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人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究

窦文芳;张莲芬;雷楗勇;张立操;陈蕴;金坚;   

  1. 江南大学医药学院制药细胞与分子药理实验室;
  • 出版日期:2008-12-26 发布日期:2008-12-26
  • 基金资助:
    863探索类项目(2006AA10Z449);; 江苏省六大人才高峰计划

  • Published:2008-12-26 Online:2008-12-26

摘要: 以人胰高糖素样肽-1(human glucagons-like peptide-1,GLP-1))为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/(GLP-1A2G)2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度>90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。

关键词: 人胰高糖素样肽-1, 突变体, 表达, 生物活性