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重组人胰激肽原酶在大肠杆菌中的表达

侯乐锋;陈劲春;卢嘉宝;   

  1. 北京化工大学生命科学与技术学院;
  • 出版日期:2011-11-26 发布日期:2011-11-26

  • Published:2011-11-26 Online:2011-11-26

摘要: 根据人胰激肽原酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子,设计合成目的基因片段约750 bp。将设计得到的片段连接到pET-22b(+)表达载体中并测序,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达。将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量24 kD处可明显观察到高表达带,主要以包涵体形式存在,质量分数可达21.6%,进一步测得蛋白活性为2.27 nmol/s。利用MALDI串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定蛋白,蛋白得分106,大于可信得分83(P<0.05),确定了蛋白一级结构的正确性。

关键词: 大肠杆菌, 人胰激肽原酶, 表达