生物技术通报

五大类传统植物激素对植物响应盐胁迫的调控

姚曼红;刘琳;曾幼玲;

2011, 0(11): 1-5.

摘要 ( 98 )

PDF (269KB) ( 1140 )

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综述盐胁迫下5大类传统植物激素的含量变化及外施植物生长调节剂对植物耐盐性的影响,阐述植物激素对植物响应盐胁迫应答的调控机制。

植物HAP3转录因子研究进展

刘亚静;张盾;张凌云;

2011, 0(11): 6-11.

摘要 ( 88 )

PDF (293KB) ( 600 )

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HAP(NF-Y或CBF)是一类重要的转录因子,可以与CCAAT框结合并控制基因的表达,广泛分布于酵母、哺乳动物及植物细胞中。在哺乳动物和植物细胞中,HAP复合体包括3个不同的亚基:HAP2/NF-YA/CBF-B、HAP3/NF-YB/CBF-A及HAP5/NF-YC/CBF-C。HAP3转录因子在植物胚胎发育、叶绿素生物合成、花期调控等方面有重要作用。介绍植物HAP3转录因子结构特点、生物学功能等方面的最新研究进展。

国外牧草基因组学和转基因技术研究进展

井赵斌;俞靓;魏琳;程积民;

2011, 0(11): 12-25.

摘要 ( 197 )

PDF (520KB) ( 666 )

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禾本科和豆科牧草在动物生产、水土保持和环境保护中发挥着重要的作用。随着现代生物技术的发展,以优异基因型品种间多次杂交培育的合成品种为主的传统常规育种方法与以基因组学和转基因为核心的分子育种技术相比,挑战和机遇并存。与主要农作物相比,牧草作物基因组学及其转基因研究尚处于发展阶段。目前,牧草基因组学及转基因在以黑麦草属(Lolium)和羊茅属(Festuca)为代表的禾本科牧草及以三叶草(Triflolium)和苜蓿(Medicago)为代表的豆科牧草中已有较多研究,就现代生物技术在国外牧草遗传育种中的方法、应用及最新研究进展进行综述,旨在为我国牧草常规和转基因育种提供方法参考及思路借鉴。

组学技术及其在食品科学中应用的研究进展

王龑;许文涛;赵维薇;郝俊冉;黄昆仑;

2011, 0(11): 26-32.

摘要 ( 269 )

PDF (293KB) ( 977 )

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后基因组时代的主要研究任务即是组学(转录组学、蛋白质组学及代谢组学)研究,其发展迅速,有望成为解决生命科学领域诸如食品品质与安全等科学问题的有力工具。组学研究为食品科学相关研究提供了新的思路和技术,在食品加工、贮藏、营养素检测、食品安全以及食品鉴伪等领域中已有广泛的应用。综述转录组学、蛋白质组学及代谢组学研究的核心技术,以及组学技术在食品科学研究中的研究进展,并对其应用前景进行展望。

草本纤维提取技术中的β-甘露聚糖酶研究

郑科;刘正初;

2011, 0(11): 33-40.

摘要 ( 77 )

PDF (362KB) ( 599 )

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采用生物法提取草本纤维是纤维质产业的重要发展方向,而利用β-甘露聚糖酶降解非纤维素物质中的甘露聚糖是纤维生物提取技术中的关键环节。分析β-甘露聚糖酶降解和脱除非纤维素物质的机制,总结主要应用于生物脱胶和生物制浆领域的β-甘露聚糖酶及有关微生物的研究进展,提出草本纤维提取技术未来的重点研究方向,并对β-甘露聚糖酶的应用前景进行展望。

海洋微生物纤维素酶的研究进展及其应用

刘杰凤;薛栋升;姚善泾;

2011, 0(11): 41-47.

摘要 ( 113 )

PDF (300KB) ( 654 )

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海洋极端酶因在极端环境中具有更高的酶活性及更好的稳定性,因而具有重要的理论价值和工业应用前景。随着海洋微生物极端酶的研究开发,海洋微生物纤维素酶的研究也逐渐受到学者们的关注,并取得了较大进展。综述迄今为止分离出的产纤维素酶的海洋微生物种群及其酶学特性,海洋微生物纤维素酶基因克隆与表达的国内外研究现状,分析海洋微生物纤维素酶潜在的应用价值及未来发展前景。

溶藻微生物的研究进展

彭玉辅;刘丽;魏大巧;夏雪山;

2011, 0(11): 48-53.

摘要 ( 71 )

PDF (268KB) ( 631 )

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溶藻微生物在防治有害藻类水华中的作用和潜力,已受到学者的广泛关注。综述溶藻微生物(主要是溶藻细菌和噬藻体)的溶藻作用机制,量效关系及分子生物学。阐述溶藻微生物对蓝藻水华治理存在的问题,并对溶藻微生物作为潜在的控藻因子进行展望。

细菌趋化性的信号传导及调节机制研究进展

李茹;陈鹏;

2011, 0(11): 54-57.

摘要 ( 176 )

PDF (208KB) ( 1952 )

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近年来,人们对细菌趋化性系统中的蛋白质生化和结构方面的认识逐渐加深,其调节趋化反应的信号传导系统在原核生物中较为保守,其中对大肠杆菌的趋化性研究得最透彻,为理解其他信号传导机制提供了有力的参考依据。详细介绍细菌趋化性的信号传导机制,并对包括趋化反应调节蛋白CheY的蛋白质结构以及两种修饰方式的趋化性调节机制最新进展进行了综述。

GAST家族基因及蛋白研究进展

白英男;冯丹丹;林军岳;冯娟;任正隆;

2011, 0(11): 58-62.

摘要 ( 55 )

PDF (932KB) ( 408 )

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GAST(GA-stimulated transcript)家族基因是在植物中发现的、表达受GA诱导的一类基因,其编码的蛋白由N-末端信号肽、中间不同长度的亲水区域,以及含有12个保守半胱氨酸的C-末端(简称GASA区域)组成。至今,GAST家族基因已经在多种植物中被发现并报道。它们在植物不同组织、不同发育阶段表达,参与了细胞分裂、细胞延伸、根发育、果实成熟、抗菌及抗氧化等多种生理学过程。综述近年来各种植物中报道发现的GAST基因的时空表达图谱、蛋白质定位及外源因素对其转录水平调控方面的研究。同时,对其结构、功能及与富含Pro蛋白的关联等方面存在的问题进行讨论。

NF-κB免疫生物学作用的研究进展

孙静静;邵军军;常惠芸;

2011, 0(11): 63-69.

摘要 ( 68 )

PDF (304KB) ( 1343 )

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25年前首次发现NF-κB,其是免疫系统中诱导基因表达的重要调节因子,在免疫系统的发育和功能中发挥着重要的生物学作用。固有免疫和适应性免疫,免疫系统中各组织和细胞的发生和发育等过程都受转录因子NF-κB家族的调控。尽管有关NF-κB研究已经很成熟,但仍有许多新的重大发现。综述此领域的新的研究进展,从而为NF-κB在免疫生物学中的应用提供更广阔的视角。

内含肽介导的蛋白连接技术及其应用

赵仲麟;袁超;朱伟;宋晓燕;李聪;马斌强;

2011, 0(11): 70-73.

摘要 ( 131 )

PDF (366KB) ( 965 )

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内含肽介导的蛋白质剪接是一种自发的翻译后事件,内含肽可介导其自身从前体蛋白上切除,同时将其两侧的外显肽连接起来。在过去10多年中,基于蛋白质剪接原理发展出的蛋白连接技术被广泛的用于蛋白质工程的研究中。这些技术打破了化学合成方法中对目标物大小的限制,有助于化学和生物学的研究。针对近年由蛋白质连接演化出来的新技术及其应用做简要的阐述。

SRAP分子标记在园林植物遗传育种中的应用

史倩倩;王雁;周琳;任磊;

2011, 0(11): 74-78.

摘要 ( 92 )

PDF (270KB) ( 657 )

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相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)分子标记作为一种新型的分子标记技术,以其多态性高、稳定性高、重复性好、操作简便、效率高及成本低等优点,已经在园林植物中广泛应用。简单介绍SRAP标记的原理和特点,综述其目前在遗传多样性评析、亲缘关系分析、遗传图谱构建、种质资源鉴定及基因克隆与基因定位等方面的研究进展,并对该标记在园林植物的遗传育种的应用前景进行了展望。

高效删除标记基因的Bhlea2植物表达载体的构建

邹璐琳;魏建华;王宏芝;张少斌;

2011, 0(11): 79-82.

摘要 ( 81 )

PDF (295KB) ( 326 )

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为培育去除选择标记基因的耐旱转基因植物,同时利用Cre/Lox和FLP/frt系统,构建一个能够高效删除标记基因的Bhlea2基因植物表达载体。拟南芥rd29A启动子是在低温、干旱、高盐胁迫下的快速应答启动子,玉米ubiquitin启动子可有效驱动外源基因的转录,拟南芥pAB5启动子是花粉及胚胎等发育早期特异表达的启动子,利用上述启动子构建了表达Bhlea2基因并能够删除标记基因的植物表达载体。该表达载体包括重组酶表达元件pAB5-FLP、Bhlea2抗旱基因表达元件rd29A-Bhlea2和bar标记基因表达元件ubiquitin-bar。

甜瓜乙烯信号转导途径关键因子基因CTR1的克隆及表达特性分析

姚远;高峰;郝金凤;哈斯阿古拉;

2011, 0(11): 83-87.

摘要 ( 85 )

PDF (336KB) ( 479 )

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在拟南芥中,CTR1在乙烯信号转导途径中发挥重要的负调控作用。目前的研究表明,在拟南芥中只存在一个CTR1基因。利用RT-PCR技术从甜瓜果实中克隆得到CTR1基因cDNA(Cm-CTR1)。Cm-CTR1 cDNA全长2 613 bp,编码870个氨基酸。氨基酸序列比对和同源性分析表明,所克隆的甜瓜CTR1基因与拟南芥CTR1基因相似度为53.69%。Cm-CTR1的C-末端具有明显的类似于哺乳动物和果蝇中的Raf(retro-viral protein,V-raf)蛋白激酶家族的丝/苏氨酸蛋白激酶(Serine/threonine protein kinase)的特征。该结构具有所有已知蛋白激酶所共有的11个亚结构域,其中包括ATP结合位点和丝/苏氨酸蛋白激酶位点结构域,说明CmCTR1与其他植物CTR1相似。实时荧光定量PCR分析结果表明,从授粉后第15天到第20天,甜瓜果实Cm-CTR1基因表达量显著增加,第20天的表达量是第15天的2.5倍,之后表达水平趋于稳定,第40天到第45天表达量有所下降。

缺刻缘绿藻脂肪酸延长酶基因在拟南芥中的表达分析

于水燕;陈颢;周志刚;

2011, 0(11): 88-94.

摘要 ( 78 )

PDF (943KB) ( 386 )

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缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa)系单细胞淡水绿藻,能够大量合成并积累花生四烯酸(arachidonic acid,ArA,20:4ω6),尤其在氮饥饿条件下。基于该绿藻中的延长酶基因序列构建双元表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导侵染拟南芥(Arabidopisis thaliana),筛选得到携带MiFAE基因的拟南芥转化株。在转基因第3代(T3)植株中应用PCR扩增目的基因片段和GUS染色,分别在DNA、mRNA和表达水平上均成功地检测到MiFAE基因的存在。GC-MS对不同组织甲酯化的脂肪酸进行检测,结果表明,在转基因的拟南芥营养生长期的叶片中,十六碳三烯酸(hexadecaterienoic acid,C16:3^7,10,13)和α-亚麻酸(α-linolenic acid,C18:3^9,12,15,ALA)在总脂肪酸中的百分含量与对照组相比明显下降,分别由10.5%和41.5%降到1.8%和19.6%。结合GUS染色结果,推测这些减少的产物可能通过外源MiFAE基因的作用,直接参与了蜡质或角质的合成代谢途径。

染色体重组对转基因大麦中gfp基因表达的作用

苏琰;黎华;刘知晓;张小蒙;朱雪;金赫日;陈建民;

2011, 0(11): 95-100.

摘要 ( 86 )

PDF (416KB) ( 370 )

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利用5种转绿色荧光蛋白基因(gfp)大麦不同株系及野生型大麦为材料,对不同转基因株系间以及转基因株系与野生型植株间进行杂交,分别对不同世代植株的根尖、花粉中gfp基因的表达量进行测定。结果表明,不同转基因株系间的根尖、花粉的gfp基因在表达量上存在差异,同一转基因材料的gfp基因表达存在组织差异;gfp基因在杂交后代中作为一个显性基因以孟德尔方式稳定遗传,不同染色体上的gfp基因重组有利于提高转基因表达。

广西巴马小型猪血清淀粉样P物质基因真核载体构建及细胞转染

杨柳;潘斌;蒋钦杨;覃庆飞;梁家充;兰干球;蒋和生;郭亚芬;

2011, 0(11): 101-106.

摘要 ( 75 )

PDF (1688KB) ( 535 )

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血清淀粉样P物质(Serum Amyloid Pcomponent,SAP)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用。以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出相应cDNA片段,连接到克隆载体pMD18-T上进行检测,测序结果为675 bp,与GenBank所提供相关序列同源性为100%,并成功构建pEGFP-N1-SAP重组真核表达载体,利用脂质体(Lipofectamine 2000)介导法将重组质粒导入到NIH-3T3细胞中培养,经转染24 h后,置于倒置荧光显微镜下观察,发现含有重组质粒的NIH-3T3细胞中表达出绿色荧光,为进一步研究SAP基因的功能特点及在试验动物相关疾病模型的应用提供条件。

小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化

梁伟;肖红;高笑宇;杜晓媛;汪慧;郭旭东;刘东军;

2011, 0(11): 107-117.

摘要 ( 104 )

PDF (1621KB) ( 542 )

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旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA(6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC。从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确。采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)%。经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中。成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3∶10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆。为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞。

草鱼瘦素受体基因片段序列的克隆及其组织表达分析

吴小凤;李小勤;冷向军;关磊;郭婷;

2011, 0(11): 118-124.

摘要 ( 92 )

PDF (747KB) ( 442 )

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根据斑马鱼、大西洋鲑和人等物种已知的瘦素受体基因核苷酸保守区序列设计一对简并引物,通过RT-PCR法从草鱼肝胰脏中首次克隆获得草鱼瘦素受体基因的片段序列。该片段序列长713 bp,编码237个氨基酸,氨基酸序列分析表明草鱼瘦素受体基因片段氨基酸序列与其他物种的相似性在35%-86%之间。通过邻接法(Neighbor Joining,NJ)构建系统进化树显示,鱼类的瘦素受体独立聚成一支,草鱼与金鱼、斑马鱼聚成一支,再与日本青鳉、黑点青鳉、红鳍东方鲀和大西洋鲑聚成一支。通过实时荧光定量PCR分析草鱼瘦素受体基因的组织差异表达,结果表明,草鱼瘦素受体基因在肝胰脏、肌肉、脑、心脏、脾和肠系膜脂肪组织中均有表达,其中在脾脏组织中表达量最多,显著高于其他组织(P<0.05),其次是心脏、脑、肌肉和肠系膜脂肪组织,在肝胰脏组织中表达量最低,且显著低于其他组织(P<0.05)。

大黄鱼肝细胞肿瘤相关抗原-127基因克隆及分子特征分析

崔馨元;薛良义;

2011, 0(11): 125-129.

摘要 ( 76 )

PDF (976KB) ( 405 )

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在构建大黄鱼肌肉组织cDNA文库的基础上,克隆了肝细胞肿瘤相关抗原-127基因。克隆到的基因全长1 439bp,其中5'-UTR 124 bp,3'-UTR 640 bp,编码序列675 bp,编码224个氨基酸。生物信息学分析显示,大黄鱼HCA127基因存在多个功能位点,即N端糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和亮氨酸拉链结构位点。大黄鱼HCA127氨基酸序列具有较高的保守性,与斑马鱼、胡瓜鱼、大西洋鲑等多种鱼类的相似性在80%以上。在检测的9种组织中,肝细胞肿瘤相关抗原-127基因在肝、肾、肠、鳃、眼、脑组织中表达,其中在脑组织中表达最强,肝和鳃组织中次之,肾和眼组织中表达较微弱。

美洲棉铃虫细胞中dsRNA介导的egfp基因沉默分析

赵淑玲;梁昌镛;李敏;王海花;张高瞻;

2011, 0(11): 130-133.

摘要 ( 112 )

PDF (383KB) ( 357 )

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为了分析在美洲棉铃虫细胞(HzAM1)内RNAi的效果,将egfp基因克隆到含有双向T7启动子/终止子的质粒载体中,在体外合成全长的增强型绿色荧光蛋白(egfp)基因dsRNA,将dsRNA和含有能在昆虫细胞内表达eGFP的质粒一起转染HzAM1细胞,分析dsRNA对eGFP表达的抑制作用。结果显示,由egfp基因转录的长dsRNA能有效抑制HzAM1细胞内eGFP的表达,而且该抑制作用表现为剂量依赖效应。但是抑制作用并不彻底,在高剂量的dsRNA处理下,仍有部分细胞内能观察到eGFP的表达。

人Cε3-Cε4基因克隆、表达及纯化复性

刘中成;时海浪;张艳芬;赵丽君;王培莹;常斌;李雨诗;

2011, 0(11): 134-139.

摘要 ( 84 )

PDF (826KB) ( 394 )

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利用RT-PCR技术从变态反应疾病患者外周血淋巴细胞中克隆出人Cε3-Cε4基因,将其克隆至原核表达载体pET-17b中,转化大肠杆菌并进行诱导表达,SDS-PAGE后Cε3-Cε4蛋白表达量占细菌总蛋白的30.7%。菌体经裂解、2 mol/L尿素洗涤后,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达85.5%。用8 mol/L尿素溶解包涵体,经Ni-NTA柱对变性状态下的目的蛋白进行纯化,并利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,最终目的蛋白纯度为95.3%。Western blotting方法对Cε3-Cε4蛋白进行鉴定,为该蛋白的进一步相关研究奠定基础。

构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞

王玮;袁建龙;金永;朱兵;岳群华;梁浩;郭旭东;刘东军;仓明;

2011, 0(11): 140-145.

摘要 ( 58 )

PDF (906KB) ( 435 )

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旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。

重组人胰激肽原酶在大肠杆菌中的表达

侯乐锋;陈劲春;卢嘉宝;

2011, 0(11): 146-149.

摘要 ( 102 )

PDF (346KB) ( 346 )

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根据人胰激肽原酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子,设计合成目的基因片段约750 bp。将设计得到的片段连接到pET-22b(+)表达载体中并测序,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达。将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量24 kD处可明显观察到高表达带,主要以包涵体形式存在,质量分数可达21.6%,进一步测得蛋白活性为2.27 nmol/s。利用MALDI串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定蛋白,蛋白得分106,大于可信得分83(P<0.05),确定了蛋白一级结构的正确性。

氧化苦参碱下调免疫细胞TLR7 mRNA的表达

高小琪;彭丽娜;李力;邱亚峰;繆剑华;徐永莉;史子学;邵东华;魏建超;马志永;

2011, 0(11): 150-153.

摘要 ( 79 )

PDF (289KB) ( 426 )

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为了探讨氧化苦参碱对免疫细胞Toll-like receptor 7(TLR7)mRNA表达的影响,使用CCK-8试剂盒检测氧化苦参碱对RAW264.7细胞的生长抑制作用。应用荧光定量PCR方法检测氧化苦参碱对RAW264.7细胞TLR7 mRNA及其下游因子TNF-αmRNA表达的影响;检测氧化苦参碱对小鼠脾脏淋巴细胞TLR7 mRNA及其下游因子MyD88、TRAF-6 mRNA表达的影响。结果显示,氧化苦参碱对RAW264.7细胞的半数抑制率为5.9 mg/mL。氧化苦参碱下调RAW264.7细胞TLR7、TNF-αmRNA表达;下调小鼠脾脏淋巴细胞TLR7、MyD88、TRAF-6 mRNA表达。由此得出,氧化苦参碱可下调免疫细胞TLR7mRNA的表达。

碱性α-淀粉酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究

金辉;廖思明;王青艳;刘筱梦;黄日波;

2011, 0(11): 154-159.

摘要 ( 85 )

PDF (596KB) ( 538 )

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将已克隆的碱性α-淀粉酶基因信号肽编码序列去除,用PCR的方法加入酶切位点,然后与表达载体pHIS1525连接转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5α-pHIS1525-JH,并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌YYBm1原生质体,获得基因工程菌YYBm1-pHIS1525-JH。SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达。酶学性质研究表明,该酶的最适温度与pH值分别为60℃与pH8.5,在pH7.0-10.5之间具有较好的稳定性,Km值为1.94 mg/mL,酶活力可达2 516.5 U。

青霉菌聚半乳糖醛酸酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

曹威;张宇宏;张伟;

2011, 0(11): 160-165.

摘要 ( 85 )

PDF (753KB) ( 373 )

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筛选得到一株能分解果胶的青霉菌(Penicillium sp.),使用简并引物PCR和TAIL-PCR方法从该菌中克隆了一个聚半乳糖醛酸酶基因pgp1。pgp1基因全长1 225 bp,包含2个内含子,其cDNA全长1 104 bp,编码367个氨基酸和一个终止密码子,前18个氨基酸为信号肽序列。将pgp1基因连接pPIC9载体,在巴斯德毕赤酵母表达系统中进行了异源表达。在3L发酵罐水平,培养基中聚半乳糖醛酸酶活力达到700 U/mL。酶学性质测定表明,重组酶蛋白PGP1的最适pH为5.0,在pH4.0-6.0下处理1 h后,剩余酶活力超过90%;最适温度为38℃,以聚半乳糖醛酸为底物,PGP1的Km=(1.172±0.169)mg/mL,Vmax=(0.061±0.002)mg/min/mL。

大丽轮枝菌分泌蛋白激发子的分离纯化及生物功能研究

王炳楠;杨秀芬;曾洪梅;邱德文;

2011, 0(11): 166-171.

摘要 ( 109 )

PDF (710KB) ( 590 )

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利用硫酸铵沉淀、KTA explorer 10蛋白纯化仪、非变性电泳、割胶电洗脱等方法,从大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae)发酵液中分离纯化出一种蛋白激发子,经SDS-PAGE电泳检测单一条带,相对分子量为20 kD。该蛋白激发子能够诱导烟草的过敏反应,处理6 h后,处理部位出现水渍状,24 h后出现坏死斑。该激发子可以诱导烟草细胞在较短时间内产生防卫反应信号分子H2O2和NO,并引起活性氧爆发。

GST-HRB融合蛋白的表达与纯化

刘丽杰;高学娟;刘小会;陈妙娟;朱森;刘朗夏;

2011, 0(11): 172-176.

摘要 ( 70 )

PDF (434KB) ( 1019 )

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构建GST-HRB重组质粒,进行融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用PCR扩增及基因重组技术,以pcDNA-3.1-HRB为模板扩增出HRB全基因序列,并将其插入带有GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建GST-HRB融合蛋白表达质粒。然后,将重组质粒GST-HRB转化至大肠杆菌Rosseta进行融合蛋白的表达。利用GST琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化,最后应用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定纯化的融合蛋白。结果表明,成功构建pGEX-6P-1-HRB原核表达载体,表达及纯化了GST-HRB融合蛋白。

报春PF sHSP 17-1基因转化拟南芥及耐热鉴定

张路;胡伟娟;张启翔;高亦珂;石少川;王叶;

2011, 0(11): 177-181.

摘要 ( 73 )

PDF (344KB) ( 365 )

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根据灰岩皱叶报春PF sHSP 17-1热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因,并构建pCAMBIA1301-PF sHSP 17-1植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野生型对照进行高温胁迫,分析其耐热性差异。结果显示,在40℃、42℃、44℃处理下,转基因拟南芥的相对电导率和丙二醛含量升高的幅度均显著低于野生型对照,而脯氨酸含量的积累明显高于对照,可溶性蛋白的含量在热胁迫下也比对照稳定,仅有轻微下降。试验证明,PF sHSP 17-1基因对植物的耐热性有重要作用。

农杆菌介导拒食蛋白XnAFP2转化恢复系多系一号的研究

盛德鹏;玉山江·麦麦提;郭立华;曾洪梅;杨秀芬;袁京京;邱德文;

2011, 0(11): 182-186.

摘要 ( 49 )

PDF (711KB) ( 353 )

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拒食蛋白是从嗜线虫致病杆菌北京变种CB6菌株分离得到的对多种昆虫具有拒食、抑制生长发育作用的毒性蛋白,通过根癌农杆菌介导转化法将极拒食蛋白基因导入XnAFP2多系一号基因组,获得了转基因水稻植株。通过PCR、RT-PCR和Southern blot验证目的基因的整合和表达。

长江中下游黄鳝遗传多样性的微卫星分析

周宇芳;胡杭娇;张龙韬;舒妙安;

2011, 0(11): 187-192.

摘要 ( 81 )

PDF (296KB) ( 407 )

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为了解我国长江中下游地区野生黄鳝(Monopterus albus)的种质资源现状,利用黄鳝微卫星分子标记分析我国长江中下游4个黄鳝野生群体(湖北群体、安徽群体、江苏群体和浙江群体)的遗传多样性水平。通过磁珠富集法获得50个黄鳝微卫星序列,设计并合成了30对微卫星引物,经筛选得到8对多态性稳定的引物,均为高度多态位点。每对引物扩增得到等位基因数12-26,平均等位基因数17。4个群体的平均多态信息含量分别为0.804、0.864、0.824和0.736,平均等位基因数分别为9.13、11.00、9.00和7.25,平均期望杂合度分别为0.865、0.918、0.882和0.813,表明4个黄鳝群体遗传多样性丰富,其中安徽群体遗传多样性水平最高,浙江群体相对较低。4个群体间遗传分化指数(FST)为0.031 2-0.096 5,6.28%的遗传变异存在于群体间,表明4个群体间存在一定的遗传分化。聚类分析显示,浙江群体与安徽群体先聚在一起,再与江苏群体聚为一支,湖北群体单独聚为一支。

磁珠富集法筛选大弹涂鱼CA微卫星序列

张晓菊;薛良义;林天势;蔡灿;

2011, 0(11): 193-198.

摘要 ( 63 )

PDF (882KB) ( 454 )

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以大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)基因组DNApool为材料,构建基因组PCR文库,采用链霉亲和素包被的磁珠富集法筛选目的片段。目的片段经克隆、测序验证后获得大弹涂鱼微卫星序列。在筛选的409个菌落中共获得209个阳性克隆,其中具有144个微卫星序列(GenBank登录号为HQ852252-HQ852395),除去重复测序和侧翼链不足的序列,可以设计引物的微卫星序列有117条。

棕色棉F3'H-羟化酶基因的克隆与生物信息学分析

梁明炜;刘海峰;肖向文;陆雪莹;李艳红;宋武;鲁春芳;李晓波;

2011, 0(11): 199-206.

摘要 ( 116 )

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根据葡萄的类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因全长cDNA序列Blast所得棉花的EST序列设计引物,以开花后16 d(DPA16)的新彩棉5号(XC-5)纤维为材料,利用RACE和RT-PCR技术分离得到了2个类黄酮3'-羟化酶基因cDNA序列,此2个序列编码区完全相同,仅在3'UTR区存在片段长短的差异,推测可能是基因转录后加工方式不同所造成。克隆所获得的棉花F3'H基因编码区全长1 533 bp,编码510个氨基酸,氨基酸序列分析预测表明,该基因所编码蛋白含有一个跨膜结构域,是一种分泌蛋白,定位于内质网上,并含有一段与细胞色素P450功能区相匹配的保守功能域;序列比对结果表明,棉花F3'H基因与其他多个物种的F3'H基因在氨基酸序列上有较高的同源性;聚类分析结果表明,棉花F3'H蛋白与双子叶植物大豆的F3'H亲缘关系较为接近,而与单子叶植物高粱等作物则较远。

平榛AGAMOUS基因的克隆与生物信息学分析

陈新;王贵禧;梁丽松;马庆华;

2011, 0(11): 207-211.

摘要 ( 92 )

PDF (1694KB) ( 396 )

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以野生平榛(Corylus heterophylla Fischer)为试材,采用RT-PCR方法从花芽中获得了一个平榛AGAMOUS基因cDNA,命名为ChAG,GenBank登录号为JN828811。序列分析结果表明,ChAG基因编码一个长度为726 bp,编码241个氨基酸的开放阅读框。氨基酸序列分析显示,该基因属于MADS家族AG亚家族。序列比对和系统进化分析表明,ChAG基因与欧榛的亲缘关系最近,相似性达99%。采用生物信息学手段对ChAG基因的保守结构域、疏水性和二级结构等进行分析。

稳定表达HLA-A33蛋白细胞系的建立

王健;邹宁;潘煦文;刘思当;

2011, 0(11): 212-215.

摘要 ( 93 )

PDF (337KB) ( 354 )

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旨在构建能稳定表达HLA-A33蛋白的细胞系,并观察其在细胞中的表达水平。首先克隆取得HLA-A33基因,并将其插入慢病毒载体,经酶切和测序鉴定,确定载体构建正确。通过慢病毒系统感染正常RD细胞,将HLA-A33基因整合进RD细胞的基因组。提取构建细胞系的基因组做PCR鉴定,并通过免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测,结果显示,HLA-A33基因成功整合入RD细胞基因组中,且在重组细胞系中成功表达。该细胞系可为A33等位基因与HBV感染后的慢性化以及EV71感染的相关研究提供试验参考。

依纽小单孢菌接合转移体系的构建

张国华;洪文荣;沈剑锋;樊伟明;

2011, 0(11): 216-220.

摘要 ( 87 )

PDF (491KB) ( 506 )

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以依纽小单孢菌HP变种基因组DNA为模板,扩增位于西索米星3',4'-双脱羟基酶基因sisI上下游序列的两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记ermE基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记。将该外源DNA序列插入到质粒pKC1139,构建重组质粒pFD57。转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入依纽小单孢菌中,经抗性筛选得到两株阳性菌株,命名为HP-I-1和HP-I-2。经PCR验证和测序,结果表明,重组质粒已整合到染色体DNA上。依纽小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化。

FTA卡和普通定性滤纸提取DNA方法研究

徐飞;成述儒;罗玉柱;

2011, 0(11): 221-224.

摘要 ( 210 )

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用FTA采样卡和普通定性滤纸采集藏绵羊血样,采用NaOH法提取血液基因组DNA,利用设计的一对引物对DRB1基因第三外显子进行扩增,通过PCR产物琼脂糖凝胶检测,对普通定性滤纸与FTA采样卡的两种提取DNA的方法进行比较,结果认为采用普通定性滤纸-NaOH法提取血液基因组DNA,NaOH的最佳洗涤浓度是25 mmol/L,采用FTA-NaOH法提取血液基因组DNA,NaOH的最佳洗涤浓度是20 mmol/L,但普通定性滤纸法提取血液基因组DNA平均成本远低于FTA采样卡,普通定性滤纸法提取血液基因组DNA具有快速、便捷、经济及高效的特点。

一种从酵母细胞中提取组蛋白的方法

赵玥;赵宏宇;蔡禄;

2011, 0(11): 225-228.

摘要 ( 138 )

PDF (423KB) ( 633 )

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为了制备体外酵母DNA序列组装核小体所需的组蛋白,利用酸抽提方法从未经饥饿处理和经过不同时间饥饿处理的酿酒酵母细胞中分离组蛋白,经SDS-PAGE电泳分析和Bradford法测定蛋白浓度,发现抽提物中含有组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4,电泳条带位置正确、纯度较高,正常细胞的抽提物中蛋白总量达到158μg/mL。试验结果表明该方法可以提取出较高质量的酿酒酵母组蛋白。

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