]*>","")" /> 内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达

• 论文 • 上一篇    下一篇

内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达

王瑾;邬敏辰;周晨妍;   

  1. 江南大学生物工程学院江南大学生物技术教育部重点实验室,江南大学医药学院,江南大学生物工程学院江南大学生物技术教育部重点实验室 无锡214122,无锡214122,无锡214122
  • 出版日期:2008-06-26 发布日期:2008-06-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(20776061)

  • Published:2008-06-26 Online:2008-06-26

摘要: 根据绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422菌株内切葡聚糖酶基因egⅡ的cDNA序列,设计特异引物,以重组质粒pTG19-T-egⅡ为模板,扩增得到全长1 194bp的egⅡ成熟肽cDNA片段。将该片段分别克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,并在大肠杆菌Rosse(t DE3)和毕赤酵母GS115中进行了表达。重组大肠杆菌表达蛋白占菌体总蛋白的15%,表达产物无内切葡聚糖酶活性。重组毕赤酵母经甲醇诱导实现了分泌表达,在摇床水平上酶活性达到2 788U/ml。酶学性质分析表明,该酶作用的最适pH为4.5,pH 3.5~6.0范围内酶活性保留在80%以上;最适温度为50℃,55℃以下酶的稳定性在90%以上。

关键词: 绿色木霉, 内切葡聚糖酶, 大肠杆菌, 毕赤酵母, 表达, 酶学性质