寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析

寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析

连英丽;蓝东明;杨博;王永华;

华南理工大学生物科学与工程学院;华南理工大学轻工与食品学院;

出版日期:2011-07-26 发布日期:2011-07-26
基金资助:
广州市重点科技攻关项目(2009A1-E021)

Published:2011-07-26 Online:2011-07-26

摘要/Abstract

摘要： 根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank登录号:AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,应用重叠延伸PCR技术,人工合成了寄生曲霉脂肪酶基因lip AP。将基因克隆到pFL-B13cl载体上获得重组质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达。融合蛋白Sumo-LipAP在0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导6 h表达量最高。SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-Sumo-LipAP以包涵体形式表达,大小约为53 kD。复性后透析处理,大部分融合蛋白转化为正确构象且具有催化活性,经一步疏水层析其纯度可达98%。生物信息学工具预测和分析发现,LipAP空间结构保守,具有催化三联体(Ser173-Asp226-His288)、活性部位盖子(S111YSIRNWVTDAT122)及保守五肽(GHSLG)3个功能域。

关键词: 寄生曲霉脂肪酶基因, 密码子优化, 全基因合成, 原核表达, 生物信息学

连英丽;蓝东明;杨博;王永华;. 寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析[J]. .

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