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定点突变提高D-氨甲酰水解酶的可溶性表达

袁野;蔡渊恒;姜世民;姜卫红;   

  1. 吉林大学畜牧兽医学院;中科院植物生理生态研究所;
  • 出版日期:2012-01-26 发布日期:2012-01-26
  • 基金资助:
    中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX2-YW-G-018);;

  • Published:2012-01-26 Online:2012-01-26

摘要: 采用定点突变的方法对皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pickettii)来源的D-氨甲酰水解酶(D-carbamoylase,DCase)编码基因的3个位点A18、Y30、K34进行突变,并将获得的突变体基因片段构建入高表达载体pET-28b中,转化E.coliBL21(DE3),获得带有组合三突变(A18E/Y30D/K34E)的DCase-SM表达菌株BL21/pET-DCSM。当以IPTG诱导目的蛋白表达时,发现突变菌株(DCase-SM)与出发菌株(DCase)菌株相比,目的蛋白的可溶性表达显著提高,其可溶蛋白比例约为64%;与出发菌株相比,其单位菌体酶活增加427%;另外,与本实验室前期构建的高可溶性三叠加突变体菌株DCase-M3相比,单位菌体酶活亦增加7.9%。

关键词: D-氨甲酰水解酶, 定点突变, 诱导表达, 可溶性, 酶活