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甲醇利用菌SDM11中glyA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

孔庆胜;张向阳;韩晓琳;林强;董全林;   

  1. 济宁医学院;华中科技大学;
  • 出版日期:2010-05-26 发布日期:2010-05-26
  • 基金资助:
    山东省教育厅资助项目(J07YD16)

  • Published:2010-05-26 Online:2010-05-26

摘要: 对甲醇降解菌Methylobacterium.sp SDM11中的glyA基因进行克隆及特性研究,以获得更多的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)资源。根据GenBank中已报道的Methylobacterium extorquensAM1中的glyA基因序列(登录号:L33463)设计引物,以SDM11的基因组DNA为模板,PCR扩增glyA基因。利用pETblue-2载体将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。PCR扩增到一个1.40 kb大小的DNA片段,经过blast软件比对分析,发现该片段与已报道的Methylobacterium extorquensAM1的glyA基因的序列相似性为95%,氨基酸序列的相似性为98%。该基因编码468个氨基酸,预测的分子量大小为52.2 kD,等电点为7.02,发现纯化后的目标蛋白具有SHMT酶活性,并初步测定了酶活力。

关键词: SDM11, glyA基因, 克隆, 表达, SHMT酶