生物技术通报

刘羞菲;苗向阳;白林;张红涛;

2007, 0(06): 1-4.

摘要 ( 69 )

相关文章 | 计量指标

精子是高度分化的细胞,它具有潜在的结合外源DNA并在受精过程中将其转入到卵内的能力。随着受精卵的发育,外源基因将随机整合到受体基因组中,部分基因能在成体中表达,部分基因不仅能表达还能遗传给后代。一旦精子能表达外源基因,那么将很容易得到大量的转基因后代。因此,精子能携带外源基因入卵和产量丰富这两大特性使精子作为载体制备转基因动物成为一个简便的途径。精子载体法制备转基因动物无需昂贵的实验设备,亦无需专门的技术。因此,提出后就备受关注。介绍精子介导的转基因动物的制作原理及具体方法的研究进展。

转基因动物研究及其产业化

吴易雄;

2007, 0(06): 5-9.

摘要 ( 71 )

相关文章 | 计量指标

转基因动物研究始于20世纪70年代,至今已在牛、羊、猪、鱼、猴和兔等动物身上取得转基因成功,并广泛用于生产药用蛋白、器官移植和抗病育种等领域,成为当今生命科学中最热门、发展最快的新兴产业。在论述转基因动物发展有利方面的同时,指出了其发展中面临的问题和今后研究的方向及发展前景。

信息交流

2007, 0(06): 9-36.

摘要 ( 77 )

相关文章 | 计量指标

<正>受MeJA诱导的烟草GTs基因启动子的克隆及转化中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室袁磊,刘学群,王春台利用已克隆的1个甲基茉莉酸(MeJA)诱导的糖基转移酶(GTs)基因,以PCR扩增得到该基因启动子序列,其长度约为1.4kb,用改造后的双元载体pCAMBIA1301与GTs基因启动子连接,构建了含目的启动子与GUS基因的融合基因质粒pCAP-GUS,通过根癌农杆菌介导的烟草叶盘转化法转化烟草W38后,经PCR检测验证得到了含有融合基因的转基因烟草植株。此研究为进一步深入研究GTs基因的功能奠定了基础。

鸡球虫入侵机理、免疫学性质及基因工程在疫苗研制上的应用

陈静;丁宏标;乔宇;韩德强;

2007, 0(06): 10-12.

摘要 ( 63 )

相关文章 | 计量指标

鸡球虫病是严重危害养禽业的一种寄生虫病。长期以来主要以化学药物进行防治。但由于球虫抗药性和药物残留等问题日益严重,使得新药开发和应用受到限制。在免疫学中强毒活苗应用广泛但生产费用昂贵,从而促使我们转向对重组亚单位疫苗的研究。不同种类的球虫有较为严格的寄生部位。且不同发育阶段的球虫其免疫原性和抗原构成也有很大差异。在真核寄生生物中,由于受到宿主免疫系统的限制,选用鸡球虫免疫保护性抗原做重组疫苗目前还没有很大突破,因此我们需要采用新方法发现新抗原,有效防治鸡球虫病。

一组特异存在于猪乳中的高分子量蛋白质

张海方;邹思湘;秦宜德;宗亚锋;陈伟华;

2007, 0(06): 13-15.

摘要 ( 61 )

相关文章 | 计量指标

猪乳中含有多种蛋白质,介绍了猪乳中新发现的一组高分子量蛋白质的研究现状,对其生化性质和功能作了综述,并探讨对其进一步研究和开发的重要意义。

植物脂肪酸脱饱和酶特性及转基因研究进展

范妙华;李纪元;范正琪;

2007, 0(06): 16-20.

摘要 ( 64 )

相关文章 | 计量指标

脂肪酸代谢是有机体的基本代谢之一。植物体内首先合成的是饱和脂肪酸,然后在脂肪酸脱饱和酶作用下形成不饱和脂肪酸。目前已经从很多植物中克隆到了脂肪酸合成相关的酶,并对其功能进行了鉴定。详细介绍了近年来应用基因工程技术对植物油中不饱和脂肪酸含量和组分进行改造所取得的进展,并对其在植物抗性育种中的应用进行了展望。

植物组织特异性启动子研究

宋扬;周军会;张永强;

2007, 0(06): 21-24.

摘要 ( 80 )

相关文章 | 计量指标

组织特异性启动子可以调控基因在某些特定的器官或组织部位中表达。通过对植物组织特异性启动子进行分类和比较,概述了植物组织特异性启动子的结构特点、功能及研究进展。

花色改变的分子机理研究

王燕;李思光;王曼莹;

2007, 0(06): 25-27.

摘要 ( 103 )

相关文章 | 计量指标

自1987年世界首例成功运用转基因技术改造矮牵牛花色以来,花色改造基因工程技术不断展现它在培育新花色品系上的无穷魅力。综述了观赏植物花色素的种类、花色素苷的生物合成途径;关键酶的种类;基因工程改变花色的原理和策略以及花色改良方面的研究进展。

转基因海带的研究现状

赵燕清;张泽宇;王秀利;仇雪梅;

2007, 0(06): 28-31.

摘要 ( 74 )

相关文章 | 计量指标

海带是海洋中一种极其重要的经济海藻。转基因技术在海带科研中的应用,将使海带的附加值得到进一步的提高。就海带遗传转化方法,以及转GUS基因、转lacZ基因、转CAT基因、转bar基因等报告基因和转HBsAg基因、转r-PA基因等功能基因海带的研究现状进行了综述。

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子研究进展

王清路;李俏俏;张玉军;张锐;徐寿增;

2007, 0(06): 32-36.

摘要 ( 83 )

相关文章 | 计量指标

hGM-CSF是一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白,在造血调控和免疫调节方面发挥重要作用,具有重要的临床应用价值。总结近些年来各国对hGM-CSF的研究情况,首先对hGM-CSF的基因结构、蛋白分子结构、生物学活性等方面做了详细的介绍;接下来,又从基因转录水平和转录后水平两个方面对hGM-CSF的表达调控做了介绍;最后,对比了利用基因工程技术将hGM-CSF基因在不同生物中的表达情况,详细讲解了优缺点。

单蛋白合成系统研究进展

龚龙树;管正红;程芬;王繁业;

2007, 0(06): 37-39.

摘要 ( 51 )

相关文章 | 计量指标

任何一个蛋白质合成系统的最终目标都是表达所需要的蛋白质(目的蛋白质)而不产生其他的细胞蛋白质。目前,只有两种方法可以成功的表达目的蛋白质:体外无细胞蛋白质合成系统和体内单蛋白生产(SPP)系统。综述现今不同的单蛋白生产系统,讨论他们的应用、优点和缺点。

人造锌指蛋白的应用

郭玉静;许均华;

2007, 0(06): 40-43.

摘要 ( 63 )

相关文章 | 计量指标

C2H2锌指是真核细胞中最常见的DNA结合模体。由于C2H2锌指域靶位点特异性与结构和功能的模块性构成,使得C2H2锌指域成为构建特定的DNA结合蛋白的常用骨架。保持C2H2锌指的基本骨架不变,替换锌指特定位点的氨基酸残基,并融合表达其他功能域就可以得到具有靶向性的人造锌指蛋白(ZFP)。ZFP可以介导靶基因的转录调控,抑制或激活特定基因的表达与配体依赖的靶基因激活或抑制;对DNA进行修饰,如人造限制性内切酶,重组酶,整合酶;抗病毒感染等。因此,人造锌指蛋白应用前景广阔,研究价值显着,是未来人类基因治疗的革命性的工具。

蛋白质结晶的研究进展

李欣欣;徐晓冬;丹媛媛;张密林;

2007, 0(06): 44-47.

摘要 ( 83 )

相关文章 | 计量指标

概括了蛋白质结晶的基本过程,阐述了蛋白质结晶的早期发展历程,重点介绍了蛋白质结晶的近期研究状况,主要包括:形核机理的研究、结晶条件的筛选和结晶技术的优化以及基于结构的药物设计技术。特别是对离子液体在蛋白质结晶过程中的应用及发展前景进行了讨论。

泛素-蛋白酶体途径在病毒感染中的作用

赵朴;郑玉姝;刘兴友;

2007, 0(06): 48-50.

摘要 ( 88 )

相关文章 | 计量指标

泛素-蛋白酶体途径——降解溶酶体外蛋白的主要细胞内系统,在许多细胞功能中发挥重要作用。为自身利益如病毒出芽、凋亡抑制和免疫逃避,许多病毒已经进化出了利用泛素-蛋白酶体途径的不同策略。深入理解泛素-蛋白酶体途径在病毒感染中的作用有助于揭示一些病毒病的致病机理和发现新的分子靶标以开发抗病毒药物。因此,将泛素-蛋白酶体途径在病毒感染中的作用方面的最新进展作一综述。

聚乙烯醇生物降解研究进展

张颖;堵国成;范雪荣;陈坚;

2007, 0(06): 51-54.

摘要 ( 112 )

相关文章 | 计量指标

聚乙烯醇(PVA)是一种在纺织和化工行业中广泛使用的难降解的高分子聚合物。随着人们对纺织工业清洁生产的关注,如何在退浆工艺中就实现对PVA的生物降解、减少PVA废水的排放,并避免化学退浆过程中高温和氧化造成的棉纤维损伤,是近年来纺织生物技术领域的研究热点。由于PVA降解菌种类不多、培养周期长,PVA降解酶酶活不高、提取不容易等原因,使PVA的生化降解研究还局限在PVA降解菌的筛选、PVA降解酶的酶学性质研究等方面,PVA降解酶还未在纺织工业上得到应用。本文综述了近年来国内外在PVA降解菌筛选、PVA降解酶提取及酶学性质、PVA生化降解机理等方面的研究进展,并讨论了PVA生化降解研究中存在的问题及发展方向。

聚丙烯酰胺微生物降解研究进展

秦华明;莫测辉;

2007, 0(06): 55-58.

摘要 ( 115 )

相关文章 | 计量指标

聚丙烯酰胺是一类重要的水溶性高分子聚合物,已广泛应用到工农业生产的各个领域和人们的日常生活中。由于具有良好的理化特性,一直被认为是安全、无毒和稳定的,所以有关其在自然界中的降解及其可能产生毒性的研究在很长一段时期内被忽视。事实上,聚丙烯酰胺在环境中的残留、迁移、降解对环境具有潜在危害性。目前,其应用范围和规模正呈现快速增长趋势,而其研究多集中在其合成和应用方面,对聚丙烯酰胺的降解尤其是生物降解研究极少。

茶条槭及其次生代谢产物没食子酸的研究进展

李海艳;詹亚光;

2007, 0(06): 59-61.

摘要 ( 108 )

相关文章 | 计量指标

综述了茶条槭及其次生代谢产物没食子酸的应用价值和目前的研究概况,探讨了利用细胞培养生产没食子酸的前景。

藻酸盐三维细胞培养在骨组织工程中应用的研究进展

张东;杨克;马忠石;张杰;

2007, 0(06): 62-66.

摘要 ( 76 )

相关文章 | 计量指标

目的综述藻酸盐三维细胞培养系统在骨组织工程中的应用研究进展。方法广泛查阅近年来有关藻酸盐三维细胞培养系统在骨组织工程应用研究的文献进行综述。结果藻酸盐具有良好的生物相容性,无毒、对宿主无免疫原性和生物可降解等独特的物理、化学和生物特性,藻酸盐三维细胞培养系统仍然是迄今理想的骨组织工程支架材料之一。结论藻酸盐三维细胞培养系统不仅将广泛应用于生命科学基础研究,作为一种理想的组织移植的支架材料,有望逐步走向临床应用。

转基因产品免疫学检测技术研究进展

许少鹏;梅曼彤;

2007, 0(06): 67-70.

摘要 ( 61 )

相关文章 | 计量指标

目前转基因产品的检测主要有基于DNA的检测方法以及基于蛋白质的免疫学检测方法,简述了免疫学检测方法中的免疫印迹法(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和试纸条法的原理、特点、应用例子以及存在问题。对一些新的方法如免疫PCR法、生物传感器法也略作介绍。

PCR-SSCP技术的研究及应用进展

李玉梅;姚纪元;吴静;白秀娟;

2007, 0(06): 71-74.

摘要 ( 83 )

相关文章 | 计量指标

阐述了SSCP技术的建立与发展过程;概述了PCR-SSCP技术的原理、方法、优缺点及突变技术研究进展;总结了PCR-SSCP技术在多个领域中(动物育种、基因突变、基因诊断、基因图谱和连锁分析等)的应用情况;分析了PCR-SSCP技术在分子生物学研究领域中的作用。

金黄色葡萄球菌的快速检测方法

袁桂兴;温剑;

2007, 0(06): 75-78.

摘要 ( 103 )

相关文章 | 计量指标

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒常见的病原菌之一,其传统检测方法(选择性培养、生化鉴定)步骤多,操作复杂,耗时长、灵敏性不高。近年来以抗原抗体反应为基础的免疫学方法和以DNA为基础的分子生物学技术以其快速性、准确性已经成为微生物检测方法的发展方向。

生物芯片载体表面处理方法比较研究

董萍;熊平;

2007, 0(06): 79-82.

摘要 ( 59 )

相关文章 | 计量指标

生物芯片因其自身的优越性已成为大批量分析必不可少的工具。针对不同的芯片载体和生物反应的不同要求,出现了许多不同的载体表面处理方法。主要对被动式生物芯片的各种不同的表面处理方法进行了比较,指出了其优缺点。

影响农杆菌转化效率的植物因子H2A1基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建

邹智;吴刚;卢长明;

2007, 0(06): 83-87.

摘要 ( 53 )

相关文章 | 计量指标

拟南芥组蛋白H2A1是影响农杆菌T-DNA整合到宿主基因组的关键因素之一。与其它H2A组蛋白一样,它含有1个保守的H2A结构域。本研究利用PCP技术从拟南芥中成功扩增到H2A1基因组序列的全长。产物纯化后克隆到pBI121(Kmr),从而构建了H2A1的植物表达载体pBI121-H2A1。PCR和DNA测序证实载体构建成功。最后用电击法将该重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌。此表达载体的构建为进一步研究H2A1的功能和提高外源基因在植物中稳定表达水平奠定了基础。

两种滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析

朱先灿;胡鸢雷;王晓丽;祝建波;林忠平;

2007, 0(06): 88-91.

摘要 ( 112 )

相关文章 | 计量指标

甜菜碱醛脱氢酶(Betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)对非生物胁迫下植物渗透调节物质的合成和积累具有重要作用。分别从异苞滨藜和鞑靼滨藜两种盐生植物中分离到了BADH基因。序列分析表明,BADH全长均为1 507bp,编码501个氨基酸,两种BADH序列具有较高的相似性。甜菜碱醛脱氢酶的克隆为植物的基因转化及其功能分析奠定了基础。

侵染万寿菊的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与序列分析

李晶晶;邓召花;曾静;张金方;张飞云;

2007, 0(06): 92-96.

摘要 ( 82 )

相关文章 | 计量指标

应用ELISA的方法检测到感染了黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的万寿菊。根据已报道的CMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计并合成引物,提取万寿菊叶片总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,得到约875bp的片断,与预期片断大小相符。序列分析显示:该分离物CMV-WSJ CP基因全长657bp,编码218个氨基酸,其核苷酸和氨基酸序列与CMV亚组Ⅱ的分离物有很高的同源率,分别达到98.33%～99.24%和98.63%～100%;与CMV亚组I分离物的同源率分别仅为74.43%～76.26%和77.17%～78.99%。因此,从万寿菊叶片上检测出的黄瓜花叶病毒分离物CMV-WSJ应归属于亚组Ⅱ。

一种提取高质量油菜种子和种皮RNA的方法

严明理;刘忠松;官春云;陈社员;刘显军;

2007, 0(06): 97-100.

摘要 ( 94 )

相关文章 | 计量指标

提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究油菜种子和种皮发育的必要条件。现有方法因为油菜种子脂肪、多酚和多糖,难以快速获得完整、高纯度的油菜种子总RNA。本试验针对油菜种子和种皮特点,利用苯酚-氯仿抽提后用无水乙醇沉淀RNA,建立了在油菜种子和种皮中快速提取高质量总RNA的提取方法,电泳分析表明28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍;紫外分光光度计检测A260/A280介于1.8～2.0之间。用该法分离的RNA,已成功用于RT-PCR、Northern blot分析和基因全长的克隆等分子生物学研究。

一种高质量麦冬总RNA的提取方法

刘君;韩烈保;李雪;王月华;

2007, 0(06): 101-104.

摘要 ( 74 )

相关文章 | 计量指标

本方法采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿/异戊醇反复抽提、LiCl沉淀,以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,用DNase处理去除DNA污染,最后用无水乙醇沉淀获得总RNA。该方法不仅能获得完整性好、纯度高的总RNA,而且操作简单、成本低廉、RNA产率高,对富含次生物质的中草药材植物组织总RNA的提取具有借鉴意义。

杨梅基因组DNA提取方法筛选和优化研究

孙志栋;柴春燕;袁妮娜;黄胜利;徐永江;徐小君;

2007, 0(06): 105-107.

摘要 ( 78 )

相关文章 | 计量指标

选择具有代表性的杨梅品种20份,分别采用CTAB法和SDS法,选取嫩叶进行基因组DNA提取比较研究,结果表明,由于叶片中含有较高的酚类物质,相对来说CTAB法优于SDS法,提取的基因组DNA色泽白亮且数量多,而且同一提取方法如CTAB法,不同品种之间提取得率也有较大差异。在CTAB法的基础上,选取两个品种研究水浴时间对DNA提取的影响,发现DNA得率随水浴时间的延长呈现抛物线态势,最佳水浴时间随样品颗粒的大小而变化,一般最佳时间为30～40min,样品颗粒较细时水浴时间以30min为最佳,较粗时则为40min。添加异丙醇量以2/3为好,析出DNA的最佳离心速度和时间分别为5 000r/min和10～15min。

四种广普性植物病毒高效mPCR检测方法的建立

曾静;张飞云;李晶晶;于银霞;王法军;

2007, 0(06): 108-112.

摘要 ( 63 )

相关文章 | 计量指标

本研究建立了能同时检测出烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯Y病毒(PVY)的多重RT-PCR体系。TMV、CMV、PVX、PVY是四种广普性植物病毒,寄主范围广泛,并且常常发生复合侵染。本研究以上述四种病毒的CP基因部分序列设计引物,以反转录的cDNA为模板,建立多重RT-PCR反应体系,分别扩增出211～417bp的不同长度的基因片断,并通过序列测定来确认扩增序列的特异性。将反转录合成的cDNA进行浓度稀释,来对多重RT-PCR与单重RT-PCR的灵敏度进行比较,结果证明,多重RT-PCR体系能够同时快速检测这四种病毒,并且有很高的灵敏度。

α-HNP-1转基因细胞系的建立

高其双;黄海军;欧阳静萍;吴建英;陶弼菲;杨悦;张德玲;蒋思文;

2007, 0(06): 113-116.

摘要 ( 104 )

相关文章 | 计量指标

目的构建稳定表达人α-HNP-1的转基因细胞系,为稳定生产α-HNP-1并将其应用于医药开发提供生产细胞源。方法真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNP-1经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染昆明白小鼠胚胎干细胞来源的上皮细胞,通过不同浓度的G418加压筛选,建立稳定转染的胚胎干细胞来源的上皮细胞系,用RT-PCR及抑菌试验检测α-HNP-1的表达。结果建立了稳定转染的ES来源的上皮细胞系,成功地表达目的基因,其培养上清液及细胞冻融液具有抑菌作用,结论真核表达载体稳定转染胚胎干细胞来源的上皮细胞系,为进一步研究α-HNP-1的功能奠定了基础。

胰蛋白酶抑制剂基因siRNA表达体系的构建

柴晓杰;吕品;张宇;王丕武;

2007, 0(06): 117-119.

摘要 ( 66 )

相关文章 | 计量指标

以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654bp,与已发表的KSTI3基因序列同源性达99%。将反义+正义基因片段插入到pBI121 35S启动子下,构建重组质粒pBIKSTI3。通过冻融法将该重组质粒转入农杆菌EHA105中,获得了siRNA表达体系。利用农杆菌介导法将带有pBIKSTI3的菌株转化大豆,从2棵再生植株中得到2 100bp的特异性扩增条带,而未转化的植株中无该片段的产生。

rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化

罗惠霞;李敏;王玉炯;石晶;

2007, 0(06): 120-124.

摘要 ( 63 )

相关文章 | 计量指标

rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超声破碎次数,包涵体洗涤液(脲,Triton X-100,乙醇)的不同浓度对纯化的影响因素进行了摸索。结果表明,超声2次,2M脲,0.5%Triton X-100,20%乙醇对目的蛋白纯化的效果最好,从而为进一步的纯化和复性奠定基础。

RNA干扰抑制血管内皮生长因子介导结肠癌细胞凋亡

李铁军;王茜;宋建宁;康楷;胡瓒斓;张秉强;向征;张才全;

2007, 0(06): 125-128.

摘要 ( 73 )

相关文章 | 计量指标

目的应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达,并通过体外实验,观察VEGF受抑制后,凋亡情况的变化,为RNA干扰技术的临床应用奠定基础。方法通过Tunel和流式细胞计数的方法,观察VEGF受抑制后,肿瘤细胞凋亡发生率的变化。结果Tunel和流式细胞计数分析显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞凋亡发生率明显增加。结论Tunel和流式细胞计数分析显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞凋亡发生率明显增加。

Maspin在卵巢癌中作用机制的体外研究

乐爱文;袁瑞;耿力;朱元方;姚珍薇;杨环;

2007, 0(06): 129-134.

摘要 ( 58 )

相关文章 | 计量指标

目的:检测卵巢癌细胞中Maspin对细胞增殖能力、VEGF和乙酰肝素酶Heparanase(HPA)表达的影响。方法:构建Maspin真核表达质粒,体外转染卵巢癌SKOV3细胞,磺基罗丹明B法((sulforhodamine B,SRB)检测转染后细胞增殖能力变化,细胞免疫化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测VEGF和HPA的表达。结果:成功构建Maspin真核表达质粒并转染于卵巢癌细胞SKOV3后,证实转染目的基因的SKOV3-Maspin细胞中Maspin表达明显增强;转染Maspin cDNA的SKOV3细胞的体外增殖能力明显弱于转染空载体组和未转染组,而后两者之间差异无显着性;转染Maspin cDNA的SKOV3细胞中VEGF的表达明显弱于转染空载体组和未转染组,而后两者之间差异无显着性;但是HPA的表达无明显改变。结论:Maspin可能通过下调VEGF的表达抑制卵巢癌血管生成。HPA表达与卵巢癌的恶性生物学行为密切相关,但与Maspin无明显相关性。

正常人肝细胞cDNA文库的构建及应用分析

栾慎顺;张敬武;刘恒贵;

2007, 0(06): 135-137.

摘要 ( 71 )

相关文章 | 计量指标

目的利用Gubler-Hoffman法构建了正常人肝细胞的cDNA文库以筛选肝细胞内部与乙肝病毒感染相关的基因。方法首先采用TRIzol法提取正常人肝细胞总RNA,纯化mRNA。逆转录合成单链cDNA,然后合成双链cDNA。用Spin Column回收0.4kb以上片段,然后与Vector pAP3neo进行连接,利用电刺激转化法导入E.coliDH10B,利用PCR法检测文库的重组效率。结果扩增后的文库重组率为93.3%。结论已经成功地构建了正常人肝组织的cDNA文库,该文库可用于筛选与乙肝相关的基因及用于基因芯片的制作。

缢蛏遗传多样性的RAPD分析

于颖;孟祥盈;王秀利;仇雪梅;

2007, 0(06): 138-140.

摘要 ( 64 )

相关文章 | 计量指标

用RAPD(Random amplified polymorphic DNA)技术对大连的养殖缢蛏(Sinonovaeula constrict)群体35个个体的遗传多样性进行了分析。结果表明,14个随机引物,平均每个引物扩增出6条带;共检测到的86个位点,其中多态位点数为43个(占50.0%);个体间遗传距离在0.1503～0.3768之间,平均遗传距离为0.2107;16号和25号缢蛏个体聚类成一大类,另33个缢蛏个体聚成一大类。

PCR-寻靶体系构建棒状链霉菌lat基因插入突变的重组质粒pELA

左志晗;王艳萍;

2007, 0(06): 141-145.

摘要 ( 52 )

相关文章 | 计量指标

本实验将PCR所得的1.8kb的lat基因片段插入到pUCm-T载体的多克隆位点,得到重组质粒pUCm-T-lat,经EcoRI-HindⅢ双酶切后得到lat基因片段,与经同样双酶切的穿梭质粒pGH112进行连接,得到重组质粒pGH112-lat。将其电转至大肠杆菌E.coli BW25113/pIJ790中得到E.coli BW25113/pIJ790/pGH112-lat。同时,根据棒状链霉菌lat基因的序列及质粒pIJ77(3 pIJ773为可提供阿泊拉抗性的模板质粒)中阿泊拉抗性基因(aac(3)iv)的序列设计一对长59nt及58nt的引物,两引物分别含有20nt及19nt的阿泊拉抗性基因的互补序列和39nt的lat基因两端的互补序列,以质粒pIJ773为模板,PCR扩增得到的产物为两端带有lat基因上下游同源序列的阿泊拉抗性基因,将此PCR产物称为阿泊拉抗性框,将此阿泊拉抗性框电转至E.coli BW25113/pIJ790/pGH112-lat转化子中。在质粒pIJ790的作用下,阿泊拉抗性框中两端的lat基因同源序列与pGH112-lat中的野生型lat基因发生同源双交换,使得阿泊拉抗性框插入lat基因中,得到lat基因中插入阿泊拉抗性基因(lat::apr)的重组质粒pELA。该质粒的构建为进一步构建棒状链霉菌lat基因插入阻断的突变株,从而实现克拉维酸产量的提高奠定了初步基础。

杀线虫海洋放线菌的筛选及菌株HA07011的鉴定

雷敬超;李传浩;黄惠琴;蔡海宝;鲍时翔;

2007, 0(06): 146-149.

摘要 ( 81 )

相关文章 | 计量指标

从海南、湛江等海洋环境样品中分离到256株放线菌,运用松材线虫筛选模型进行杀线虫活性菌株的筛选,得到23株对线虫有较高校正击倒率的放线菌。其中菌株HA07011的发酵滤液稀释10倍后对线虫校正击倒率仍达到68.9%,且具有较好的遗传稳定性。根据形态观察、生理生化特征和16S rDNA序列的对比分析,将HA07011归为链霉菌属。

通过基因工程对赖氨酸生产菌B66构建的研究

周盛;武波;黄永春;

2007, 0(06): 150-153.

摘要 ( 89 )

相关文章 | 计量指标

从大肠杆菌E.coli K-12中通过PCR扩增出磷酸果糖激酶编码基因(pfkA),将其与表达载体pCMVTNTTMvector连接构建成重组质粒pKu-2,转化谷氨酸棒杆菌B10,并得到表达。酶活性测定表明pfkA基因在受体菌B66中得到表达水平为(126.6±0.76)U/g蛋白,解除了磷酸果糖激酶对已经改造的赖氨酸的整个代谢途径的限制。同时,转化菌对糖转化率比B10高11.59%,产酸率高16.52%。

pH对S-腺苷-L-蛋氨酸发酵的影响

王昌禄;朱汉春;张晓霞;周庆礼;陈勉华;陈俊伟;

2007, 0(06): 154-156.

摘要 ( 86 )

相关文章 | 计量指标

研究了不同pH控制方式对S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)发酵过程及产量的影响。通过对发酵过程中不控制pH、控制恒定pH、两阶段控制pH和三阶段控制pH实验,研究了不同条件下对菌体干重、葡萄糖代谢和SAM产量的影响。控制合适的pH有利于菌体生长与SAM的生物合成,菌体生长最适pH为6.0,SAM转化最适pH为6.5,采用三阶段控制pH,使SAM产量比不控制pH提高了133%,比控制pH6.5提高了18.6%,比两阶段控制pH提高了10%。

有机复合物H对纤维素CMC酶活的影响

李鸿玉;厉重先;刘雪峥;

2007, 0(06): 157-161.

摘要 ( 67 )

相关文章 | 计量指标

采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)为显色剂,CMC为底物,测定纤维素酶的酶活。考察了在不同的酶促反应温度、pH值、底物浓度、反应时间等反应条件下,有机复合物H对纤维素酶CMC酶活(CMCA)的影响。结果表明,有机复合物H对纤维素酶的CMCA活性有明显促进作用,且在不同条件下的促进效果有较大差异。

生物医学组织工程研究现状和前景(上)

汪开治;

2007, 0(06): 162-164.

摘要 ( 65 )

相关文章 | 计量指标

<正>已知很多病人都需要进行器官移植手术,但可供移植的器官为数有限,杯水车薪,定难满足器官移植的客观需求。例如,在美国,仅2000年就有约72 000个病人,由于已进入器官功能衰竭晚期,而亟需进行器官移植,以解病入膏肓的燃眉之急,但结果只有23 000个病人完成了此种手术(Port,2000)。这一状况促进了组织工程的发展。现将美国耶鲁大学生物医学工程学家E.Lavik和美国麻省理工学院化学工程学家R.Langer共同撰写,并于最近发表的"生物医学组织工程研究现状和前景"一文,择要编译介绍于下。

《生物技术通报》2007年总目次

2007, 0(06): 165-169.

摘要 ( 47 )

相关文章 | 计量指标

<正>~~

《生物技术通报》稿约

2007, 0(06): 170-170.

摘要 ( 51 )

相关文章 | 计量指标

<正>中国农业核心期刊《生物技术通报》系中国农业科学院农业信息研究所与生物技术研究所及中国农学会高新技术农业应用专业委员会共同主办的国家级综合性科技刊物。主要报道国内外农、牧、林、渔及医学、轻化等领域中生物技术研究的新进展、新技术、新成果与发展趋势,内容包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、蛋白质工程以及生物工程的应用、新的实验技术与方法等。

当期目录