表明自诱导培养基碳氮源的最优配比:2%蛋白胨,1.5%酵母,0.5%甘油,0.03%葡萄糖,0.2%乳糖。此时表达菌密度OD600和可溶性rHAP目标蛋白表达量分别是未优化前的2.04倍和2.85倍。在20 L发酵表达时,rHAP工程菌OD600值高达93,菌体湿量为1 620 g/20 L。利用Q-Sepharose和SP-Sepharose纯化,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白。

海洋红树林内生真菌产抗肿瘤活性化合物1403C发酵条件的优化

康丽;蔡孟浩;范卫民;陆健;周祥山;张元兴;

2011, 0(12): 199-204.

摘要 ( 98 )

PDF (1661KB) ( 388 )

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旨在考察pH、溶解氧和剪切力对Halorosellinia sp.(No.1403)发酵过程的影响。结果表明,在发酵中后期及整个发酵过程中控制发酵液的pH恒定对菌体的生长影响不明显,但在不同发酵时期控制不同的恒定pH值对1403C的产量影响较大。仅在发酵的前24 h控制恒pH7.0,有利于菌丝的生长,但抑制1403C的生物合成,菌体干重为对照组的159.1%,1403C的产量仅为对照组的29.4%;从48 h开始控制恒pH7.0,有利于1403C的生物合成,菌体干重量为对照组的94%,1403C的产量为对照组的123.2%;适量的溶解氧和剪切力有利于1403C的生物合成;从48 h开始提高剪切力可获得较高的1403C产量,是对照组的151.8%。综上所述,在发酵至48 h时开始控制恒pH7.0,并适当增大剪切力,在整个发酵过程中控制适当充足的溶解氧有利于1403C的合成。

斑马鱼两种转基因方法的比较

柳晓瑜;王豪博;仇雪梅;于旭蓉;刘洋;王秀利;

2011, 0(12): 205-209.

摘要 ( 161 )

PDF (1415KB) ( 892 )

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对斑马鱼(Danio rerio)的两种转基因方法进行比较,分别采用显微注射和电脉冲导入法将携带有GFP报告基因的表达载体质粒导入斑马鱼受精卵,得出电脉冲最佳导入条件为最适电压125 V/cm,电阻50Ω,最佳导入时期为1-2细胞期(40-50 min),以及最佳外源基因浓度为300 ng/μL。利用两种方法均得到转GFP基因的斑马鱼,而两种方法对比的结果表明,显微注射法耗时费力,但转基因阳性率高;电脉冲法一次可以处理大批量受精卵,但转基因阳性率远低于显微注射法。

Cr_2O_3-TiO_2吸附产酸克雷伯氏菌HP1氢酶的可见光光解水产氢研究

倪恒旺;邬小兵;刘健;龙敏南;

2011, 0(12): 210-214.

摘要 ( 88 )

PDF (1385KB) ( 308 )

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以钛酸四丁酯和重铬酸铵为原料,采用溶胶凝胶法制备了Cr2O3-TiO2,利用浸渍吸附法将产酸克雷伯氏菌氢酶与Cr2O3-TiO2偶联。研究了搅拌速率、pH、温度等条件对Cr2O3-TiO2吸附氢酶的影响。结果表明,Cr2O3-TiO2在270、440和600 nm附近有明显的吸收峰。Cr2O3-TiO2吸附氢酶的最佳条件为温度37℃,pH7.0,搅拌速率100 r/min,该条件下氢酶的吸附率达到80%以上。在氢酶负载量为10%(W/W)、60 W白炽灯光源光照度条件下,Cr2O3-TiO2-氢酶催化光解水产氢速率为10μL/min.g,是Cr2O3-TiO2催化光解水产氢速率(3μL/min.g)的3.33倍,反应体系中加入终浓度为0.05 mmol/L的甲基紫晶(methylviologen,MV)及0.05 mmol/L Na2S2O4可显著提高Cr2O3-TiO2-氢酶光催化产氢速率,达110μL/min.g。在相同条件下,P25型TiO2仅有微量氢产生。结果表明,Cr2O3-TiO2能利用可见光光解水产氢,氢酶与Cr2O3-TiO2偶联可显著提高可见光光解水产氢活性。

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