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嗜酸氧化亚铁硫杆菌半胱氨酸合成酶的表达、纯化及其性质鉴定

郑春丽;李艳君;钱林;柳建设;   

  1. 东华大学环境科学与工程学院;内蒙古科技大学数理与生物工程学院;
  • 出版日期:2011-03-26 发布日期:2011-03-26
  • 基金资助:
    全国优秀博士学位论文专项资金资助项目(200549);;国家自然科学基金项目(0874032);; 上海市重点学科建设项目(B604)

  • Published:2011-03-26 Online:2011-03-26

摘要: 半胱氨酸合成酶是半胱氨酸合成反应的关键限速酶,催化了半胱氨酸合成的最后一个步骤。以A.ferro-oxidans ATCC 23270基因组为模板,通过PCR扩增得到编码半胱氨酸合成酶(cysM)的基因,与原核表达载体PLM 1构建重组体,转入大肠杆菌DH5α中,测序正确后,加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出了浓度和纯度都较高的半胱氨酸合成酶。由蛋白颜色和紫外分析,确定是以PLP辅基作为活性中心。表达产物进行SDS-PAGE分析,证实分子量为32 kD。

关键词: 嗜酸氧化亚铁硫杆菌, 半胱氨酸合成酶(cysM), 克隆, 表达, 纯化