基于酵母表面展示技术的胸苷磷酸化酶全细胞催化剂的构建

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.032

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (1): 201-206.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.032

基于酵母表面展示技术的胸苷磷酸化酶全细胞催化剂的构建

王洁, 余磊, 杨东, 李婕, 王洪钟

清华大学生命科学学院, 北京 100084

收稿日期:2015-03-31 出版日期:2016-01-09 发布日期:2016-01-22
作者简介:王洁, 女, 硕士, 研究方向：生物转化及生物催化;E-mail：wangjie08beijing@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(21176138, 21476124)

Construction of Pichia pastoris Surface Display Technology as Whole -cell Biocatalyst for Thymidine Phosphorylase

WANG Jie, YU Lei, YANG Dong, LI Jie, WANG Hong-zhong

School of Life Sciences, Tsinghua University, Beijing 100084

Received:2015-03-31 Published:2016-01-09 Online:2016-01-22

摘要/Abstract

摘要： 胸苷磷酸化酶(TP)在核苷类代谢通路中发挥重要作用, 可催化生成多种核苷类似物。构建了TP的酵母表面展示系统作为全细胞催化剂。从大肠杆菌K12菌株中克隆编码TP的deoA基因, 利用酵母表达质粒pKFS构建重组质粒, 电击转化毕赤酵母GS115菌株。高拷贝阳性转化子经甲醇诱导96 h后, 免疫荧光结果显示TP在酵母细胞表面成功展示。利用β-胸苷为底物, 重组酵母细胞作为全细胞催化剂, 经HPLC检测, 结果表明展示在酵母表面的TP有催化活性, 可以催化β-胸苷生成产物胸腺嘧啶。

关键词: 胸苷磷酸化酶, 全细胞催化, 毕赤酵母, 表面展示

Abstract: Thymidine phosphorylase(TP)extensively involves in nucleoside metabolism and catalyzes the formation of many nucleoside analogs(NA). A yeast cell surface display system for TP was firstly constructed in this study as whole-cell biocatalyst. A deoA gene encoding TP was cloned from Escherichia coli K12 strain and inserted into the yeast expression vector pKFS. Recombinant vector was linearized and electro-transformed into Pichia pastoris GS115 cells. High copy transformant was induced by methanol for 96 h, and the results of immunofluorescence indicated that TP successfully displayed on the surface of P. pastoris. β-thymidine was used as substrate and recombinant GS115 cells as whole-cell biocatalyst, HPLC analysis demonstrated that TP on the surface of P. pastoris had catalytic activity, and catalyzed the production from β-thymidine to thymine.

Key words: thymidine phosphorylase, whole-cell catalysis, Pichia pastoris, surface display

王洁, 余磊, 杨东, 李婕, 王洪钟. 基于酵母表面展示技术的胸苷磷酸化酶全细胞催化剂的构建[J]. 生物技术通报, 2016, 32(1): 201-206.

WANG Jie, YU Lei, YANG Dong, LI Jie, WANG Hong-zhong. Construction of Pichia pastoris Surface Display Technology as Whole -cell Biocatalyst for Thymidine Phosphorylase[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(1): 201-206.

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基于酵母表面展示技术的胸苷磷酸化酶全细胞催化剂的构建

Construction of Pichia pastoris Surface Display Technology as Whole -cell Biocatalyst for Thymidine Phosphorylase

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