柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达

柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达

姜连连;林矫矫;韩红玉;董辉;赵其平;朱顺海;马卫娇;程军;曾艳波;黄兵;

中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室;

出版日期:2011-05-26 发布日期:2011-05-26
基金资助:
上海市自然科学基金项目(09ZR1438700);;中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2011JB01)

Published:2011-05-26 Online:2011-05-26

摘要/Abstract

摘要： 为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583。该基因全长为862 bp,开放阅读框(ORF)为486 bp,编码161个氨基酸,编码蛋白的分子量约为16.9 kD,利用生物信息学分析软件,分析新基因所编码蛋白的性质、定位、结构等特征。利用荧光定量PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段该基因的表达量进行分析显示,子孢子阶段的表达高于其他发育阶段。将ZL583克隆于pET-28a中构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,获得重组蛋白分子量约23 kD。免疫印迹分析显示该重组蛋白可与兔抗子孢子血清发生特异性反应,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。

关键词: 柔嫩艾美耳球虫, 子孢子, 裂殖子, 克隆, 表达

姜连连;林矫矫;韩红玉;董辉;赵其平;朱顺海;马卫娇;程军;曾艳波;黄兵;. 柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达[J]. .

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